劉龍燕　孟　偉　劉國燕　鄒學(xué)森　陳岳青　王春陽

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SiHa細(xì)胞對(duì)化療藥物聯(lián)合GIK液的敏感性研究

劉龍燕孟偉劉國燕鄒學(xué)森陳岳青王春陽

目的研究宮頸癌SiHa細(xì)胞對(duì)GIK液聯(lián)合化療藥物順鉑的體外敏感性。方法采用MTT法測(cè)定宮頸癌SiHa細(xì)胞對(duì)3種不同濃度GIK液聯(lián)合順鉑的體外敏感性。結(jié)果不同濃度的GIK液聯(lián)合順鉑對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用比單獨(dú)使用順鉑更強(qiáng)。結(jié)論順鉑聯(lián)合使用GIK液在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制效果比單獨(dú)使用順鉑更好，但不與GIK液濃度呈遞增關(guān)系。

GIK；順鉑； 體外；抗腫瘤

(The Practical Journal of Cancer,2016,31:1234～1235)

GIK液(glucose-insulin-potassium)俗稱極化液是，作為1種“老藥新用”被廣泛應(yīng)用于除心血管以外的各領(lǐng)域[1]，前期工作也表明了單獨(dú)使用GIK液對(duì)腫瘤細(xì)胞具有一定的抑制作用[2]。

本實(shí)驗(yàn)通過順鉑聯(lián)合不同濃度的GIK液作用于體外培養(yǎng)的宮頸癌SiHa細(xì)胞，借助MTT法檢測(cè)其抑制率，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。

1　材料與方法

1.1主要儀器和試劑

酶標(biāo)儀購自雷博公司；CO2恒溫培養(yǎng)箱購自三洋公司；超凈工作臺(tái)購自蘇州凈化設(shè)備廠；臺(tái)式離心機(jī)購自長(zhǎng)沙相儀離心機(jī)儀器有限公司；生物顯微鏡購自O(shè)LYMPUS公司； MTT(上海普飛技術(shù)有限公司)；DMSO(二甲基亞砜,西安化學(xué)試劑廠)；腫瘤細(xì)胞株(SiHa)由南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理教研室提供；DPP和GIK液配制所需藥物均由本單位藥房提供；DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液購自NEURONBC公司；優(yōu)質(zhì)胎牛血清購自GIBCO公司。

1.2方法

1.2.1GIK液配置參照文獻(xiàn)[3]用等滲鹽水配制含葡萄糖、胰島素(武漢生物試劑有限公司)和氯化鉀終濃度分別為100 g/L、80 U/L、5 g/L的GIK液。

1.2.2抗癌藥物按以前測(cè)定的IC50劑量為參考值，一組培養(yǎng)基內(nèi)分別加入3種不同濃度的GIK液和同一濃度的順鉑作用細(xì)胞48 h，該藥物3種檢測(cè)濃度分別為120、240和480 μg/ml。另一組培養(yǎng)基內(nèi)分別加入不同濃度的GIK液作用細(xì)胞48 h。

1.2.3腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，于37 ℃，5%CO2培養(yǎng)，用0.25%胰酶-0.02%EDTA消化，傳代，收集增殖旺盛、狀態(tài)良好的細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)液懸浮后，計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞，調(diào)整腫瘤細(xì)胞濃度為200 μl，懸液中含有細(xì)胞數(shù)為4 000。

1.2.4細(xì)胞存活率測(cè)定將細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔200 μl,置于37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,待細(xì)胞貼壁后，隨機(jī)分GIK液組、順鉑組、GIK液+順鉑組以及對(duì)照和調(diào)零組。GIK組加入終濃度為120、240和480 μg/ml的GIK液；GIK液+順鉑組在以上基礎(chǔ)上再加入終濃度為25 μg/ml的順鉑；順鉑組加入終濃度為25 μg/ml的順鉑；每種藥物濃度設(shè)有6個(gè)平行復(fù)孔。同時(shí)設(shè)對(duì)照組，用等量的10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液代替抗腫瘤藥物作為對(duì)照組，置37 ℃含5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h每孔加10 μl 濃度為5 mg/ml 的MTT繼續(xù)培養(yǎng)4 h棄去上清液再加DMSO 100 μl 溶解，用酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm吸光度。

2　結(jié)果

不同濃度的GIK液聯(lián)合順鉑以及單獨(dú)使用順鉑作用于宮頸癌SiHa細(xì)胞48 h后，呈現(xiàn)出對(duì)細(xì)胞增殖活性的不同程度的抑制。見表1和圖1。

表1　GIK液+DPP對(duì)SiHa細(xì)胞生長(zhǎng)的影響

注：A的F值為1125.307，B的F值為3773.079，C使用時(shí)F值為388.542。本研究屬多個(gè)樣本均的比較，采用ANOVA方差分析，結(jié)果表明各實(shí)驗(yàn)組宮頸癌SiHa細(xì)胞的抑制率不同 (P<0.01)。

單獨(dú)使用GIK液，隨著濃度的增加，細(xì)胞增殖呈下降趨勢(shì)與前期工作一致；GIK+DPP聯(lián)合使用時(shí)，隨著GIK液濃度的增加，細(xì)胞增殖趨勢(shì)呈上升趨勢(shì)，抑制率呈下降趨勢(shì)。本研究結(jié)果表明各實(shí)驗(yàn)組宮頸癌SiHa細(xì)胞的抑制率不同 (P<0.01)； GIK液的120 μg/ml組與240 μg/ml組以及GIK+DPP 240 μg/ml與480 μg/ml組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)；其余各組間兩兩比較( P<0.01)，見圖1。

圖1　GIK液+DPP對(duì)SiHa細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率

3　討論

腫瘤細(xì)胞的特征是失控性生長(zhǎng)。因此，抗腫瘤藥物的研究首先是觀察其抗腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：不論是單獨(dú)使用GIK液還是聯(lián)合DDP在安全劑量范圍內(nèi)，對(duì)腫瘤細(xì)胞都有較高的抑制作用。腫瘤作為全身性疾病，抗腫瘤藥物即對(duì)腫瘤細(xì)胞也對(duì)正常細(xì)胞具有殺傷作用，因個(gè)體差異會(huì)出現(xiàn)讓病人苦不堪言的若干不同程度的副作用如：脫發(fā)、惡心、嘔吐等。為了減輕病人的反應(yīng)和提高抗腫瘤藥物的療效，臨床使用了化療輔助用藥。

GIK液使用安全，治療成本低，在前期工作中，已經(jīng)證明單獨(dú)使用GIK液能夠抑制SiHa細(xì)胞的增殖[2]。本次實(shí)驗(yàn)通過3種不同濃度的GIK液聯(lián)合DDP作用SiHa細(xì)胞均能抑制腫瘤細(xì)胞增殖。結(jié)果顯示，GIK液的120 μg和240 μg組以及GIK+DPP的240 μg和480 μg組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)，但是，作用最顯著的是GIK液120 μg+DDP組，此結(jié)果提示藥物聯(lián)用存在藥物協(xié)同或拮抗作用。由于藥物的相互作用，GIK+DDP對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制，GIK的劑量不呈量效關(guān)系。提示臨床用藥，在聯(lián)合用藥時(shí)，當(dāng)藥物達(dá)到一定濃度，其抑制率不再升高，反而給機(jī)體帶來一定的毒副作用。GIK液對(duì)機(jī)體免疫功能、血液流變以及腫瘤細(xì)胞凋亡的影響有待進(jìn)一步研究。

MTT法反映了腫瘤細(xì)胞群體對(duì)藥物的敏感性，簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)，與療效密切相關(guān)。因此，MTT法近幾年較廣泛應(yīng)用予臨床惡性腫瘤(白血病、胃癌、肺癌、腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌)的化療藥敏檢測(cè)[4]。

[1]Quinn DW,Pagano D,Bonser RS,et al.Glucose and insulin influences on heart and brain in Cardiac surgery〔J〕.Semin Cardiothorac Vasc Anesth,2005，9(2):173-178.

[2]劉龍燕,孟偉,劉國燕，等.CCK-8檢測(cè)GIK液對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用〔J〕.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,30(5):430-432.

[3]錢學(xué)賢.極化液、胰島素保護(hù)缺血/再灌注的新機(jī)制―又一個(gè)老藥新觀點(diǎn)的典范〔J〕.中華內(nèi)科雜志,2003,42:145-147.

[4]呂青，呈中,裒淑蘭.Mflr法檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性的研究〔J〕.四川醫(yī)學(xué)，2001，22(3)：269.

(編輯：吳小紅)

Research on Sensitivity of SiHa Cells to Chemotherapeutic Drug and GIK Solution

LIU Longyan，MENG Wei,LIU Guoyan,et al.

Jiangxi Cancer Hospital,Nanchang，330029

ObjectiveTo study the response of cervical cancer SiHa cells to the combination of GIK solution with drug cisplatin in vitro.MethodsMTT assay was used to test the sensitivity of SiHa cells to 3 different concentrations of GIK solution plus cisplatin.ResultsThe antitumor effect of combination treatment was stronger than the cisplatin treatment alone in SiHa cells.ConclusionThe combination of GIK solution and cisplatin exhibited enhanced antitumor effects in SiHa cells,but GIK solution is not doses dependent.

GIK;Cisplatin;In vitro;Antitumor

330029 江西省腫瘤醫(yī)院(劉龍燕,鄒學(xué)森,陳岳青,王春陽)；330006 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院(孟偉)；330006 江西省婦幼保健院(劉國燕)

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.08.005

R73-36

A

1001-5930(2016)08-1234-02

2015-09-07

2016-01-17)