范桂強(qiáng)，王志杰，李桐，齊善厚，龐紅霞，孫金旭，劉佳（.河北省衡水市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河北 衡水05000；.衡水學(xué)院，河北 衡水05000；.衡水科技工作者服務(wù)中心，河北 衡水05000）

HPLC法測(cè)定紅景天苷研究

范桂強(qiáng)1，王志杰2，李桐3，齊善厚2，龐紅霞1，孫金旭2，劉佳2
（1.河北省衡水市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河北 衡水053000；2.衡水學(xué)院，河北 衡水053000；3.衡水科技工作者服務(wù)中心，河北 衡水053000）

利用HPLC法測(cè)定紅景天中紅景天苷含量，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，此方法測(cè)定紅景天苷含量重復(fù)性試驗(yàn)最大標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.27%，峰面積與紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），線性范圍1 mg/mL～100 mg/mL，加樣回收率98.39%～101.15%間，經(jīng)測(cè)定紅景天中紅景天苷含量為3.14g/100g。

HPLC；紅景天；紅景天苷

紅景天又名高山紅景天（Rhodiola sachalinensis A Bor.），為藥食兩用植物［1］。近年來，對(duì)紅景天的研究較多，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)紅景天具有抗輻射、抗疲勞、抗衰老等藥理作用［2］。紅景天較強(qiáng)的藥理功效與紅景天中活性成分密切相關(guān)，經(jīng)研究證實(shí)紅景天苷為紅景天中具有明顯功效的成分之一已經(jīng)被較為深入的分析研究［3-4］，而對(duì)于紅景天中紅景天含量測(cè)定方法及準(zhǔn)確性研究較少，本研究建立了HPLC法測(cè)定紅景天苷含量的測(cè)定方法，以期為紅景天品質(zhì)及紅景天苷含量的測(cè)定提供參考。

1　材料與方法

1.1材料

紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品（來源：中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110818-201206）；高山紅景天藥材：購于吉林省安圖縣二道白河鎮(zhèn)。

1.2主要儀器

Agilent1100高效液相色譜儀：美國；BSM電子分析天平：上海田宮稱重制造有限公司；UV-2501分光光度計(jì)：日本島津。

1.3方法

1.3.1色譜測(cè)定條件

流動(dòng)相：甲醇-水，比例8∶2，流動(dòng)相流速0.2 mL/ min，柱溫度25℃；進(jìn)樣量10 μL，利用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，檢測(cè)波長(zhǎng)276 nm，色譜柱為不銹鋼柱ZORBAX SB-C18（150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm）

1.3.2紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品處理方法

準(zhǔn)確稱取紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品0.050 12 g，置于25 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，以此為母液，分別配置不同濃度紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.3.3紅景天樣品處理方法

精確稱量1 g紅景天于500 mL具塞三角瓶中，添加20 mL甲醇溶液，閃式提取40 s，待靜置后取上清液，0.45 μm濾膜過濾待用。

1.3.4回收率計(jì)算

回收率計(jì)算公式如下：

式中：A為回收率，%；W為原紅景天中紅景天苷含量，mg；Z為加標(biāo)量，mg；E為加標(biāo)后測(cè)定混合液中紅景天苷含量，mg。

1.3.5紅景天苷含量計(jì)算紅景天苷含量計(jì)算公式：N=G×V/1 000×100/M

式中：N為紅景天中含有的紅景天苷含量，g/100 g；G為提取紅景天苷濃度，mg/mL；V為提取液體積mL；M為紅景天用量，g。

2　結(jié)果與討論

2.1測(cè)定波長(zhǎng)的確定

為確定紅景天中紅景天苷高效液相色譜的測(cè)定波長(zhǎng)值，以購買的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品為測(cè)定的樣品，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)值，波長(zhǎng)掃描范圍200 nm～500 nm，經(jīng)掃描后結(jié)果如圖1所示。

圖1　紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品全波長(zhǎng)掃描結(jié)果Fig.1　The full wavelengh scanner result for salidroside

由圖1分析可知，經(jīng)紫外分光光度計(jì)全波長(zhǎng)掃描后，紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品于276 nm處有一最大吸收峰，表明紅景天苷在此波長(zhǎng)下吸收值最大，因此確定276 nm為紅景天苷的紫外吸收測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)甲醇處理后，HPLC法測(cè)定［5］，測(cè)定條件如下：流動(dòng)相：甲醇-水，比例8∶2，流動(dòng)相流速0.2 mL/min，柱溫度25℃；進(jìn)樣量10 uL，利用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，檢測(cè)波長(zhǎng)276 nm，色譜柱為不銹鋼柱ZORBAX SB-C18（150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm）。經(jīng)測(cè)定后，紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品HPLC液相色譜圖如圖2所示。

由圖2分析可知，經(jīng)HPLC法測(cè)定，紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品在色譜圖中5.13 min時(shí)，出現(xiàn)最大、唯一吸收峰，表明此出峰時(shí)間點(diǎn)為紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品在此HPLC條件下的檢測(cè)點(diǎn)，紅景天中紅景天苷含量HPLC法測(cè)定可以以此點(diǎn)作為檢測(cè)點(diǎn)。

圖2 紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖Fig.2　The HPLC spectra for salidroside standard

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及線性范圍考察

以1.3.2項(xiàng)下母液，用甲醇為溶劑分別配制不同濃度紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液（濃度分別為0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4 μg/mL），在上述條件下分別進(jìn)行HPLC測(cè)定，以紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，紅景天苷吸收峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸測(cè)定，測(cè)定結(jié)果如圖3所示。

圖3　紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品濃度與峰面積線性關(guān)系圖Fig.3　The linear relationship between content of salidroside and peak area

由圖3分析可知，紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品濃度和峰面積呈現(xiàn)一定的線性關(guān)系，線性回歸方程為Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），該回歸方程在1 mg/mL～100 mg/ mL的范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性范圍。

2.4重復(fù)性試驗(yàn)

精確稱取經(jīng)處理后的紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品同一份，將此同一份均勻5份平分，根據(jù)測(cè)定條件測(cè)定紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品含量，計(jì)算5份測(cè)定后的平均值及RSD，結(jié)果如表1所示。

由表1分析可知，經(jīng)處理后的源于同一樣品的5份紅景天苷樣品分別進(jìn)樣后，測(cè)定樣品平均含量1.569 6 mg/mL，經(jīng)計(jì)算后RSD值為0.27%，達(dá)到了該方法重復(fù)性測(cè)定的要求，可以作為分析紅景天苷含量的測(cè)試方法使用。

表1重復(fù)性試驗(yàn)Table 1　Result of repetitive test

2.5回收率試驗(yàn)

加樣回收率是分析試驗(yàn)測(cè)定方法是否可行的另一項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)，經(jīng)處理后的紅景天樣品，平均成3份，按HPLC測(cè)定要求，處理樣品后，分別測(cè)定其紅景天苷含量，紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品配制成不同濃度后，分別添加至紅景天樣品中，處理后再次測(cè)定紅景天苷含量，分別計(jì)算回收率和RSD值，用于評(píng)估該HPLC法測(cè)定紅景天苷含量的可行性，結(jié)果如表2所示。

表2回收率試驗(yàn)Table 2　Recovery rates

由表2分析可知，紅景天中紅景天苷含量測(cè)定經(jīng)加標(biāo)后，紅景天苷回收率在98.39%～101.15%間，紅景天苷的平均回收率為99.53%，回收RSD值為1.45%，在允許范圍之內(nèi)，表明回收良好，此HPLC法測(cè)定紅景天中紅景天苷含量誤差較小，誤差在可控范圍之內(nèi)。

2.6紅景天中紅景天苷含量測(cè)定

根據(jù)設(shè)定HPLC法測(cè)定條件，紅景天經(jīng)處理后測(cè)定紅景天苷含量，結(jié)果如圖4所示。

由圖4分析可知，在經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證的HPLC法測(cè)定條件下，對(duì)經(jīng)處理后的紅景天進(jìn)樣測(cè)定，紅景天中的成分峰與其他雜質(zhì)峰之間分離度較好，和紅景天苷相對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)有相應(yīng)單一峰出現(xiàn)，表明該方法能夠較好的測(cè)定紅景天中紅景天苷含量，干擾較少，該HPLC條件較適宜于紅景天中紅景天苷含量的測(cè)定分析，經(jīng)對(duì)比、計(jì)算紅景天中紅景天苷含量為3.14 g/100 g。

圖4 紅景天測(cè)定圖譜Fig.4 The HPLC spectra for rhodiola

3　結(jié)論

紅景天為藥食兩用的植物，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)其具有有抗輻射、抗疲勞、抗衰老等藥理作用。紅景天較強(qiáng)的藥理功效與紅景天中活性成分密切相關(guān)，經(jīng)研究證實(shí)紅景天苷為紅景天中具有明顯功效的成分之一，利用HPLC法測(cè)定紅景天中紅景天苷含量，測(cè)定條件為流動(dòng)相：甲醇-水，比例8∶2，流動(dòng)相流速0.2 mL/min，柱溫度25℃；進(jìn)樣量10 μL，利用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析，檢測(cè)波長(zhǎng)276 nm，色譜柱為不銹鋼柱ZORBAX SB-C18 （150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm），經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證，此方法測(cè)定紅景天苷含量重復(fù)性試驗(yàn)最大標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.27%，峰面積與紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），加樣回收率98.39%～101.15%間，經(jīng)測(cè)定紅景天中紅景天苷含量為3.14 g/100 g。

［1］鄒曉麗．長(zhǎng)白山紅景天配伍FDP抗疲勞作用實(shí)驗(yàn)研究［D］．哈爾濱：東北師范大學(xué)，2008：78-85

［2］陶貴榮，趙銀萍，齊建，等．不同地區(qū)紅景天植物紅景天苷含量比較研究［J］．西北植物學(xué)報(bào)，2010，30（9）：1902-1905

［3］李穎，厙守權(quán)，劉剛，等．發(fā)酵紅景天中紅景天苷的含量測(cè)定［J］．延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（4）：271-273

［4］楊連梅，胡榮，齊文，等．藏藥狹葉紅景天化學(xué)成分研究［J］.中國藥劑學(xué)，2011，20（5）：154-158

［5］張榕文，任杰麟，蔣日瓊，等.高效液相色譜法測(cè)定中藥洗發(fā)水中紅景天苷的含量［J］.應(yīng)用化工，2014，43（12）：2295-2297

The Determination of Salidroside by HPLC

FAN Gui-qiang1，WANG Zhi-jie2，LI Tong3，QI Shan-hou2，PANG Hong-xia1，SUN Jin-xu2，LIU Jia2
（1.Hengshui Centre for Food and Drug Control，Hengshui 053000，Hebei，China；2.Hengshui University，Hengshui 053000，Hebei，China；3.The Service Center for Science and Technology Workers of Hengshui，Hengshui 053000，Hebei，China）

The salideroside content in rhodiola by HPLC was determined.The result showed that the method for the determination of salideroside content maximum standard deviation was 0.27%，the linear regression equation Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），the regression equation in the range 1 mg/mL～100 mg/mL.The spike recoveriesforergosterolwerebetween98.39%-101.15%.Thecontentofsalidrosideinrhodiolawas3.14g/100 g.

HPLC；rhodiola；salideroside

2015-09-30

衡水市科技局指令性課題（14032）

范桂強(qiáng)（1978—），男（漢），副主任藥師，本科，主要從事化學(xué)藥品檢測(cè)檢驗(yàn)研究。