周煥娟，何　莉

?

MAPK信號(hào)通路對(duì)地塞米松抑制Jurkat細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的影響

周煥娟，何莉*

目的研究絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路對(duì)地塞米松(Dexamethasone，DEX)誘導(dǎo)急性淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞凋亡及抑制細(xì)胞增殖的影響。方法觀察地塞米松、PD98059、SP600125、SB203580及地塞米松分別聯(lián)合PD98059、SP600125、SB203580對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖及凋亡的抑制作用。以急性淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞為研究對(duì)象，應(yīng)用WST-1法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活力；流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡。結(jié)果地塞米松對(duì)Jurkat細(xì)胞24 h和48 h抑制細(xì)胞增殖50%的藥物濃度(IC50)分別為829、335 μM。100 μM以上地塞米松以時(shí)間、劑量依賴方式抑制Jurkat細(xì)胞增殖；地塞米松分別聯(lián)合PD98059、SP600125可增加對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)，聯(lián)合SB203580對(duì)地塞米松抑制Jurkat細(xì)胞增殖無(wú)影響。10 μM地塞米松聯(lián)合20 μM PD98059可顯著增加地塞米松誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡的作用，細(xì)胞凋亡率由8.5%升至28.4%。結(jié)論急性淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞為糖皮質(zhì)激素耐藥細(xì)胞。阻斷p38MAPK對(duì)地塞米松抑制Jurkat細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響。阻斷ERK、JNK信號(hào)通路均可增強(qiáng)地塞米松對(duì)Jurkat細(xì)胞的殺傷作用，達(dá)到逆轉(zhuǎn)Jurkat細(xì)胞對(duì)地塞米松的耐藥。急性淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞糖皮質(zhì)激素耐藥可能與ERK、JNK通路的活化有關(guān)。

絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路；地塞米松；耐藥；凋亡；Jurkat細(xì)胞

0　引言

白血病是兒童惡性腫瘤中發(fā)病率最高的疾病，其中急性淋巴細(xì)胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia，ALL)約占70%[1]，嚴(yán)重威脅兒童的健康成長(zhǎng)。糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoid，GC)可引起淋巴細(xì)胞的凋亡及細(xì)胞周期G1停滯，抑制其生長(zhǎng)與增殖，始終貫穿著整個(gè)化療過(guò)程。國(guó)內(nèi)外重要指南均將強(qiáng)的松單藥治療7 d誘導(dǎo)試驗(yàn)的效應(yīng)作為評(píng)估兒童ALL預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立的危險(xiǎn)因素[2]。然而，近年研究發(fā)現(xiàn)，在小兒初治ALL中，10%～20%表現(xiàn)為糖皮質(zhì)激素原發(fā)耐藥，復(fù)發(fā)病例中70%為GC耐藥，嚴(yán)重威脅小兒ALL的療效及預(yù)后。

絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)是細(xì)胞內(nèi)廣泛表達(dá)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，主要包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(Extracellular signal-regulated kinase，ERK)、c-jun N末端激酶(c-jun N-terminal kinase，JNK)及p38MAPK途徑，共同參與多種細(xì)胞反應(yīng)的調(diào)節(jié)，如細(xì)胞增殖、分化、凋亡及細(xì)胞周期調(diào)控等。目前認(rèn)為，細(xì)胞信號(hào)通路的異常激活或抑制與腫瘤耐藥有密切關(guān)系[3]。ERK信號(hào)通路在CD4+T細(xì)胞對(duì)地塞米松(Dexamethasone，DEX)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4]，活化JNK、p38MAPK信號(hào)通路引起的糖皮質(zhì)激素受體功能受抑制與乳腺癌細(xì)胞糖皮質(zhì)激素耐藥相關(guān)[5]。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于MAPK信號(hào)通路的異常激活或抑制是否會(huì)影響人ALL耐藥細(xì)胞對(duì)糖皮質(zhì)激素敏感性的相關(guān)研究較少。本研究采用糖皮質(zhì)激素耐藥Jurkat細(xì)胞，觀察ERK、JNK及p38MAPK途徑對(duì)DEX誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡的影響，尋找逆轉(zhuǎn)ALL糖皮質(zhì)激素耐藥的方法。

1　材料與方法

1.1材料人急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞株，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室保存。RPMI 1640培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司；胎牛血清購(gòu)自天津?yàn)旃?；WST-1購(gòu)自碧云天公司；Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自碧云天公司；地塞米松磷酸鈉購(gòu)自天津藥業(yè)焦作有限公司；PD98059、SP600125及SB203580購(gòu)自碧云天公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)將Jurkat細(xì)胞株置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，37 ℃、體積分?jǐn)?shù)5% CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)傳代培養(yǎng)。臺(tái)盼藍(lán)染色，拒染率>95%為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.2實(shí)驗(yàn)分組單獨(dú)應(yīng)用DEX組、PD98059組、SP600125組、SB203580組和地塞米松分別聯(lián)合PD98059、SP600125、SB203580組，并設(shè)立陰性對(duì)照及空白對(duì)照，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，結(jié)果取平均值。

1.2.3WST-1法檢測(cè)細(xì)胞增殖取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為5×104/mL，將細(xì)胞懸液按每孔90 μL移至96孔板中，設(shè)立空白對(duì)照孔(無(wú)細(xì)胞孔)和陰性對(duì)照孔(未加藥孔)，每個(gè)樣本設(shè)3個(gè)復(fù)孔；各試驗(yàn)孔加入10 μL相應(yīng)梯度濃度藥物，分別處理相應(yīng)時(shí)間；每孔加入10 μL WST-1溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上以490 nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔吸光度(A)值。計(jì)算相應(yīng)各孔的細(xì)胞抑制率。抑制率(%)=(對(duì)照組平均A值-實(shí)驗(yàn)組平均A值)/對(duì)照組平均A值×100%。抑制細(xì)胞增殖50%的藥物濃度(IC50)采用回歸法計(jì)算。

1.2.4Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，予相應(yīng)濃度和時(shí)間的藥物處理后，1 000 r/min，離心5 min，棄上清，用PBS重懸細(xì)胞并計(jì)數(shù)，設(shè)陰性對(duì)照和空白對(duì)照(未加Annexin V-FITC)。取1×106個(gè)重懸細(xì)胞，1 000 r/min，離心5 min，棄上清，加入195 μL Annexin V-FITC 結(jié)合液重懸細(xì)胞；加入5 μL Annexin V-FITC并混勻。室溫避光孵育10 min；1 000 r/min，離心5 min，棄上清，加入190 μL Annexin V-FITC 結(jié)合液重懸細(xì)胞；加入10 μL碘化丙啶染色液并混勻，冰浴避光放置10 min，進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上，X軸為Anexin V-FITC通道，Y軸為PI通道。左下象限(Anexin V-FITC-/PI-)代表活細(xì)胞，左上象限(Anexin V-FITC-/PI+)代表機(jī)械損傷細(xì)胞，右上象限(Anexin V-FITC+/PI+)代表壞死細(xì)胞，右下象限(Anexin V-FITC+/PI-)為凋亡細(xì)胞。

2　結(jié)果

2.1DEX、PD98059、SP600125、SB203580單用及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的影響

2.1.1DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的抑制作用1、10、100、500 μM DEX分別處理Jurkat細(xì)胞24、48 h。當(dāng)DEX濃度達(dá)100 μM時(shí)，兩組Jurkat細(xì)胞增殖抑制率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示100 μM DEX作用48 h對(duì)Jurkat細(xì)胞有較明顯的增殖抑制作用，表明Jurkat細(xì)胞為糖皮質(zhì)激素耐藥細(xì)胞。并且100 μM以上DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)呈時(shí)間、劑量依賴性。見(jiàn)表1。DEX作用于Jurkat細(xì)胞24、48 h的IC50分別為 829、335 μM。

2.1.2PD98059、SP600125、SB203580對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的抑制作用20 μM PD98059、10 μM SP600125、20 μM SB203580分別處理Jurkat細(xì)胞48 h，對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率分別為5.3%、6.5%和4.3%，與單用100 μM DEX組比較，三種阻滯劑對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖無(wú)明顯影響。見(jiàn)圖1。

表1　DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞的抑制增殖作用(%，n=3)

圖1　PD98059、SP600125、SB203580、DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的抑制作用

2.1.3DEX分別聯(lián)合應(yīng)用PD98059、SP600125、SB203580對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的抑制作用分別預(yù)先用20 μM PD98059、10 μM SP600125、20 μMSB203580處理Jurkat細(xì)胞1 h，然后加入1、10、100、500 μM DEX繼續(xù)作用48 h。聯(lián)合應(yīng)用PD98059組可顯著增加1、10、100 μM DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的抑制作用。其抑制率分別由1.3%、5.6%、14.7%升至23.4%、24.7%、28.4% (t=22.19、12.68、3.80，P<0.05)。加用PD98059后，500 μM DEX 對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖抑制率略升高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.50，P>0.05)。聯(lián)合應(yīng)用SP600125組可增加100、500 μM DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的抑制作用，使其抑制率分別由14.7%、30.4%升至26.9%、39.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.84、3.24，P<0.05)。加用SP600125后，1、10 μM DEX 對(duì)Jurkat細(xì)胞的增殖抑制率無(wú)影響(t=2.02、1.95，P>0.05)。聯(lián)合應(yīng)用SB203580后，各濃度DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞的增殖抑制作用無(wú)明顯改變(t=0.69、0.87、2.53、1.25，P>0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2　四組Jurkat細(xì)胞增殖抑制率比較(48 h)

2.2DEX、PD98059單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡的影響

2.2.1DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡的作用10 μM DEX作用Jurkat細(xì)胞48 h，細(xì)胞凋亡率為8.5%，提示Jurkat細(xì)胞對(duì)DEX誘導(dǎo)凋亡作用不敏感，為DEX耐藥細(xì)胞株。見(jiàn)圖3a。

2.2.2PD98059對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡的作用20 μM PD98059處理Jurkat細(xì)胞48 h，細(xì)胞凋亡率為7.4%，提示PD98059對(duì)Jurkat細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒作用。見(jiàn)圖3b。

2.2.3DEX聯(lián)合PD98059對(duì)Jurkat細(xì)胞凋亡的作用對(duì)照組、DEX組、PD98059組及DEX+PD98059組的凋亡率分別為5.8%±0.4%、8.5%±1.9%、7.4%±0.9%、28.4%±7.2%。結(jié)果表明，預(yù)先用20 μM PD98059處理Jurkat細(xì)胞1 h，然后加入 10 μM DEX繼續(xù)作用48 h，細(xì)胞凋亡率由8.5%升至28.4%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (t=4.62，P<0.05)。見(jiàn)圖3c。提示PD98059可顯著增強(qiáng)DEX的誘導(dǎo)凋亡作用，恢復(fù)Jurkat細(xì)胞對(duì)DEX的敏感性。見(jiàn)圖4。

圖3　三組Jurkat細(xì)胞凋亡情況比較(48 h)

圖4　DEX單用與聯(lián)合PD98059對(duì)Jurkat細(xì)胞的凋亡作用

3　討論

隨著診療水平的提高和化療方案的改進(jìn)，小兒ALL的治愈率可達(dá)80%[6]。盡管近年多種新型化療藥物進(jìn)入臨床，糖皮質(zhì)激素作為最早用于ALL化療的藥物，仍然貫穿于整個(gè)化療過(guò)程。對(duì)糖皮質(zhì)激素的敏感性已作為兒童ALL危險(xiǎn)度判定、治療方案選擇和預(yù)后判斷的一個(gè)重要的獨(dú)立指標(biāo)[7]。德國(guó)BFM研究表明，采用BFM90方案治療的ALL糖皮質(zhì)激素敏感患兒的5年無(wú)病生存率達(dá)80.7%，而糖皮質(zhì)激素耐藥者僅為31.8%[8]。由此可見(jiàn)，糖皮質(zhì)激素耐藥是小兒ALL治療失敗及復(fù)發(fā)的主要因素。本研究將DEX作用ALL Jurkat細(xì)胞24～48 h時(shí)，結(jié)果顯示，100 μM DEX作用48 h才能出現(xiàn)明顯的細(xì)胞增殖抑制作用。100 μM以上時(shí)，DEX以時(shí)間、劑量依賴方式抑制Jurkat細(xì)胞增殖，對(duì)DEX的耐藥情況與孟浦等[9]報(bào)道一致。而對(duì)DEX敏感的細(xì)胞，Rambal等[10]報(bào)道，CCRF-CEM細(xì)胞在0.1 μM DEX處理48 h即可出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡。說(shuō)明Jurkat細(xì)胞為糖皮質(zhì)激素耐藥細(xì)胞株。

MAPK是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，主要包括ERK通路、JNK通路和p38MAPK通路，共同參與多種細(xì)胞反應(yīng)的調(diào)節(jié)，如細(xì)胞增殖、分化、凋亡和細(xì)胞周期調(diào)控等。最近研究表明，這些通路的異常激活或阻斷與腫瘤耐藥產(chǎn)生有關(guān)[6]。Suzuki等[11]發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合應(yīng)用ERK阻滯劑，可增加急性單核白血病THP-1及MV4-11細(xì)胞對(duì)伊馬替尼的敏感性，說(shuō)明抑制ERK信號(hào)通路，可以逆轉(zhuǎn)急性單核白血病細(xì)胞對(duì)伊馬替尼的耐藥性。利用JNK阻滯劑SP600125處理卵巢癌順鉑敏感細(xì)胞株可增加對(duì)順鉑的耐藥性，推測(cè)JNK信號(hào)通路的激活程度與卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性呈正相關(guān)[12]。阻斷p38MAPK信號(hào)通路可增加小鼠白血病細(xì)胞L1210對(duì)長(zhǎng)春新堿的敏感性，逆轉(zhuǎn)長(zhǎng)春新堿耐藥[13]。

本研究以糖皮質(zhì)激素耐藥型Jurkat細(xì)胞株為研究對(duì)象，利用信號(hào)通路特異性阻滯劑聯(lián)合DEX作用，探討ERK、JNK及p38MAPK信號(hào)通路在糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡過(guò)程中的作用。結(jié)果顯示，聯(lián)合應(yīng)用ERK通路阻滯劑PD98059，可增強(qiáng)DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的抑制作用，其中以1、10 μM DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖抑制率的增加最顯著，分別由1.3%、5.6%增加至22.4%、24.7%。流式細(xì)胞結(jié)果證實(shí)，預(yù)先用PD98059處理1 h后再加10 μM DEX繼續(xù)作用48 h，可顯著增加DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用，細(xì)胞凋亡率由8.5%升至28.4%。以同樣劑量的PD98059單獨(dú)處理Jurkat細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞無(wú)影響。Rambal等[10]研究發(fā)現(xiàn)，T淋巴細(xì)胞白血病Molt-4細(xì)胞聯(lián)合1 μM DEX和5 μM PD98059共同作用72 h，細(xì)胞凋亡率約為60%，比單用DEX升高6倍。由此可見(jiàn)，在多種糖皮質(zhì)激素耐藥型T-ALL細(xì)胞中，通過(guò)阻斷ERK信號(hào)通路可恢復(fù)其對(duì)糖皮質(zhì)激素的敏感性，使較低濃度DEX也可發(fā)揮明顯的細(xì)胞增殖抑制和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。因此，ERK信號(hào)通路的異常激活可能參與ALL糖皮質(zhì)激素耐藥的產(chǎn)生，阻斷該通路可作為逆轉(zhuǎn)糖皮質(zhì)激素耐藥治療的新靶點(diǎn)。

JNK信號(hào)通路對(duì)于不同的細(xì)胞類型及刺激的產(chǎn)生，在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡及存活過(guò)程發(fā)揮不同作用。Qu等[14]發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合As2O3和JNK特異性阻滯劑SP600125處理急性早幼粒白血病NB4細(xì)胞，可阻斷As2O3誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯和細(xì)胞凋亡作用。本研究結(jié)果顯示，聯(lián)合SP600125與DEX處理Jurkat細(xì)胞48 h，可見(jiàn)加用SP600125可增加100、500 μM DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞增殖的抑制作用，使其抑制率分別由14.7%、30.4%增加至26.9%、39.1%。而低濃度DEX (1、10 μM)對(duì)Jurkat細(xì)胞無(wú)增殖抑制作用。提示阻斷JNK信號(hào)通路后，仍需較高濃度DEX才能出現(xiàn)明顯的細(xì)胞毒作用。由此可見(jiàn)，阻斷JNK信號(hào)通路可增加ALL Jurkat細(xì)胞對(duì)糖皮質(zhì)激素的敏感性，ALL細(xì)胞糖皮質(zhì)激素耐藥的產(chǎn)生可能與JNK的異常激活有關(guān)，阻斷該通路是一種潛在的逆轉(zhuǎn)糖皮質(zhì)激素耐藥的治療方法。

p38MAPK信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)抑制增殖途徑。Miller等[15]研究表明，DEX作用于糖皮質(zhì)激素敏感型CEM細(xì)胞24 h后，可觀察到p38MAPK磷酸化水平升高，提示糖皮質(zhì)激素介導(dǎo)p38MAPK活化，DEX誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程需要p38MAPK參與，阻斷p38MAPK信號(hào)通路可顯著減弱糖皮質(zhì)激素對(duì)淋巴細(xì)胞的殺傷作用[16-19]。本研究結(jié)果表明，聯(lián)合DEX與p38MAPK通路阻滯劑SB203580 作用48 h，對(duì)DEX引起的Jurkat細(xì)胞增殖抑制效果無(wú)明顯影響。其原因考慮為Jurkat細(xì)胞對(duì)糖皮質(zhì)激素耐藥，細(xì)胞內(nèi)p38MAPK處于低表達(dá)水平，被阻斷后對(duì)下游分子轉(zhuǎn)錄表達(dá)的作用不明顯。推斷p38MAPK信號(hào)通路受抑可能成為糖皮質(zhì)激素耐藥產(chǎn)生的機(jī)制。

總之，ALL Jurkat細(xì)胞為糖皮質(zhì)激素耐藥細(xì)胞。阻斷p38MAPK對(duì)地塞米松抑制Jurkat增殖無(wú)明顯影響；阻斷ERK、JNK信號(hào)通路均可增強(qiáng)地塞米松對(duì)Jurkat細(xì)胞的殺傷作用，逆轉(zhuǎn)Jurkat細(xì)胞對(duì)地塞米松誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡耐藥；阻斷ERK信號(hào)通路可顯著增加低濃度DEX對(duì)Jurkat細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用。由此推測(cè)，急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞糖皮質(zhì)激素耐藥與ERK、JNK信號(hào)通路的異常激活和p38MAPK通路阻斷有關(guān)。特異性阻斷ERK、JNK信號(hào)通路或激活p38MAPK信號(hào)通路可能成為逆轉(zhuǎn)ALL糖皮質(zhì)激素耐藥的新的治療方法。

[1]鄭胡鏞.兒童急性淋巴細(xì)胞白血病治療進(jìn)展[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2007,22(3):167-169.

[2]Hamilton A,Gallipoli P,Nicholson E,et al.Targeted therapy in haematological malignancies[J].J Pathol,2010,220(4):404-418.

[3]沈松杰.MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在腫瘤化療耐藥中的作用[J].國(guó)外醫(yī)學(xué):腫瘤學(xué)分冊(cè),2005,32(8):579-582.

[4]Tsitoura DC,Rothman PB.Enhancement of MEK/ERK signaling promotes glucocorticoid resistance in CD4+ Tcells[J].J Clin Invest,2004,113(4):619-627.

[5]Szatmary Z,Garabedian MJ,Vilcek J.Inhibition of glucocorticoid receptor-mediated transcriptional activation by p38 mitogen-activated protein (MAP) kinase[J].J Biol Chem,2004,279(42):43708-43715.

[6]Fulda S.Tumor resistance to apoptosis[J].Int J Cancer,2009,124(3):511-515.

[7]帖利軍,顧龍君,宋得蓮,等.兒童急性淋巴細(xì)胞白血病早期治療反應(yīng)的預(yù)后價(jià)值:上海兒童醫(yī)學(xué)中心單中心的臨床報(bào)告[J].中國(guó)當(dāng)代兒科雜志,2009,11(1):5-9.

[8]Schrappe M,Reiter A,Zimmermann M,et al.Long-term results of four consecutive trials in childhood ALL performed by the ALL-BFM study group from 1981 to 1995.Berlin-Frankfurt-Munster[J].Leukemia,2000,14(12):2205-2222.

[9]孟浦,張慈偉,潘峰.Survivin 基因在糖皮質(zhì)激素敏感型和糖皮質(zhì)激素耐藥型白血病細(xì)胞株中的表達(dá)差異及意義[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2010,25(15):1136-1139.

[10]Rambal AA,Panaguiton ZL,Kramer L,et al.MEK inhibitors potentiate dexamethasone lethality in acute lymphoblastic leukemia cells through the pro-apoptotic molecule BIM[J].Leukemia,2009,23(10):1744-1754.

[11]Suzuki M,Abe A,Imagama S,et al.BCR-ABL-independent and RAS / MAPK pathway-dependent form of imatinib resistance in Ph-positive acute lymphoblastic leukemia cell line with activation of EphB4[J].Eur J Haematol,2010,84(3):229-238.

[12]Cuadrado A,Garcia-Fernandez LF,Gonzalez L,et al.Aplidin induces apoptosis in human cancer cells via glutathione depletion and sustained activation of the growth factor receptor,Src,JNK,and p38MAPK[J].J Biol Chem,2003,278(1):241-250.

[13]Barancik M,Bohacova V,Kvackajova J,et al.SB203580,a specific inhibitor of p38-MAPK pathway,is a new reversal agent of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance[J].Eur J Pharm Sci,2001,14(1):29-36.

[14]Qu W,Bortner CD,Sakurai T,et al.Acquisition of apoptotic resistance in arsenic-induced malignant transformation:role of the JNK signal transduction pathway[J].Carcinogenesis,2002,23(1):151-159.

[15]Miller AL,Komak S,Webb MS,et al.Gene expression profiling of leukemic cells and primary thymocytes predicts a signature for apoptotic sensitivity to glucocorticoids[J].Cancer Cell Int,2007,7:18-33.

[16]張瑩,周晉,李殿俊,等.JNK傳導(dǎo)通路在砷制劑治療白血病中的作用[J].中國(guó)腫瘤,2004,13(4):264-266.

[17]何莉,李丹,侯科佐,等.p38絲裂原活化蛋白激酶調(diào)節(jié)急性淋巴細(xì)胞性白血病CEM細(xì)胞株糖皮質(zhì)激素受體功能的分子機(jī)制研究[J].中華兒科雜志,2007,45(9):687-691.

[18]Zhao YN,Guo X,Ma ZG,et al.Pro-apoptotic protein BIM in apoptosis of glucocorticoid-sensitive and -resistant acute lymphoblastic leukemia CEM cells[J].Med Oncol,2011,28(4):1609-1617.

[19]Heidari N,Miller AV,Hicks MA,et al.Glucocorticoid-mediated BIM induction and apoptosis are regulated by Runx2 and c-Jun in leukemia cells[J].Cell Death Dis,2012,19(3)：e349.

Effect of MAPK signal pathway on proliferation and apoptosis inhibited and induced by dexamethasone in Jurkat cells

ZHOU Huan-juan,HE Li*

(Department of Pediatrics,the First Affiliated Hospital of China Medical University,Shenyang 110001,China)

ObjectiveTo study the effect of mitogen-activated protein kinase (MAPK) signal pathway on the inhibition of proliferation and apoptosis induced by dexamethasone in glucocorticoid-resistance Jurkat cell line.MethodsThe inhibition of proliferation and apoptosis of Jurkat cell,after being treated respectively with dexamethasone,PD98059,SP600125,SB203580 and dexamethasone combined with PD98059,SP600125 and SB203580,was observed.The proliferation and apoptosis was detected by WST-1 assay and flow cytometry respectively using Jurkat cell as the subjects.ResultsThe 24 h and 48 h IC50of dexamethasone to Jurkat cell was 829 μM and 335 μM.Dexamethasone inhibited the proliferation of Jurkat cell in a dose-/time- dependent manner when the concentration was more than 100 μM.Dexamethasone combined with PD98059 and SP600125 could enhance the inhibition effect of dexamethasone,but no significant inhibition effect was observed when it was combined with SB203580.Dexamethasone 10 μM combined with PD98059 20 μM could significantly promote the apoptosis induced by dexamethasone in Jurkat cell.The apoptosis rate rose from 8.5% to 28.4%.ConclusionAcute lymphoblastic leukemia Jurkat cell is resistant to glucocorticoid.Inhibiting p38MAPK has no obvious influence on the proliferation of Jurkat cell,while inhibiting ERK or JNK signal pathway can enhance the effect of dexamethasone on Jurkat cell,thus reversing the resistance of Jurkat to dexamethasone.The activation of ERK and JNK signal pathway plays an important role in glucocorticoid resistance of acute lymphoblastic leukemia.

Mitogen-activated protein kinase signal pathway;Dexamethasone;Resistance;Apoptosis;Jurkat cell

2016-04-27

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科，沈陽(yáng) 110001

遼寧省高等學(xué)?？蒲许?xiàng)目計(jì)劃(2008821)；2.遼寧省博士啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目(20081050)

10.14053/j.cnki.ppcr.201608004