王興政，杜弢，王富勝，潘曉春

(1.甘肅省定西市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，甘肅 定西 743000；2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000)

不同來(lái)源板藍(lán)根種子質(zhì)量比較△

王興政1*，杜弢2，王富勝1，潘曉春1

(1.甘肅省定西市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，甘肅 定西743000；2.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州730000)

目的：比較不同來(lái)源板藍(lán)根種子質(zhì)量，從而制定板藍(lán)根種子的質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。方法：通過(guò)測(cè)定不同種質(zhì)材料的板藍(lán)根種子凈度、種形指數(shù)、千粒重、含水量、生活力、發(fā)芽率，觀察種子的外部特征，使用SPSS19.0軟件，利用聚類分析方法，初步制訂出板藍(lán)根種子的質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果：板藍(lán)根一級(jí)種子飽滿、有紫色光澤、長(zhǎng)寬比小、大小均勻、干燥、無(wú)雜質(zhì)，凈度≥88.3%，種形指數(shù)2.5～3.8之間，千粒重≥9.0g，含水量≦8%，生活力≥93%，發(fā)芽率≥90%；二級(jí)種子較飽滿、略有光澤、大小較均勻、有少許癟粒及雜質(zhì)，凈度在74.3%～88.3%之間，種形指數(shù)3.8～4.1之間，千粒重6.5～9g之間，含水量8～8.5%之間，生活力83.3～93%之間，發(fā)芽率70～90%之間；三級(jí)種子干癟、瘦小、大小不均勻、有不少雜質(zhì)，凈度≦74.3%，種形指數(shù)﹥4.1，千粒重﹤6.5g，含水量≥8.5%，生活力﹤83.3%，發(fā)芽率≦70%。結(jié)論：初步制定出了板藍(lán)根種子品質(zhì)檢驗(yàn)與分級(jí)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

板藍(lán)根；種子；品質(zhì)檢驗(yàn)；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

板藍(lán)根是常用大宗中藥材之一，又名靛青根、藍(lán)靛根、大青根，根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2010版，本品為十字花科植物菘藍(lán)IsatisindigoticaFort.的干燥根[1]。板藍(lán)根在臨床上用途較廣，除板藍(lán)根注射液外，主要常與其它中藥組成復(fù)方廣泛用于治療多種疾病如流感、腮腺炎、乙腦、肝炎，是公認(rèn)的有較好抗病毒效果的少數(shù)中藥之一。目前，絕大部分中藥材種子還沒有相應(yīng)的種子檢驗(yàn)規(guī)程和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致中藥材種子市場(chǎng)混亂，種子質(zhì)量良莠不齊，使種植戶蒙受損失。開展中藥材種子質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)研究，制定種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)規(guī)程，是推進(jìn)中藥材規(guī)范化種植工作的一項(xiàng)重要內(nèi)容[2]。

為規(guī)范板藍(lán)根種子檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)和穩(wěn)定其藥材質(zhì)量，筆者等對(duì)板藍(lán)根種子凈度、千粒重、含水量、生活力及發(fā)芽率等主要品質(zhì)檢驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定[3-4]，經(jīng)過(guò)研究初步制定了種子品質(zhì)檢驗(yàn)及質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試劑

1.1儀器

GHP-9162電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海金揚(yáng)州慧科電子有限公司)，GZX-GF-MBS電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司)。

1.2試劑

pH6.8磷酸緩沖液(青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)，2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)(青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)，高錳酸鉀(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

2 材料與方法

2.1材料

供試種子共計(jì)30份，收集于甘肅省定西市各縣區(qū)和河北安國(guó)、安徽亳州等地，其中定西市農(nóng)科院自有材料22份。所有種質(zhì)材料經(jīng)定西市農(nóng)科院劉效瑞研究員鑒定為十字花科植物菘藍(lán)的種子，樣品具體來(lái)源和編號(hào)詳見表1。

表1 板藍(lán)根種質(zhì)材料

2.2方法

2.2.1扦樣 將整堆種子均勻混合后分成2半，每一半再對(duì)分1次，得到4個(gè)部分。在將每個(gè)部分減半分成8個(gè)部分，排成2行，每行4個(gè)部分；合并和保留交錯(cuò)部分，如將第1行的1、3部分和第2行的2、4部分合并，把其它的4部分拿開；將所得的合并作為試樣樣本。重復(fù)取樣直至分至所需的樣品重量為止。但重復(fù)樣品需獨(dú)立分取，在分取第1份試樣后，第2份試樣或半試樣須將送檢樣品一分為二的另一部分中分取[5]。

2.2.2凈度分析 將樣品放在凈度分析臺(tái)上，將試樣分離成干凈種子和一般雜質(zhì)2種成分后分別稱重，計(jì)算。

2.2.3種子形態(tài) 取板藍(lán)根凈種子，每個(gè)批號(hào)100粒，用游標(biāo)卡尺測(cè)量種子的長(zhǎng)和寬。

2.2.4重量測(cè)定 采取千粒法測(cè)定板藍(lán)根種子重量。將凈度分析后的純凈種子用四分法分成4份，從每份中取250粒，共1000粒為1組，重復(fù)3次，稱重計(jì)算平均值。

2.2.5含水量測(cè)定 采用高恒溫烘干法。先將稱量瓶于105℃下烘干至恒重然后稱重；再將各個(gè)樣品放入預(yù)先恒重的稱重瓶?jī)?nèi)，稱重。然后打開瓶蓋，放入預(yù)熱至145℃的烘箱內(nèi)關(guān)好箱門，保持溫度130℃。分別于1h、2h、3h和4h后取出，蓋上蓋子置于干燥器內(nèi)冷卻后取出稱重。

2.2.6種子生活力測(cè)定TTC溶液的配制：用pH6.8的磷酸緩沖溶液將2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)配成0.5%的溶液，裝在棕色瓶中避光保存。染色前的預(yù)處理：將種子浸入清水中浸泡24h，除去不飽滿的種子，用刀片縱切成兩瓣，使胚1/2等分。在其他因子保持一致的條件下，染色1h，2h，3h，4h，5h后測(cè)定板藍(lán)根種子生活力。

2.2.7發(fā)芽試驗(yàn) 種子預(yù)處理：將種子用0.2%高錳酸鉀消毒10min后，沖洗干凈。

溫度處理：將同一批凈種子中采用四分法取100粒浸泡約24h、沖洗后置于濾紙鋪墊的培養(yǎng)皿發(fā)芽床上，每盤30粒，1次重復(fù)，分別置于10℃、15℃、20℃和25℃無(wú)光照培養(yǎng)。每日統(tǒng)計(jì)發(fā)芽情況，同時(shí)補(bǔ)充水分。

記錄：發(fā)芽開始后，每天記錄萌發(fā)的正常幼苗數(shù)直至無(wú)萌發(fā)種子出現(xiàn)為止。試驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的嚴(yán)重霉?fàn)€的種子隨時(shí)揀出并加以記錄。發(fā)芽標(biāo)準(zhǔn)以突破種皮的胚軸長(zhǎng)度到達(dá)真種子自身的長(zhǎng)度為發(fā)芽。相關(guān)指標(biāo)的計(jì)算公式如下：

n為最終達(dá)到的正常發(fā)芽粒數(shù)；N為供試種子數(shù)。

3 結(jié)果與分析

3.1種子形態(tài)

板藍(lán)根種子為角果，扁平翅狀，中部有明顯脊線，種皮褐色或紫色，稍有光澤。

3.2不同板藍(lán)根種質(zhì)材料凈度分析

從表2可知，板藍(lán)根種子的凈度在56.4～91.78%之間，以樣品BLG2012-13凈度最高，達(dá)到91.78%，樣品北京板藍(lán)根種子凈度最低，只有56.4%。

表2 不同種質(zhì)材料板藍(lán)根種子凈度

3.3不同板藍(lán)根種質(zhì)材料種子形態(tài)和千粒重

經(jīng)測(cè)定，板藍(lán)根種子長(zhǎng)度為1.26～1.87cm，寬度為0.16～0.50cm，種形指數(shù)(長(zhǎng)寬比)為2.51～9.44(表3)。種子千粒重是種子活力指標(biāo)之一，是指種子充實(shí)飽滿的程度。種子充實(shí)飽滿表明種子中儲(chǔ)藏物質(zhì)豐富，有利于種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)。從表4中可知板藍(lán)根種子的千粒重為5.21～13.77g，18號(hào)樣品種子較大，故千粒重達(dá)到13.77g，而29號(hào)樣品種子較小，皺縮嚴(yán)重，千粒重僅為5.21g。經(jīng)方差分析，不同種質(zhì)材料的千粒重差異之間極顯著。

表3 不同種質(zhì)材料板藍(lán)根種子的形態(tài)值

3.4含水量測(cè)定

用130℃對(duì)2份板藍(lán)根種質(zhì)材料測(cè)定含水量，由圖1可知高溫法烘干4h后含水量不發(fā)生明顯變化，故最終使用130℃高溫法烘干4h測(cè)定板藍(lán)根種子含水量。不同種質(zhì)材料板藍(lán)根種子的含水量在7.64～9.56%之間，見表6。

表4 不同種質(zhì)材料板藍(lán)根種子千粒重

注：差異顯著性分析取A=0.01水平，數(shù)值后字母不同者為具有顯著性差異(表4，5，7，8同)。

圖1 130 ℃高溫法不同烘干時(shí)間下板藍(lán)根種子含水量

3.5生活力測(cè)定

根據(jù)觀測(cè)，種子最后染色時(shí)間為染色4h，大于4h種子染色程度會(huì)加深而染色比例不變；染色5h后，隨著時(shí)間的增加染色程度不變。5h染色程度差異見圖2。故取5h為測(cè)定時(shí)間測(cè)定不同種質(zhì)材料生活力。不同種質(zhì)材料種子生活力相差較大，5份種質(zhì)材料生活力達(dá)到100%，6份種質(zhì)材料生活力低于70%，最低的只有40%(表5)。無(wú)活力種子、活力較弱種子、高活力種子染色程度區(qū)別見圖3，隨著種子活力的增加，染色的程度開始加深，按染色程度可相應(yīng)劃分為灰褐色、淺紅色、深紅色。

表5 不同種質(zhì)材料板藍(lán)根種子含水量、生活力和發(fā)芽率 (%)

3.6發(fā)芽率測(cè)定

根據(jù)測(cè)定，板藍(lán)根種子10℃時(shí)活性受到抑制，沒有發(fā)芽的種子，隨著溫度的增加，發(fā)芽率逐漸上升，25℃達(dá)到最高，因此以25℃為板藍(lán)根種子的最適溫度(圖2)。從板藍(lán)根種子的發(fā)芽趨勢(shì)來(lái)看，板藍(lán)根種子的發(fā)芽主要集中在第5～12d(圖3)，第12d后再無(wú)發(fā)芽的種子，因此可將第5d作為初次計(jì)數(shù)時(shí)間，第12d作為末次計(jì)數(shù)時(shí)間，發(fā)芽高峰期在5～8d。不同種質(zhì)材料板藍(lán)根種子發(fā)芽率相差較大(表5)。其中處理5的種子發(fā)芽率達(dá)到了96%，最低為處理15，發(fā)芽率為4%，發(fā)芽率差值為92%。

圖2 染色5 h后的種子

圖3 不同活力的種子染色區(qū)別

圖4 不同種質(zhì)材料在不同溫度下的發(fā)芽率

圖5 25 ℃時(shí)不同發(fā)芽天數(shù)下的種子發(fā)芽率

4 小結(jié)與討論

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，不同種質(zhì)材料的板藍(lán)根種子質(zhì)量存在較大差距。在分級(jí)的6項(xiàng)指標(biāo)中，發(fā)芽率最為重要，發(fā)芽率對(duì)種子來(lái)說(shuō)相對(duì)固定，可相對(duì)反映出種子的田間出苗率；生活力反映了種子的活力高低；千粒重反映了種子飽滿程度和營(yíng)養(yǎng)物含量；種形指數(shù)也從直觀上反映了種子的飽滿程度；凈度和水分受人為和儲(chǔ)藏條件的影響較大，可通過(guò)對(duì)種子的初加工與儲(chǔ)藏來(lái)提高種子質(zhì)量。在種子檢測(cè)環(huán)節(jié)中，含水量的測(cè)定應(yīng)采用130℃高溫法烘干4h；生活力的測(cè)定可取5h為測(cè)定時(shí)間，隨著種子活力的增加，染色的程度開始加深；在種子發(fā)芽率的測(cè)定中，25℃為板藍(lán)根種子發(fā)芽的最適溫度，可將第5d作為初次計(jì)數(shù)時(shí)間，第12d作為末次計(jì)數(shù)時(shí)間。為了對(duì)市場(chǎng)上的板藍(lán)根種子質(zhì)量進(jìn)行檢驗(yàn)和有效控制，加快制定板藍(lán)根種子質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)非常必要。在標(biāo)準(zhǔn)的制定中需要結(jié)合藥用植物種子自身特征進(jìn)行研究，筆者等以板藍(lán)根種子凈度、千粒重、種形指數(shù)、水分、生活力和發(fā)芽率6項(xiàng)指標(biāo)為主要依據(jù)，初步制定了板藍(lán)根種子質(zhì)量的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：板藍(lán)根一級(jí)種子飽滿、有紫色光澤、長(zhǎng)寬比小、大小均勻、干燥、無(wú)雜質(zhì)，凈度≥88.3%，種形指數(shù)2.5～3.8之間，千粒重≥9.0g，含水量≦8%，生活力≥93%，發(fā)芽率≥90%；二級(jí)種子較飽滿、略有光澤、大小較均勻、有少許癟粒及雜質(zhì)，凈度在74.3%～88.3%之間，種形指數(shù)3.8～4.1之間，千粒重6.5～9g之間，含水量8～8.5%之間，生活力83.3～93%之間，發(fā)芽率70～90%之間；三級(jí)種子干癟、瘦小、大小不均勻、有不少雜質(zhì)，凈度≦74.3%，種形指數(shù)﹥4.1，千粒重﹤6.5g，含水量≥8.5%，生活力﹤83.3%，發(fā)芽率≤70%。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：383.

[2] 暢晶，張媛媛，李莉，等.射干種子品質(zhì)檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)中藥雜志，2011，34(7)：828-829.

[3] 陳瑛.實(shí)用中藥種子技術(shù)手冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1999.

[4] 劉淑芹.常用發(fā)芽方法的比較試驗(yàn)[J].種子世界，1993(3)：52.

[5] 周濤，江維克，陳敏，等.何首烏種子品質(zhì)檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(7)：229-233.

StudyonSeedQualityofIsatidisRadixfromDifferentSources

WANGXingzheng1，DUTao2，WANGFusheng1，PANXiaochun1

(1.DingxiAcademyofAgriculturalSciences，Dingxi743000，China；2.GansuUniversityTraditionalChineseMedicine，Lauzhou730010，China)

Objective：To compare the seed quality of Isatidis Radix from different sources，then propose the seed quality standard of Isatidis Radix.Methods：The seed purity，shape index，1000-grain weight，water content，vitality，germination rate of seed of Isatidis Radix from different germplasm resources were measured，and seed characteristics were observed.Cluster analysis was used to analyze to data.Results：The first level seed was purple and thoroughly rounded，small aspect ratio，uniform size，dryness，without impurities，seed purity was above88.3%，1000-grain weight was above9.0g，water content was lower than8%，vitality was over93%，germination rate was over90%.The second level seed was relatively rounded，had a little flat grain and impurities，seed purity was between74.3～88.3%，1000-grain weight was between6.5～9g，water content was between8～8.5%，vitality was between83.3～93%，germination rate was between70～90%.The third level seed was thin，uneven size，there are many impurities，seed purity was lower than74.3%，1000-grain weight was below6.5g，water content was above8.5%，vitality was below83.3%，germination rate was below70%.Conclusion：The seed quality inspection and classification standard for Isatidis Radix was preliminarily drafted.

Isatidis Radix；seed；quality detection；quality standard

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.016

2015-12-22)

2013年中醫(yī)藥部門公共衛(wèi)生專項(xiàng)(國(guó)中醫(yī)藥辦規(guī)財(cái)發(fā)[2013]41)；國(guó)家科技惠民項(xiàng)目(S2013GMG10004)

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王興政，助理研究員；研究方向：中藥材育種與栽培；E-mail：wangxingzheng763@163.com