楊小云,段黎娟，竇運(yùn)修,付麗娜,龐　榕

(黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南　鄭州　450063)

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穿心蓮內(nèi)酯微球中穿心蓮內(nèi)酯含量測(cè)定方法的建立

楊小云,段黎娟，竇運(yùn)修,付麗娜,龐榕

(黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院，河南鄭州450063)

建立了穿心蓮內(nèi)酯微球中穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定方法。采用紫外分光光度法，精密稱量穿心蓮內(nèi)酯適量，用95%乙醇溶液溶解稀釋，在200～500 nm 波長(zhǎng)掃描，測(cè)得最大吸收波長(zhǎng)為225 nm。標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=29.122x-0.2382，R2=0.9992，表明在5.0～22.5 μg/mL線性關(guān)系良好。該方法重現(xiàn)性、回收率和穩(wěn)定性均符合實(shí)驗(yàn)要求，輔料對(duì)檢測(cè)無(wú)干擾。

穿心蓮內(nèi)酯微球；紫外分光光度法；含量測(cè)定

穿心蓮內(nèi)酯(andrographolide)為爵床科植物穿心蓮[Andrographis paniculata Nees]中提取得到的二萜內(nèi)酯類化合物, 分子式為 C20H30O5, 是中藥穿心蓮的主要活性成分之一[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明, 穿心蓮內(nèi)酯具有抗炎抗菌、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、治療心腦血管疾病、保肝利膽、抗腫瘤等作用, 具有毒性小, 價(jià)格低的特點(diǎn)。明膠微球是明膠的一種衍生物，作為藥物載體[ 2]，能夠明顯降低藥物崩解速度，延長(zhǎng)體內(nèi)的存留時(shí)間，增加藥物療效[3]。制備微球的方法很多，有乳化 - 化學(xué)交聯(lián)法，揮散有機(jī)溶劑法，照射聚合法，加熱固化法等，本文采用明膠做基質(zhì)，采取乳化-化學(xué)交聯(lián)法制備穿心蓮內(nèi)酯明膠微球[4]。

1　主要材料和儀器

穿心蓮內(nèi)酯(含量≥98%)，西安開來(lái)生物工程有限公司；明膠，天津市興復(fù)精細(xì)化工研究所；異丙醇，天津市德恩化學(xué)試劑有限公司；Span-80，天津市四友精細(xì)化學(xué)有限公司；液體石蠟，鄭州派尼化學(xué)試劑廠；37%甲醛，洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠；95%乙醇，鄭州派尼化學(xué)試劑廠。以上試劑均為分析純。

TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京譜析通用儀器有限責(zé)任公司；CJJ79-1磁力攪拌器，江蘇曉陽(yáng)電子儀器廠-金壇；HH-2雙孔電子恒溫水浴鍋，上?？莆鲈囼?yàn)儀器廠；TL80-1型醫(yī)用離心機(jī)，蘇藥管械生產(chǎn)；KQ-300V型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；FA1004型電子天平，上海良平儀器儀表有限公司。

2　方法和結(jié)果

2.1穿心蓮內(nèi)酯微球的制備

稱取適量明膠置于燒杯中，加水靜置30 min，使其充分膨脹，于恒溫水浴鍋中加熱攪拌使其溶解，保溫備用。精密稱取20 mg穿心蓮內(nèi)酯置燒杯中，加入液體石蠟約4 mL，攪勻，再加入司盤-80 0.6 mL，繼續(xù)攪拌至形成O/W型初乳；將其冷卻至0～4 ℃，緩慢加入化學(xué)交聯(lián)劑約1 mL(37%甲醛0.375 mL與異丙醇0.625 mL混合)，用20%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8～9，攪拌3 h，高速離心(2600-3000 r/min)破乳析出微球，棄去上層液，保留微球沉淀，微球用適量異丙醇離心5 min，依次洗滌數(shù)次，室溫干燥得淡黃色的粉末[5]。

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

稱取適量穿心蓮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品，用95%乙醇溶液在微熱條件下溶解并稀釋適當(dāng)倍數(shù)備用；按處方比例稱取適量的輔料，置100 mL容量瓶中，用95%乙醇溶液定容，過(guò)濾后備用。分別取上述兩溶液于紫外分光光度計(jì)上在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，通過(guò)紫外掃描得知穿心蓮內(nèi)酯最大吸收波長(zhǎng)為225 nm，且輔料在225 nm處有沒(méi)有干擾。見(jiàn)圖1、圖2。

圖1　空白輔料紫外掃描圖譜

圖2　穿心蓮內(nèi)酯紫外掃描圖譜

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密稱取的穿心蓮內(nèi)酯10 mg，置于100 mL容量瓶中，加適量95%乙醇溶解并定容，配制成濃度為0.1 mg/mL的儲(chǔ)備液。分別精密移取儲(chǔ)備液適量置10 mL容量瓶中，用95%乙醇稀釋至刻度，配成穿心蓮內(nèi)酯濃度分別為5,10,12.5,20,22.5 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在225 nm處分別測(cè)定，以吸光度(A)對(duì)濃度(C)作圖，得到線性回歸方程y=29.122x-0.2382,R2=0.9992。表明穿心蓮內(nèi)酯在濃度5.0～22.5 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取穿心蓮內(nèi)酯2.0 mg，用95%乙醇溶液定容至10 mL容量瓶中，濃度為0.2 mg/mL。然后分別稀釋至濃度為10 μg/mL，15 μg/mL ，20 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以95%乙醇溶液為空白，在225 nm 測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定5次，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　穿心蓮內(nèi)酯重現(xiàn)性測(cè)定結(jié)果

2.5精密度試驗(yàn)

表2　穿心蓮內(nèi)酯日內(nèi)精密度測(cè)定結(jié)果

表3　穿心蓮內(nèi)酯日間精密度測(cè)定結(jié)果

精確配制穿心蓮內(nèi)酯3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于1 d內(nèi)分別測(cè)定5次，計(jì)算日內(nèi)誤差；同法每日測(cè)定1次連續(xù)測(cè)定5 d，計(jì)算日間誤差，結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取0.2 mg/mL的穿心蓮內(nèi)酯溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h 測(cè)定吸光度，結(jié)果分別為0.577、 0.567、0.603、0.587、0.585、0.595，RSD為2.18%。結(jié)果表明，該方法測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定性良好。

2.7回收率試驗(yàn)

分別準(zhǔn)確稱取126.6 mg的空白微球3份，和穿心蓮內(nèi)酯3份混合后置于燒杯中，加入40 mL 95%乙醇，將燒杯置于40～50 ℃的水溶液中先超聲1 h，冷卻到室溫，攪拌震蕩3 h 使微球完全水解。微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液定容至10 mL容量瓶中。在225 nm 處測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　穿心蓮內(nèi)酯回收率測(cè)定結(jié)果

2.8穿心蓮內(nèi)酯微球樣品的測(cè)定

制得的微球精密稱定，然后置于研缽中加入95%乙醇4 mL充分研磨后倒入試管，進(jìn)行封口處理。將試管置于40～50 ℃的水溶液中超聲1 h，冷卻至室溫，微孔濾膜過(guò)濾，取適量續(xù)濾液定容至10 mL容量瓶中，以95%乙醇作為空白溶劑，采用此法(紫外分光光度法)測(cè)定吸收度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，可計(jì)算微球的載藥量和包封率(載藥量=微球中所含藥物重量/微球總重量×100%；包封率=系統(tǒng)中包封的含藥量/系統(tǒng)中包封和未包封的總藥量×100%)。三種不同制備工藝條件下制得含藥微球的載藥率與包封率的結(jié)果，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5　紫外分光光度法測(cè)定含藥微球的載藥量與包封率

3　結(jié)　論

近年來(lái)，穿心蓮內(nèi)酯應(yīng)用研究廣泛[ 6]，本研究建立了紫外分光光度法，該方法精密度良好，重現(xiàn)性良好，樣品在12 h 內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=29.122x-0.2382，R2=0.9992，表明在5.0～22.5 μg/mL線性關(guān)系良好。回收率結(jié)果良好，說(shuō)明輔料對(duì)于穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定沒(méi)有產(chǎn)生干擾。與其它光譜分析方法相比，紫外分光光度法具有靈敏度高，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。其儀器設(shè)備和操作都比較簡(jiǎn)單，成本低，分析速度快。本研究各項(xiàng)結(jié)果均合格，表明紫外分光光度法可以用于穿心蓮內(nèi)酯微球中穿心蓮內(nèi)酯的含量測(cè)定。

[1]葉再元,李曙光.穿心蓮內(nèi)酯的藥理活性作用[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2008,26(5):984-986.

[2]Maria Angela Vandelli ,Marcello Romagnoli ,A less-andra Monti ,Manuela Gozzi,Paolo G uerra,Francesco Rivasi,Flavio Forni.[J].Controlled Release ,2004,96(1):67-84.

[3]余麗麗,范濤,楊黎燕,等.明膠微球載藥及其體外釋放性能研究[J].化工科技,2012,20( 6):11-14.

[4]陸彬.藥劑學(xué)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2003:437.

[5]張興德,郁紅禮,周玲玲,等.正交法篩選莪術(shù)油微球制備工藝[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2007,23(5):304-306.

[6]毋福海,李光喜,梁漢明,等. HPLC測(cè)定復(fù)方穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J].華西藥學(xué),2004,19(2):133-135.

Establishment on Content Determination Method of Andrographolide in Andrographolide Microsphere

YANG Xiao-yun, DUAN Li-juan, DOU Yun-xiu, FU Li-na, PANG Rong

(Medical College, Huanghe Science &Technology College, Henan Zhengzhou 450063, China)

A method for the content determination of andrographolide in andrographolide microspheres was established. Using UV spectrophotometry, weighing the appropriate amount of andrographolide, dissolved in 95% ethanol solution diluted in 200～500 nm wavelength scanning, respectively, the maximum absorption wavelength was detected as 225 nm. Results showed that the calculated standard curve was y=29.122x-0.2382, R2=0.9992, with a good linear relationship in 5.0～22.5 μg/mL. The method showed that reproducibility, recovery and stability met the requirement of experiment, and there was no interference from accessories.

andrographolide microspheres; UV spectrophotometry; content determination

楊小云(1985-),女,講師,研究方向?yàn)楝F(xiàn)代給藥系統(tǒng)和制劑新技術(shù)。

R969

A

1001-9677(2016)016-0142-03