郭　磊，李　新

（1.周口市川匯區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，河南 周口 466000；

2.商丘市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心）

一種獸用補氣健脾復(fù)方顆粒制劑對仔豬免疫功能和生長性能的影響

郭磊1，李新2

（1.周口市川匯區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，河南 周口 466000；

2.商丘市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗中心）

為觀察一種獸用補氣健脾復(fù)方顆粒制劑對仔豬免疫功能和生長性能的影響，試驗以杜長大仔豬為試驗動物，黃芪多糖為對照藥物（200 mg/kg飼料），采用高、中、低（8 g/kg、4 g/kg、2 g/kg飼料）3個劑量，通過檢測豬瘟抗體效價，檢測血清中IL-2和IFN-γ含量。結(jié)果顯示，該復(fù)方制劑高、中劑量（8 g/kg、4 g/kg飼料）能促進仔豬的生長發(fā)育，提高血清中IL-2、IFN-γ含量和豬瘟抗體水平。

補氣健脾復(fù)方制劑；免疫功能；仔豬

目前，盡管在養(yǎng)豬生產(chǎn)中對許多疾病采用相應(yīng)的疫苗進行預(yù)防，由于病原種類極其復(fù)雜，而且不斷變異，使疫苗的研制往往滯后于疫病的發(fā)生，單純依賴疫苗不能解決疫病的防治問題。解決豬疫病防治問題應(yīng)從提高其內(nèi)在免疫機能入手，通過增強其自身的抗病能力，達到預(yù)防疫病的目的。

中藥具有高效、低毒、低殘留等優(yōu)點，其中許多種類還是很好的免疫增強劑，可以提高機體的免疫水平［1］。中藥以其在提高免疫功能方面的獨特優(yōu)勢，在畜禽業(yè)中得到了越來越普遍的推廣應(yīng)用。該試驗為觀察一種獸用補氣健脾復(fù)方顆粒制劑（以下簡稱“復(fù)方制劑”）對仔豬免疫功能和生長性能的影響，對該復(fù)方制劑進行臨床試驗，進一步考察該制劑的療效和毒副反應(yīng)，為該制劑的大規(guī)模生產(chǎn)及應(yīng)用提供合理、科學(xué)的臨床試驗數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗時間、地點

2012年4月15日至2013年5月8日河南省周口市某豬場、周口市川匯區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心。

1.2材料

1.2.1試驗動物選用200頭斷奶仔豬，由河南省周口市某豬場提供，仔豬品種為杜長大豬，斷奶日齡為出生25～35 d（平均30 d），豬只健康狀況良好。

1.2.2試驗藥品和試劑某復(fù)方制劑，批號：20120302；黃芪多糖粉，北京某公司，批號：20111123；豬瘟疫苗，廣東永順生物制藥有限公司，批號：2011046；豬瘟正向血凝診斷抗原、陽性血清、陰性血清及稀釋液由中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所提供，批號為20121009、20121003和20121003；豬血清IL-2 ELISA檢測試劑盒，天津索羅門生物科技有限公司；豬瘟血清IFN-γ ELISA檢測試劑盒，天津索羅門生物科技有限公司；仔豬飼料，北京某飼料有限公司提供。

1.2.3主要儀器設(shè)備促凝管，湖南安信醫(yī)用高分子材料有限公司，湘食藥監(jiān)械（準）字2009第2410045號；酶標儀（RT2100C），美國雷杜公司；電子天平（MR200A），上海第二天平儀器廠；電熱鼓風(fēng)干燥箱，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；恒溫培養(yǎng)振蕩器（ZHWY-103D），上海智城分析儀器制造有限公司；超凈工作臺（LGJ-10），北京四環(huán)科學(xué)儀器廠。

1.3方法

1.3.1試驗分組及處理將體質(zhì)量相近、健康仔豬100頭（公母各半），按照性別、體質(zhì)量、窩別對等分配原則隨機分為5組：試驗組（A組、B組、C組）、黃芪多糖對照組（D組）和空白對照組（E組）。每組20頭。試驗組（A組、B組、C組）于平均31日齡（免疫前3 d）開始，按高、中、低三個劑量（8 g/kg、4 g/kg、2 g/kg飼料）拌料添加復(fù)方制劑1 w；黃芪多糖對照組（D組）同時段拌料添加黃芪多糖（200 mg/kg飼料）；空白對照組（E組）不添加任何藥物。平均日齡34 d用1頭份劑量（按說明書）進行豬瘟疫苗首免，于平均日齡65 d用1頭份劑量進行豬瘟疫苗二免。并分別于平均日齡34 d、48 d和60 d稱量各豬只體質(zhì)量，計算料重比；靜脈采血2 ml，析出血清，備用。試驗分組及處理詳見表1。

表1　試驗動物分組及處理

1.3.2試驗豬的管理試驗豬于哺乳期（23 d）進行公豬去勢，平均日齡30 d時斷奶，轉(zhuǎn)欄（由產(chǎn)仔房轉(zhuǎn)入保育舍），分組，平均日齡60 d時稱重結(jié)束試驗。試驗豬自由采食，自由飲水，試驗組與對照組飼料配方相同，40 d更換保育豬后期料。

1.3.3測定指標及方法

1.3.3.1豬瘟抗體效價檢測分別于平均34日齡、48日齡和60日齡試驗豬靜脈采血2 ml，析出血清，按試劑盒說明書采用正向間接血凝試驗檢測豬瘟抗體水平。

1.3.3.2血清中IL-2含量的檢測對34日齡、48日齡和60日齡試驗豬靜脈采血制備的血清，用ELISA試劑盒檢測其IL-2的含量，其操作方法和判定標準，均按說明書進行。

1.3.3.3血清中IFN-γ含量的檢測對34日齡、48日齡和60日齡試驗豬靜脈采血制備的血清，用ELISA試劑盒檢測其IFN-γ的含量，其操作方法和判定標準，均按說明書進行。

1.3.3.4生長性能測定34日齡和60日齡時分別稱重，計算出初始平均體質(zhì)量、結(jié)束時的平均體質(zhì)量和平均增重；逐日逐欄稱量記錄飼料消耗量，計算飼料報酬（料重比）。料重比＝飼養(yǎng)期內(nèi)所耗標準飼料量（kg）/同期增重（kg）

此外，還對試驗豬群的精神狀態(tài)、食欲、糞便狀態(tài)及發(fā)病情況、死亡淘汰情況等進行臨床觀察。

1.4統(tǒng)計方法

采用spss19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2　結(jié)果與分析

2.1對仔豬豬瘟抗體效價的影響

34日齡，各組豬瘟抗體水平相近，差異不顯著（P＞0.05）。48日齡，豬瘟抗體水平A、B組顯著高于C、E組，差異顯著（p＜0.05）。60日齡，豬瘟抗體水平，A、B組高于C、E組，差異顯著（p＜0.05或p＜0.01）；D組高于E組，差異顯著（p＜0.05）。結(jié)果詳見表2。

表2　對仔豬豬瘟抗體效價的影響（pg/ml）

2.2對仔豬血清IL-2含量的影響

34日齡，各組仔豬血清IL-2含量水平相近，差異不顯著（P＞0.05）。48日齡，血清IL-2含量，A組和B組顯著高于E組，差異顯著（p＜0.05）；C組、D組和E組，差異不顯著（P＞0.05）。60日齡，血清IL-2含量，A組和B組顯著高于C組和E組，差異極顯著（p＜0.01）。結(jié)果詳見表3。

表3　對仔豬血清IL-2的影響（單位：pg/ml）

2.3對仔豬血清IFN-γ含量的影響

34日齡，各組仔豬血清IFN-γ含量水平相近，差異不顯著（P＞0.05）。48日齡，血清IFN-γ含量，A組和B組高于E組，差異顯著（p＜0.01或p＜0.05）；D組和其他各組相比較，差異均不顯著（P＞0.05）。60日齡，血清IFN-γ含量，A組和B組顯著高于C組和E組，差異極顯著（p＜0.01）；D組和其他各組相比較，差異均不顯著（P＞0.05）。結(jié)果詳見表4。

表4　對仔豬血清IFN-γ的影響（單位：pg/ml）

2.4對仔豬生長性能及飼料利用的影響

34日齡各組仔豬平均體質(zhì)量相近，差異不顯著（P＞0.05）。60日齡平均體質(zhì)量和試驗期平均增重，A組和B組高于C組和E組，差異顯著（p＜0.05）；D組與其他各組相比，無顯著差異（P＞0.05）。A組和B組的料重比低于D組，差異顯著（p＜0.05）；D組低于C組和E組，差異顯著（p＜0.05）。料重比A組和B組低于D組，差異顯著（p＜0.05）；D組低于C組和E組，差異顯著（p＜0.05）。結(jié)果詳見表5。

表5　對仔豬生長性能及飼料利用率的影響

2.5對仔豬其他生理狀況的影響

復(fù)方制劑剛添加到飼料中時，未見不良反應(yīng)。通過對各組豬群的精神狀態(tài)、食欲、糞便狀況及發(fā)病、死亡等情況的臨床觀察，輕度腹瀉C組和E組各2頭次（發(fā)病率為8%）、B組和D組各1頭次（發(fā)病率為4%），A組無腹瀉豬只，各組之間無顯著差異（P＞0.05）。其他情況各組均未顯現(xiàn)異常，均無死亡。

3　討論

該復(fù)方制劑中有黃芪、刺五加、甘草、茯苓等成分，其中多種中藥能增強動物的體液免疫和細胞免疫。張訓(xùn)海等研究表明，黃芪多糖也可以作為體液免疫增強劑［2］。刺五加對多種動物具有免疫增強作用，能促進免疫器官的發(fā)育，增強免疫功能［3-5］。甘草多糖具有多種免疫增強功能，能激活網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)［6］，具有抗補體活性［7］，直接刺激B淋巴細胞增殖，誘導(dǎo)IgM、IgG的產(chǎn)生，還能誘生和促誘生干擾素，增強機體的殺傷細胞的活性［8］。王旭貞等報道，黃芪提取物能提高雞血清ND和IBD抗體效價［9］。Han等研究表明刺五加多糖可以使分泌IgM的B細胞數(shù)量顯著增加［10］。劉新義等通過檢測豬瘟疫苗抗體水平，證實了黃芪多糖對豬免疫功能的增強作用［11］。劉霞等證實甘草多糖具有促進淋巴細胞增殖的作用［12］。鄧媛媛等報道，茯苓不同提取物質(zhì)部位能不同程度促進小鼠腹腔內(nèi)吞噬百分率和吞噬指數(shù)，能明顯增加小鼠血清內(nèi)免疫因子IL-2和TNF-α含量［13］。邵珊等研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖能增強豬對PRRSV滅活疫苗的免疫應(yīng)答能力，主要通過極大地促進外周血淋巴細胞的增殖，使抗體提早產(chǎn)生并提高抗體滴度和IL-2表達水平［14］。

體液免疫是由B淋巴細胞介導(dǎo)的一種重要的特異性免疫反應(yīng)，是機體抗御傳染病的主要因素之一，主要評價指標為抗體水平。IL-2即白細胞介素2，是參與免疫應(yīng)答的重要細胞因子。IFN-γ是由機體活化的T淋巴細胞和NK細胞產(chǎn)生的一種糖蛋白，除具有抗病毒、抗胞內(nèi)寄生蟲、抗細胞增殖外，還具有強大的免疫調(diào)節(jié)功能。故筆者將豬瘟抗體效價、血清IL-2含量、血清IFN-γ含量作為免疫功能的檢測指標。

試驗結(jié)果顯示，復(fù)方制劑高、中劑量能顯著升高仔豬豬瘟疫苗的抗體水平、血清IL-2含量、血清IFN-γ含量，且其效果均優(yōu)于黃芪多糖。另外，復(fù)方制劑高、中劑量組平均體質(zhì)量和試驗期平均增重顯著高于對照組，料重比顯著低于對照組。說明復(fù)方制劑高、中劑量組能促進仔豬的生長發(fā)育，降低料重比。應(yīng)該與復(fù)方制劑中富含有多種氨基酸、糖、葉酸、甜菜堿、亞麻酸、VA和VB，以及Fe、Ca、Mn、 Zn、Cr、Co等多種微量元素有關(guān)。

4　結(jié)論

經(jīng)過該研究可以發(fā)現(xiàn)，復(fù)方制劑具有增強機體免疫功能和促進仔豬生長發(fā)育作用，綜合試驗結(jié)果和臨床實際情況，建議以中劑量，即4 g/kg為推薦劑量。給藥方式為：拌料，推薦劑量為：每千克飼料加入4 g復(fù)方制劑，連續(xù)使用7 d。

［1］謝仲權(quán)，牛淑琦.天然植物飼料添加劑生產(chǎn)技術(shù)與質(zhì)量標準［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2005：23～28．

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1004-5090（2016）08-0010-03

2016-05-27）