段志芬 成浩 尚衛(wèi)瓊 李友勇 楊毅堅(jiān) 楊盛美 劉本英 矣兵 楊興榮 郭順云

摘要：以云南景洪49株野生古茶樹資源為材料，采用高效液相色譜法測定茶葉中的咖啡堿（CAF）含量，用兒茶素總量、茶多酚和氨基酸含量3個(gè)生化指標(biāo)對低CAF古茶樹資源品質(zhì)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，49株古茶樹資源CAF 含量變幅為 0.55%～4.76% ，平均含量為3.04%，初步篩選出曼加坡坎3號(hào)、光明水庫2號(hào)、大寨5號(hào)和曼加坡坎6號(hào)大茶樹4個(gè)低咖啡堿特異古茶樹資源，其中曼加坡坎6號(hào)大茶樹CAF含量最低，曼加坡坎3號(hào)和光明水庫2號(hào)大茶樹屬高茶多酚資源，可為開發(fā)特色茶產(chǎn)品提供資源。

關(guān)鍵詞：古茶樹； 咖啡堿； 篩選；生化指標(biāo)

中圖分類號(hào)：S571.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2016）09-0032-04

AbstractThe caffeine （CAF） content of 49 wild ancient tea tree germplasms from Jinghong City of Yunnan Province were detected using high performance liquid chromatography （HPLC）. Then the synthetic quality evaluation of screened tea germplasms with low CAF content was carried out with 3 biochemical indexes， including epigallocatechin gallate content， tea polyphenol content and free amino acid content. The results showed that the CAF content of 49 ancient tea trees ranged from 0.55% to 4.76% with an average of 3.04%. After preliminary screening， 4 tea germplasms with low CAF content were screened， including Manjiapokan No 3， Guangming Reservoir No 2， Dazhai No 5 and Manjiapokan No 6. Among which， Manjiapokan No 6 had the lowest CAF content， and Manjiapokan No 3 and Guangming Reservoir No 2 belonged to the high tea polyphenol germplasms. They provided fine germplasm resources for the development of special tea products.

KeywordsAncient tea tree； Caffeine； Screening； Biochemical index

咖啡堿是一種甲基黃嘌呤，具有消食、少睡、利尿、益思等保健功能，適度攝入可以興奮神經(jīng)中樞、提高反應(yīng)速度、 集中注意力和消除疲勞，常用作興奮性藥劑。 但攝入過量會(huì)引起焦燥不安、失眠、易醒、腹瀉、血壓升高、心悸和胚胎畸形等癥狀，不適于兒童、孕婦、老人及神經(jīng)衰弱等患者飲用。

景洪市位于云南省南端，地處東經(jīng)100°25′至101°31′，北緯21°27′至22°36′，海拔485～2 197 m，屬北熱帶和南亞熱帶濕潤季風(fēng)氣候，年平均氣溫在18.6～21.9℃，年平均降水量在1 200～1 700 mm。景洪市獨(dú)特的地理位置和氣候環(huán)境適宜茶樹生長，具有豐富的野生茶樹資源，但目前相關(guān)研究并不多。筆者對景洪市野生古茶樹資源春季茶樣進(jìn)行生化成分分析，旨在全面了解其春茶的品質(zhì)特點(diǎn)，為優(yōu)質(zhì)茶樹資源的篩選提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料來源

選取景洪市內(nèi)不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)茶區(qū)具有代表性的49株大茶樹資源作為試驗(yàn)材料（表1），采摘標(biāo)準(zhǔn)為 1 芽 2 葉，采摘時(shí)間為2015 年 4 月。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1樣品制備根據(jù)《茶樹種質(zhì)資源描述規(guī)范和數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)》的方法，制作分析樣，粉碎后待測。

1.2.2生化成分測定茶多酚和氨基酸總量的測定采用國標(biāo)法（ GB/T 8313-2008、GB/T 8314-2013） 。

咖啡喊、兒茶素含量采用 HPLC 法測定：Agilent 1100 Series 高效液相色譜儀（Santa，Clar-a，USA） ，Agilent Zorbax SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm） ，流動(dòng)相為 2% 乙酸（A 相） 和100%乙腈（B 相）。梯度洗脫：0～9 min，6.5% B； 9～12 min，B 相由 6.5% 線性升至15%； 12～16 min，B 相由 15% 線性升至25%； 16～20 min，25% B； 20～26 min，B 相由 25% 線性降至6.5%，間隔 3 min。流速1.0 mL/min，檢測波長278 nm，柱溫 35℃，進(jìn)樣量 5 μL。采用外標(biāo)法，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積大小定性和定量。茶葉樣品大寨4號(hào)大茶樹的色譜圖見圖1。

供試材料編號(hào)種質(zhì)名稱編號(hào)種質(zhì)名稱編號(hào)種質(zhì)名稱01曼加干邊4號(hào)18曼加坡坎2號(hào)34曼播中寨1號(hào)02大寨4號(hào)19大寨3號(hào)35曼加坡坎10號(hào)03曼傘老寨5號(hào)20曼加干邊3號(hào)36曼加坡坎7號(hào)04帕冷一隊(duì)3號(hào)21光明水庫2號(hào)37大寨2號(hào)05曼播中寨2號(hào)22曼加干邊5號(hào)38帕冷一隊(duì)1號(hào)06帕冷一隊(duì)2號(hào)23曼加干邊2號(hào)39曼加干邊6號(hào)07么桌3號(hào)24曼傘老寨3號(hào)40曼加坡坎11號(hào)08光明水庫3號(hào)25曼加坡坎5號(hào)41科聯(lián)1號(hào)09拉沙2號(hào)26曼加坡坎1號(hào)42曼加坡坎8號(hào)10光明水庫1號(hào)27大寨1號(hào)43司土老寨2號(hào)11大寨5號(hào)28曼加干邊1號(hào)44曼加坡坎3號(hào)12司土老寨3號(hào)29曼加坡坎6號(hào)45曼加坡坎4號(hào)13彎角山30南盆老寨1號(hào)46亞諾2號(hào)14光明水庫4號(hào)31嘎灑安麻老寨1號(hào)47曼加坡坎9號(hào)15拉沙1號(hào)32亞諾1號(hào)48曼傘老寨4號(hào)16南盆老寨2號(hào)33司土老寨1號(hào)49嘎灑安麻老寨2號(hào)17洛特老寨1號(hào)

2結(jié)果與分析

2.1茶樹資源間咖啡堿含量差異

根據(jù)HPLC 分析，不同茶樹資源間咖啡堿含量變幅很大（圖2），在0.55%～4.76%，平均為3.04% ，CAF 含量最高的是曼加坡坎11號(hào)大茶樹（4.76%） ，其次是曼加干邊4號(hào)大茶樹（4.72%），CAF 含量最低的是曼加坡坎6號(hào)大茶樹，為0.55%。CAF 含量在4.00%～5.00%的資源有22份，在2.00%～4.00% 的有10 份，在1.50%～2.00%的有3份，而低CAF含量（≤1.50%）的特異資源有14份，其中CAF含量極低的（≤0.70%）有4份，即曼加坡坎3號(hào)大茶樹、光明水庫2號(hào)大茶樹、大寨5號(hào)大茶樹和曼加坡坎6號(hào)大茶樹，占總資源數(shù)的8.16%。古茶樹種質(zhì)資源間CAF含量差異較大可能由于分布在不同地區(qū)，說明茶樹資源具有豐富的生物多樣性。

2.2低咖啡堿古茶樹資源品質(zhì)分析

表2表明，4個(gè)低咖啡堿特異古茶樹資源的氨基酸含量變幅在2.16%～4.12%，平均3.39%；茶多酚含量變幅在17.26%～25.50%，平均23.24%；兒茶素含量變幅在9.50%～18.42%，平均14.90%。其中屬高茶多酚（≥25.00%）的有曼加坡3討論與結(jié)論

咖啡堿含量主要取決于茶樹本身特性，不同茶樹資源間差異很大。在該研究中，不同茶樹資源間CAF含量的變幅范圍在0.55%～4.76%，差異懸殊。根據(jù)國內(nèi)外市場需求，大茶樹CAF含量≥5.0%的被視為高咖啡堿品種資源。而≤1.50%的被視為低咖啡堿品種。本研究篩選出4份低咖啡堿古茶樹資源，僅為該研究總資源數(shù)的8.16%，CAF含量最低的是曼加坡坎6號(hào)大茶樹（0.55%）。其中曼加坡坎3號(hào)大茶樹和光明水庫2號(hào)大茶樹2份資源屬于高茶多酚（≥25.00%）資源，是研制高檔紅茶的優(yōu)良資源。這些低CAF古茶樹資源為開發(fā)特色茶葉產(chǎn)品提供了重要的品種資源。

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