董艷玲　楊立娟　吳金鵬

廊坊市第四人民醫(yī)院1耳鼻喉科，2口腔科，3腫瘤科，廊坊　065700

結(jié)腸癌患者口腔具核梭桿菌與結(jié)腸癌發(fā)生關(guān)系的研究

董艷玲1#楊立娟2吳金鵬3

廊坊市第四人民醫(yī)院1耳鼻喉科，2口腔科，3腫瘤科，廊坊065700

目的分析口腔具核梭桿菌（Fn）感染與結(jié)腸癌發(fā)生的關(guān)系。方法選取100例結(jié)腸癌患者為觀察組，100例健康體檢者為對照組，對比兩組Fn感染率及Fn DNA含量差異。同時根據(jù)腫瘤分期將觀察組患者分為A期組（39例），B期組（31例）及C期組（30例），對比3組間Fn感染率及Fn DNA含量差異。結(jié)果觀察組Fn感染率及Fn DNA含量均高于對照組（P＜0.05）；觀察組3組間，F(xiàn)n感染率分別是41.03%、70.97%和93.33%，而Fn DNA含量分別是（55.12±5.79）×108/L、（62.16±6.78）×108/L、（66.23±6.17）×108/L，3組間Fn感染率和Fn DNA含量比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中以C期組Fn感染率及Fn DNA含量最高；且經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤分期與Fn DNA含量存在相關(guān)性（r=0.756，P＜0.05）。結(jié)論Fn感染在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能具有一定作用，臨床應對Fn感染引起重視，F(xiàn)n感染可作為輔助結(jié)腸癌患者進行病理分期的一項指標。

結(jié)腸癌；具核梭桿菌；相關(guān)性

Oncol Prog，2016，14（4）

結(jié)腸癌為目前發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，其全球發(fā)病率位于惡性腫瘤排名的第4位［1］。該病以排便習慣改變?yōu)橹饕R床癥狀，不僅嚴重降低患者的生存質(zhì)量，同時也對患者的生命造成嚴重威脅［2-3］。目前臨床對于該病的研究較多，但其發(fā)病機制尚未完全明確［4-5］。具核梭桿菌（fusobacterium nucleatum，F(xiàn)n）為近年來被發(fā)現(xiàn)的微生物種類之一，主要分布于口腔。臨床研究資料顯示，F(xiàn)n與多種疾病的發(fā)生均存在密切關(guān)系［6-7］。本文以分析Fn感染與結(jié)腸癌發(fā)生的關(guān)系，從而為臨床提供更多有關(guān)結(jié)腸癌發(fā)生機制方面的理論依據(jù)。結(jié)果報道如下。

1　對象與方法

1.1研究對象

選取2014年1月至2015年3月于廊坊市第四人民醫(yī)院確診為結(jié)腸癌的患者100例作為觀察組。入選標準：①均經(jīng)病理學檢查明確診斷為結(jié)腸癌［8］；②所有患者均簽署知情同意書。排除標準：①存在口腔疾病者；②存在其他部位原發(fā)或繼發(fā)性腫瘤者；③預計生存期＜3個月；④存在意識障礙者；⑤接受過口腔矯正治療者；⑥3個月內(nèi)應用抗生素治療者。選取同時期健康體檢合格的志愿者100名作為對照組。觀察組患者中男性66例，女性34例，年齡為（63.25±6.18）歲；對照組中男性61名，女性39名，平均年齡為（63.17±6.33）歲，兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

根據(jù)Dukes腫瘤分期法，將觀察組患者又分為A期組（39例），B期組（31例）及C期組（30例）。Dukes分期（1935年）：A期，癌腫浸潤深度限于直腸壁內(nèi)，未穿出深肌層，且無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；B期，癌腫侵犯漿膜層，亦可侵入漿膜外或腸外周圍組織，但尚能整塊切除，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；C期，癌腫侵犯腸壁全層或未侵犯全層，但伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。觀察組中3組患者間的臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。（表1）

表1　觀察組3組患者的基本特征

1.2觀察方法

所有入選者均于入組后立即接受口腔Fn檢查及Fn DNA含量測定，統(tǒng)計并對比對照組與觀察組間Fn感染率及Fn DNA含量差異。同時對觀察組不同分期組間Fn檢查及Fn DNA含量情況進行分析，對比3組間Fn感染率及Fn DNA含量差異。并分析Fn感染率及Fn DNA含量與結(jié)腸癌腫瘤分期的關(guān)系。

1.3檢驗方法

標本采集應用無菌紙尖法進行?；颊呦扔脺厮?，刮除局部菌斑，以棉球進行局部隔濕。隨后將無菌紙尖插入牙齦溝，保持30 s后取出，進而完成標本采集。所有標本均進行24 h培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后再進行Fn檢查及Fn DNA含量測定。Fn檢查為取100 μl培養(yǎng)后的標本進行稀釋，并將稀釋后的標本接種至培養(yǎng)基，再次培養(yǎng)72 h，完成培養(yǎng)后，對培養(yǎng)基內(nèi)Fn感染情況進行統(tǒng)計。

Fn DNA含量測定為各抽取100 μl接受24 h培養(yǎng)的標本及標準菌株液，提取Fn DNA進行PCR擴增。擴增方法為：首先于94℃下對Fn DNA進行5 min預變性，隨后保持94℃進行變性30 s，完成Fn DNA的預變性及變性后，于58℃下進行復性退火，復性退火時間為30 s，并于72℃下進行1 min延伸，重復30個循環(huán)以進行擴增。隨后再次完成變性、復性退火、延伸30個循環(huán)，并在完成后進行10 min延伸，完成擴增后，應用ABI 7300實時熒光定量PCR檢測儀（ABI 7300 Real Time PCR System）進行Fn DNA含量測定。DNA提取試劑盒購自美國Vivantis公司，PCR檢測試劑盒購自德國Antibodies-Online公司，引物的設(shè)計參照文獻［9］方法。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，并以t檢驗及F檢驗進行分析；計數(shù)資料以百分率（%）表示，以χ2檢驗或秩和檢驗進行分析；采用Spearman相關(guān)性分析法分析Fn DNA含量和Dukes腫瘤分期的關(guān)系。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1兩組間Fn感染率和Fn DNA含量比較

2.2觀察組3組間Fn感染率和Fn DNA含量比較

觀察組3組間Fn感染率存在差異（χ2=21.169，P＜0.05），觀察組3組間Fn DNA含量也存在差異（F=28.367，P＜0.05），其中以C期組Fn感染率及Fn DNA含量最高，與其他兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。B期組的Fn感染率及Fn DNA含量高于A期組，兩組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示Fn DNA含量和Dukes腫瘤分期呈正相關(guān)（r=0.756，P＜0.05）。詳見表2。

對照組Fn感染率為33.00%，觀察組Fn感染率為66.00%，觀察組高于對照組（χ2=21.782，P＜0.01）。觀察組Fn DNA含量為（60.63±6.88）×108/L，高于對照組的（35.34±6.16）×108/L，差異有統(tǒng)計學意義（t= 27.385，P＜0.05）。

表2　觀察組3組間Fn感染率和Fn DNA含量

3　討論

Fn屬于革蘭陰性厭氧菌，不僅可導致牙周炎及牙齦炎等多種口腔疾病發(fā)生，同時也可導致腦、肺、肝及血液等其他組織器官疾病發(fā)生，嚴重威脅人類身體健康及生命安全［9-11］。因此本研究將其作為觀察指標，以分析其對結(jié)腸癌發(fā)生的影響。

本研究首先對比了健康人群與結(jié)腸癌患者Fn感染情況，結(jié)果顯示：觀察組Fn感染率及Fn DNA含量均高于對照組（P＜0.05）?？梢娫诮Y(jié)腸癌患者口腔中Fn感染率及感染程度均高于健康人群。而McCoy等［12］的研究結(jié)果顯示，F(xiàn)n豐度與結(jié)腸癌的發(fā)生成明顯正相關(guān)，高豐度Fn人群患腺瘤的風險增加了3.5倍，本研究所得結(jié)果與其結(jié)論一致。同時，Castellarin等［13］的臨床研究結(jié)果顯示，某些梭菌在結(jié)腸腫瘤組織中顯著升高。而Kostic等［14］針對Fn與結(jié)腸腫瘤相關(guān)性的進一步分析結(jié)果顯示，F(xiàn)n及其相近的菌屬均與結(jié)腸腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系。因此Fn感染可作為結(jié)腸癌病發(fā)的重要危險因素。另外，本研究進一步對結(jié)腸癌不同腫瘤分期的3組間Fn感染情況進行分析，結(jié)果顯示3組間Fn感染率及Fn DNA含量均存在差異，以C期組Fn感染率及Fn DNA含量最高（P＜0.05），且腫瘤分期與Fn DNA含量存在相關(guān)性（P＜0.05）。如上結(jié)果提示，臨床可將Fn感染作為預測結(jié)腸癌患者病理分期的重要指標。

綜上所述，較正常健康人比較，結(jié)腸癌患者具有較高的Fn感染率，且腫瘤分期越高，患者的感染率亦呈增高趨勢，F(xiàn)n DNA含量也伴隨腫瘤分期的增加而增加，因此可以推斷Fn感染在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展中具有一定作用，臨床應加強對Fn感染的重視，同時也可將Fn感染作為預測結(jié)腸癌患者病理分期的重要指標之一。雖然本研究證實了Fn感染與結(jié)腸癌存在一定的相關(guān)性，但是并未對Fn感染后，結(jié)腸癌患者體內(nèi)多種細胞因子的變化情況進行分析，故未能對其病理機制提供參考，因此還需對Fn的感染與腫瘤發(fā)生的關(guān)系進行更深入地研究，從而為臨床結(jié)腸癌的發(fā)生以及其病理機制提供更多的理論依據(jù)。

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Correlation between oral infection of fusobacterium nucleatum and the occurrence of colon cancer in colon cancer patients

DONG Yan-ling1#YANG Li-juan2WU Jin-peng3
1Department of ENT，2Department of Dentistry，3Department of Oncology，Langfang Fourth People's Hospital，Langfang 065700，China

ObjectiveTo analyze the relationship between oral infection of nuclear spindle coli（fusobacterium nucleatum，F(xiàn)n）and the occurrence of colon cancer.Method100 cases of normal healthy adults and 100 cases of colon cancer patients were enrolled in this study as control group and study group，respectively，the Fn infection rate and Fn DNA level of the two groups were detected and compared.Besides，the study group was stratified as group A（n=39），group B（n=31）and group C（n=30）according to the respective tumor stage；Furthermore，the infection rate and Fn DNA level of the three subgroups were compared.ResultThe Fn infection rate and Fn DNA level of study group were both significantly higher than that of the control group（P＜0.05）；The Fn infection rates in the three subgroups were 41.03%，70.97% and 93.33%，respectively，while the Fn DNAlevels were（55.12±5.79）×108/L，（62.16±6.78）×108/Land（66.23±6.17）×108/L，respectively，the FN infection rate and Fn DNA level were of statistically significant difference（P＜0.05），with the group C had the highest infection rate and Fn DNA level；Through analysis，a significant correlation between tumor staging and Fn DNA level was revealed（r=0.756，P＜0.05）.ConclusionFn infection may play an important role in the development of colon cancer，which should be noted in clinical practice，besides，F(xiàn)n infection may be included as an index for the pathological staging in patients with colon cancer.

colon cancer；fusobacterium nucleatum；correlation

R735.3+5

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.28

2015-08-22）

（corresponding author），郵箱：hebeidong123@163.com