蘇　婭　吳　懇　張　勇　孫　悅　夏儒鴻　張耀忠　邱逸敏

(海南醫(yī)學院，海南　海口　571100)

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CETP I405V多態(tài)性與海南漢族高血壓的相關(guān)性

蘇婭1吳懇1張勇1孫悅夏儒鴻張耀忠2邱逸敏

(海南醫(yī)學院，海南海口571100)

目的探討膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)I405V多態(tài)性位點遺傳多態(tài)性與海南漢族人群高血壓的相關(guān)性。方法對218例海南漢族高血壓患者(高血壓組)及301例健康對照(對照組)的基因組DNA進行遺傳多態(tài)性檢測，利用SPASS19.0軟件分析I405V基因型分布頻率及等位基因I和V的組間差異。結(jié)果I405V多態(tài)性位點II、IV及VV三種基因型的檢出率分別為17例(7.8%)，197例(90.4%)，4例(1.8%)，基因型分布頻率與對照組相比存在顯著差異(P<0.01)，三種基因型分布頻率組間比較亦具有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。等位基因I和V在高血壓組的分布頻率為52.9%和47.1%，與對照組相比存在顯著差異(P<0.01)。結(jié)論I405V多態(tài)性與海南漢族原發(fā)性高血壓密切相關(guān)，基因型Ⅳ可能是危險因素。

膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白；原發(fā)性高血壓；I405V；單核苷酸多態(tài)性

高血壓是遺傳因素與飲食、精神壓力等環(huán)境因素交互作用的結(jié)果，而遺傳因素的作用可以占到50%〔1〕。探尋高血壓易感基因,有助于從遺傳本質(zhì)入手對其治療、預(yù)后、預(yù)防及新藥物的研制找到依據(jù)。許多科研工作者針對高血壓相關(guān)的基因進行了諸多研究，例如血管緊張素酶ACE、膽固醇酯逆向轉(zhuǎn)運相關(guān)基因〔2～4〕。膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白(CETP)是血漿高密度脂蛋白的重要成分，在脂類代謝尤其是膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運中起著關(guān)鍵作用。該蛋白的編碼基因定位于16號染色體，全長25 kb，存在超過2 000個單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點，其中I405V、TaqIB等多態(tài)性位點與腦卒中、動脈粥樣硬化、冠心病及長壽的關(guān)聯(lián)性研究已有諸多報道〔5～7〕。目前尚未見I405V與海南漢族高血壓的關(guān)聯(lián)研究。本文擬探討I405V與海南漢族高血壓的關(guān)聯(lián)性。

1　對象與方法

1.1對象高血壓組：2013年1月至2014年12月海南省干部療養(yǎng)院住院治療的高血壓患者218例，年齡55～70歲，診斷標準：在患者未服用抗高血壓藥物的情況下，3次不同日期的測量平均值收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥90 mmHg；或者患者服用抗高血壓藥物，雖然血壓不在上述范圍內(nèi)，均診斷為高血壓患者。對照組：從海南省干部療養(yǎng)院體檢科采集無血緣關(guān)系的海南漢族健康個體301例，年齡55～65歲，納入標準：肝腎功能正常，排除心血管疾病、糖尿病及血液病病史。

1.2研究方法采取SDS裂解法提取血液基因組DNA，從GenBank中獲得人類CETP基因的DNA全序列，用Oligo7.0軟件輔助設(shè)計引物，并委托上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。每個多態(tài)位點均設(shè)立2個PCR檢測管，分別加入寡核苷酸正常和突變引物用于檢測每個多態(tài)位點正常和突變的等位基因。PCR循環(huán)參數(shù)：首先在94°C進行2 min的熱變性，隨后進行34個循環(huán)反應(yīng)(每個循環(huán)包括94℃30 s，58℃25 s，72℃30 s),最后是72℃ 10 min。擴增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠中電泳，經(jīng)核酸染色劑染色，在UVIband凝膠成像系統(tǒng)(英國UVItec公司產(chǎn)品)中觀察結(jié)果并照相，根據(jù)凝膠結(jié)果判斷基因型。利用測序法判定結(jié)構(gòu)是否準確。

1.3統(tǒng)計學分析采用SPSS19.0軟件行χ2檢驗。

2　結(jié)　果

測序結(jié)果與利用瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果判定的基因型結(jié)果一致，說明我們設(shè)定的實驗體系可靠。如表1所示，高血壓組I405V多態(tài)性位點II、IV及VV三種基因型的檢出例率分別為17例(7.8%)、197例(90.4%)、4例(1.8%)，在對照組中的檢出頻率分別為48例(15.9%)、146例(48.5%)及107例(35.5%)，統(tǒng)計學分析結(jié)果顯示，基因型分布頻率存在組間差異(P<0.01)。三種基因型分布頻率兩兩比較組間差異亦具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。等位基因I和V在高血壓組的分布頻率為52.9%和47.1%，對照組中為40.1%和59.9%，組間存在顯著差異(P<0.01)。

表1　海南高血壓人群與健康對照的I405V基因型及等位基因分布頻率(n)

3　討　論

CETP是體內(nèi)膽固醇由組織及血液中轉(zhuǎn)運回肝臟的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)及功能的改變與膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運密切相關(guān)，該蛋白功能的下降是動脈粥樣硬化形成的重要影響因素，該基因的SNP位點可影響蛋白質(zhì)的表達及結(jié)構(gòu)。I405V是該蛋白質(zhì)第405位氨基酸的密碼子的第一位堿基存在A和G兩種形式，導致該氨基酸可能存在異亮氨酸或者纈氨酸兩種形式。我們在過去的研究中已經(jīng)證明該位點與動脈粥樣硬化及冠心病的發(fā)生密切相關(guān)〔5〕，而且與海南人群的長壽也關(guān)系密切〔8〕，等位基因I可能對動脈粥樣硬化具有抵抗作用，而對壽命的延長可能具有促進作用。

本次研究表明，CETP基因I405V的SNP與高血壓具有密切關(guān)聯(lián)。然而，我們發(fā)現(xiàn)V基因在高血壓組的出現(xiàn)頻率遠低于對照組，這與我們之前對冠狀動脈粥樣硬化人群及長壽人群的研究結(jié)果是相悖的。根據(jù)我們之前研究的結(jié)果，認為等位基因I的存在可能增加膽固醇逆向轉(zhuǎn)運的效率，進而起到降低血脂的作用。而高血壓的發(fā)生往往伴隨著高血脂的出現(xiàn)，或者說高血脂亦可導致高血壓，由此推斷等位基因I可能對高血壓的發(fā)生具有抵抗作用。遺憾的是，目前較少有關(guān)于CETP I405V位點與高血壓的關(guān)聯(lián)研究，使得我們沒有參考數(shù)據(jù)。對于該矛盾的進一步的確認依賴于建立在更大樣本量及更加深入的研究。

1Oguri M，Kato K，Yokoi K，etal.Assessment of a polymorphism of SDK1 with hypertension in Japanese individuals〔J〕.Am J Hypertens，2010;23(1)：70-7.

2李雪峰,蘇秀蘭.原發(fā)性高血壓易感基因多態(tài)性研究進展〔J〕.疾病監(jiān)測與控制雜志,2013;7(11);669-71.

3陶曉明，李國江，侯淑琴，等.膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白基因TaqⅠB多態(tài)性與蒙古族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性〔J〕.基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床,2010;30(7)：677-82.

4張清，鄧兵，李培龍，等.高血壓患者圍術(shù)期胰島素抵抗與膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白TaqIB多態(tài)性〔J〕.臨床麻醉學雜志,2007;23(12)：973-6.

5丘洪，張清，鄧兵，等.膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白TaqIB基因多態(tài)性與高血壓病患者心腦血管病事件發(fā)生率的影響〔J〕.中國臨床醫(yī)學雜志,2009;16(3)：341-3.

6周代鋒，張勇，蔡苗，等.CETP基因I405V突變位點多態(tài)性與冠心病關(guān)系的再探討〔J〕.海南醫(yī)學院學報,2011;17(10)：1297-9.

7張云霞，周代鋒，王穎，等.CETP基因1405V多態(tài)性與海南百歲人群長壽的相關(guān)性〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(16):1-3.

8張云霞，周代鋒，焦解歌，等.海南省百歲人群中CETP基因多態(tài)性研究〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學,2011;38(16)：3273-4，3277.

〔2015-11-19修回〕

(編輯徐杰)

海南省自然科學基金(814364)；海南醫(yī)學院大學生創(chuàng)新實驗項目(HYCX2014040)

邱逸敏(1986-)，女，碩士，講師，主要從事生物化學與分子生物學研究。

張耀忠(1968-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事麻醉對血壓影響的相關(guān)研究。

蘇婭(1976-)，女，副主任護師，主要從事臨床護理研究。

R54

A

1005-9202(2016)18-4458-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.18.024

1海南省干部療養(yǎng)院2吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院