尚曉東劉曉華宋明艷孫 贊

（1 遼寧省遼陽(yáng)市康復(fù)醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 遼陽(yáng) 111000；2 遼寧省遼陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 遼陽(yáng) 111000；3 遼寧省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

兒童肺炎支原體的3種檢測(cè)方法對(duì)比分析與臨床檢驗(yàn)學(xué)研究

尚曉東1劉曉華2宋明艷2孫 贊3

（1 遼寧省遼陽(yáng)市康復(fù)醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 遼陽(yáng) 111000；2 遼寧省遼陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 遼陽(yáng) 111000；3 遼寧省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 沈陽(yáng) 110016）

目的 研究分析兒童肺炎支原體的3種檢測(cè)方法對(duì)比分析與臨床意義。方法 將360例肺炎支原體患兒的咽拭子和血清標(biāo)本，分別采用熒光定量PCR法、快速培養(yǎng)法和血清抗體法進(jìn)行檢驗(yàn)，比較3種方法的陽(yáng)性檢出率，進(jìn)行回顧性對(duì)比分析。結(jié)果 熒光定量PCR法檢出94例陽(yáng)性患兒，陽(yáng)性率為26.11%，快速培養(yǎng)法檢出98例陽(yáng)性患兒，陽(yáng)性率為27.22%，血清抗體法檢出60例陽(yáng)性患兒，陽(yáng)性率為16.67%。熒光定量PCR法和快速培養(yǎng)法的陽(yáng)性率顯著高于血清抗體法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；熒光定量PCR法和快速培養(yǎng)法的陽(yáng)性率比較不具有較大差異（P＞0.05）。結(jié)論 熒光定量PCR法和快速培養(yǎng)法均能夠有效的檢出肺炎支原體，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

熒光定量PCR法；快速培養(yǎng)法；血清抗體法；肺炎支原體；兒童；對(duì)比分析

肺炎支原體是臨床上患者支原體肺炎的病原體，它是能夠引起患者呼吸道感染的通過(guò)唾沫飛濺從而進(jìn)行傳播的介于細(xì)菌和病毒之間的一類微生物。支原體肺炎的主要發(fā)病人群是青少年，發(fā)病季節(jié)以秋冬多見(jiàn)［1-2］?；颊叩呐R床癥狀大部分表現(xiàn)為陣發(fā)性的刺激性的咳嗽、頭痛、發(fā)熱、咽喉痛等。肺炎支原體不僅能夠引起一般的肺炎，還能夠引發(fā)較嚴(yán)重的雙側(cè)肺炎以及其他的并發(fā)癥，嚴(yán)重危害著患者的身體健康［3-4］。目前臨床上對(duì)于肺炎支原體的檢測(cè)主要有熒光定量PCR法、快速培養(yǎng)法和血清抗體法等方法，它們的特異性和敏感性都有差異。本院就探討分析3種方法檢測(cè)兒童肺炎支原體的臨床應(yīng)用與科研課題展開(kāi)研究，取得了令人滿意的成果，報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：隨機(jī)抽取在2013年1月至2015年10月來(lái)本院治療肺炎支原體的360例患者，男202例，女158例，年齡為4個(gè)月～13歲，平均年齡為4.3歲。這些患兒的臨床癥狀表現(xiàn)為：發(fā)熱、頭痛、咽喉發(fā)炎疼痛、氣喘。患兒在進(jìn)入醫(yī)院后用一次性的咽拭子取兩份標(biāo)本，并且抽取3 mL的靜脈血。

1.2儀器和試劑：①熒光定量PCR：中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的肺炎支原體核酸定量檢測(cè)試劑盒，PCR擴(kuò)增儀：LightCyler基因擴(kuò)增儀（羅氏公司生產(chǎn)）。②快速培養(yǎng)法：培養(yǎng)基取自武漢菁華時(shí)間科技有限公司生產(chǎn)的肺炎支原體快檢試劑盒。③血清抗體法：濰坊市康華生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的肺炎支原體IgM抗體檢測(cè)試劑盒。

1.3方法：①熒光定量PCR：選取一份咽拭子標(biāo)本根據(jù)儀器上的說(shuō)明進(jìn)行操作。②快速培養(yǎng)法：選取一份咽拭子標(biāo)本，將它接種到液體培養(yǎng)基中，然后將咽拭子放到瓶子中，瓶子外的東西舍去，在37 ℃下培養(yǎng)大約6 h。③血清抗體法：將抽取的患者的3 mL血液在3000 r/min下離心10 min，分離出血清，根據(jù)說(shuō)明書的指示進(jìn)行MP-IgM的檢測(cè)。

1.4檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)：①熒光定量PCR：咽拭子標(biāo)本的MP-DNA含量≥5.0× 106基因拷貝，那標(biāo)本即為陽(yáng)性結(jié)果。②快速培養(yǎng)法：如果經(jīng)過(guò)接種后獲得的液體由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌吻宓狞S色，結(jié)果即為陽(yáng)性。③血清抗體法：在操作3 min后，陽(yáng)性結(jié)果即為出現(xiàn)2個(gè)斑點(diǎn)，1個(gè)即為陰性結(jié)果，但是若沒(méi)有斑點(diǎn)出現(xiàn)，則需要重新檢測(cè)，操作可能存在失誤或者是不規(guī)范的地方。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：研究中的基本的數(shù)據(jù)都采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)量的資料運(yùn)用（）表示；利用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以χ2進(jìn)行檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

熒光定量PCR法共檢出94例陽(yáng)性患兒，陽(yáng)性率為26.11%，快速培養(yǎng)法共檢出98例陽(yáng)性患兒，陽(yáng)性率為27.22%，血清抗體法共檢出60例陽(yáng)性患兒，陽(yáng)性率為16.67%。熒光定量PCR法和快速培養(yǎng)法的陽(yáng)性率顯著高于血清抗體法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；熒光定量PCR法和快速培養(yǎng)法的陽(yáng)性率比較不具有較大差異（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1　3種方法檢測(cè)肺炎支原體的陽(yáng)性檢出率情況比較［n（%）］

3　討 論

肺炎支原體肺炎的大部分發(fā)病人群是兒童，他們的身體免疫機(jī)制還沒(méi)有發(fā)育成熟，抵抗外界病毒和細(xì)菌的能力比較弱，所以在感染了肺炎支原體后，病情一般不容易控制，反復(fù)發(fā)作，給治療帶來(lái)困難［5-6］。所以及早的檢測(cè)出肺炎支原體是早期預(yù)防和治療的關(guān)鍵，目前臨床上主要的檢測(cè)方案都存在著敏感度低，耗時(shí)比較長(zhǎng)的缺點(diǎn)，限制了臨床應(yīng)用。

本院就對(duì)熒光定量PCR法、快速培養(yǎng)法以及血清抗體法這3種方法對(duì)肺炎支原體的陽(yáng)性檢出率進(jìn)行比較分析，結(jié)果顯示熒光定量PCR法、快速培養(yǎng)法以及血清抗體法的陽(yáng)性率分別為26.11%、27.22%、16.67%。從結(jié)果中我們可以發(fā)現(xiàn)熒光定量PCR法和快速培養(yǎng)法的陽(yáng)性率顯著高于血清抗體法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；熒光定量PCR法和快速培養(yǎng)法的陽(yáng)性率相近。所以在臨床上運(yùn)用熒光定量PCR法和快速培養(yǎng)法是比較有效的，而且快速培養(yǎng)法的成本比較低。對(duì)于血清抗體法檢測(cè)值最低的原因可能與患兒的病程有關(guān)，當(dāng)肺炎支原體感染了1周后IgM值顯著升高，4周時(shí)達(dá)到最大值，之后就緩慢的下降，如果患兒是在4周以后入院治療的，則會(huì)導(dǎo)致血清抗體法檢測(cè)率較低［7-8］。但是總體來(lái)看，3種方法對(duì)肺炎支原體的檢測(cè)陽(yáng)性率都不是很高，這可能與它們對(duì)病毒的敏感性不高有關(guān)［9-10］。

綜上所述，在對(duì)患兒進(jìn)行肺炎支原體檢測(cè)的時(shí)候，醫(yī)院要根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，PCR法對(duì)儀器和操作的要求比較高，容易造成失誤，從而影響檢測(cè)結(jié)果，而快速培養(yǎng)法是一種價(jià)格低廉，操作方便的方法，是比較適用在醫(yī)院進(jìn)行實(shí)際操作的，能夠滿足臨床要求，而且檢測(cè)陽(yáng)性率在同類比較下是較高的，值得推廣使用。

［1］龍洋，邊彤，師帥.兒童肺炎支原體的三種檢測(cè)方法比較分析與臨床檢驗(yàn)學(xué)研究［J］.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2015，38（2）：99-100.

［2］王楠，張國(guó)成，劉芳，等.快速培養(yǎng)結(jié)合顯微鏡排除法檢測(cè)肺炎支原體的研究［J］.臨床兒科雜志，2015，33（8）：760-767.

［3］湯瑩成，汪娘子，洋雙媛.兒童肺炎支原體的檢測(cè)方法對(duì)比分析與檢驗(yàn)學(xué)研究［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015，25（8）：16-18.

［4］林艷.3012例兒童肺炎支原體檢測(cè)結(jié)果分析［J］.中國(guó)婦幼保健，2015，30（2）：220-221.

［5］陳宜.肺炎支原體的檢測(cè)方法的比較分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2015，12（16）：2002-2003.

［6］周新.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)指南［M］.武漢：湖北科學(xué)技術(shù)出版社，2008：403-409.

［7］廖春盛，戴曉波，劉建軍，等.呼吸道感染患者肺炎支原體檢測(cè)的臨床意義［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36（13）：1474-1477.

［8］白繼文，王長(zhǎng)印.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)問(wèn)答［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：505-508.

［9］徐衛(wèi)東.兒童肺炎支原體檢測(cè)方法比較與分析［J］.現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2015，27（10）：1112-1114.

［10］葉應(yīng)撫，王毓三.全國(guó)臨床檢驗(yàn)規(guī)程［M］.南京：東南大學(xué)出版社，2008：191-199.

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1671-8194（2016）26-0126-02