王曉芬，鄢愛平，譚 婷，毛雪金，劉俊俊，郭 嵐，萬(wàn)益群,,

（1.南昌大學(xué)化學(xué)學(xué)院，江西 南昌 330031；2.南昌大學(xué)分析測(cè)試中心，江西 南昌 330047；3.南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

多效唑人工抗原的合成與鑒定

王曉芬1，鄢愛平2，譚 婷2，毛雪金3，劉俊俊1，郭 嵐2，萬(wàn)益群1,2,*

（1.南昌大學(xué)化學(xué)學(xué)院，江西 南昌 330031；2.南昌大學(xué)分析測(cè)試中心，江西 南昌 330047；3.南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

為合成新的、有效的多效唑人工抗原，采用琥珀酸酐法對(duì)多效唑小分子進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，以獲得含羧基的多效唑半抗原。將純化后的半抗原分別與牛血清白蛋白和卵清蛋白經(jīng)N-羥基琥珀酰亞胺活潑酯法偶聯(lián)制備免疫原和包被原。采用質(zhì)譜、紅外光譜、核磁共振氫譜對(duì)多效唑半抗原的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定；采用紫外光譜及高性能基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)偶聯(lián)物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示成功合成出多效唑人工抗原，為其抗體的制備和免疫學(xué)方法的構(gòu)建奠定了前期研究基礎(chǔ)。

多效唑；半抗原；人工抗原；制備

多效唑（paclobutrazol，PAC）作為一種抑制類的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有延緩植物生長(zhǎng)、抑制莖桿伸長(zhǎng)、縮短節(jié)間、促進(jìn)花芽分化、增加植物抗逆性能、提高作物產(chǎn)量等功能，廣泛應(yīng)用于水稻、麥類、花生、果樹、煙草、油菜、大豆等農(nóng)作物生產(chǎn)。多效唑在土壤中易被吸附且降解慢，殘留時(shí)間長(zhǎng)[1-2]，如使用不當(dāng)，亂用或?yàn)E用，則有可能通過(guò)食物鏈傳遞，對(duì)人體健康造成潛在風(fēng)險(xiǎn)。為此，許多歐盟國(guó)家已經(jīng)禁用[3]，日本、新西蘭、韓國(guó)和澳大利亞等國(guó)均規(guī)定多效唑的最高殘留限量為0.5 mg/kg[4]。我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2763ü2015《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[5]對(duì)多效唑殘留量的規(guī)定如下：谷物中稻谷、小麥≤0.5 mg/kg，油菜籽≤0.2 mg/kg，水果中蘋果和荔枝≤0.5 mg/kg。因此，開展食品中多效唑殘留快速檢測(cè)新技術(shù)研究對(duì)食品安全生產(chǎn)、現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)督都有著十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。

多效唑殘留檢測(cè)目前主要采用氣相色譜（gas chromatography，GC）、液相色譜（liquid chromatography，LC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）等技術(shù)[6-9]，這些方法的準(zhǔn)確度和精密度較高，但存在檢測(cè)成本高、周期長(zhǎng)及操作繁瑣等缺陷，不適于大規(guī)?，F(xiàn)場(chǎng)篩查。與色譜等分析技術(shù)相比，免疫分析法具有樣品前處理簡(jiǎn)單、樣品用量少、檢測(cè)成本低、選擇性高及分析速度快等特點(diǎn)[10]，其原理是基于抗原與抗體特異性結(jié)合。該法已廣泛應(yīng)用于食品中真菌毒素、藥物用品、農(nóng)藥、獸藥殘留[11-15]等危害物的檢測(cè)，但應(yīng)用于食品中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的分析研究報(bào)道相對(duì)較少。

制備小分子化合物的人工抗原，需要與載體進(jìn)行交聯(lián)，但小分子化合物必須具有或衍生出能與載體進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)的功能基團(tuán)（如氨基、羧基、重氮鹽等），才能與載體交聯(lián)[16]。多效唑是小分子物質(zhì)，具有反應(yīng)原性，但不具備免疫原性，因而必須與載體大分子蛋白偶聯(lián)成為全抗原才可用于制備抗體。Cao Zhen等[17]以威廉姆森經(jīng)典反應(yīng)，合成多效唑半抗原，并取得了較好的成果。本實(shí)驗(yàn)采用微波無(wú)溶劑法將多效唑與琥珀酸酐反應(yīng)衍生成為帶羧基（—COOH）的半琥珀酸酐酯，拓寬了可選用的抗原合成方法。同時(shí)，該方法制備多效唑半抗原簡(jiǎn)單、有效和安全，且可較好地與載體蛋白交聯(lián)制備多效唑的人工抗原，為多效唑抗體的進(jìn)一步制備提供了前期研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑

多效唑（純度≥99.5%）、琥珀酸酐、4-二甲氨基吡啶（4-dimethylaminopyridine，DMAP）、無(wú)水吡啶 上海百靈威公司；N-羥基琥珀酰亞胺（N-hydroxy succinimide，NHS）、1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride，EDAC）、N,N-二甲基甲酰胺（N,N-dimethylformamide，DMF） 生工生物工程（上海）股份有限公司；牛血清白蛋白（bovine albumin，BSA）、卵清蛋白（ovalbumin，OVA）美國(guó)Sigma公司；1hPBS透析液（0.01 mol/L，pH 7.4）：NaCl 8 g、KCl 0.2 g、KH2PO40.2 g、Na2HPO4g12H2O 29 g，蒸餾水定容至1 000 mL。

1.2 儀器與設(shè)備

AV 600核磁共振波譜儀 瑞士布魯克公司；6430三重串聯(lián)四極桿液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀、1260高效液相色譜 美國(guó)Agilent公司；TGL-16G高速臺(tái)式離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器公司；5800基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀 美國(guó)AB SCIEX公司；5700 智能型傅里葉變換紅外光譜儀 美國(guó)Nicolet公司；SM2渦旋混合器德國(guó)IKA公司；2501PC紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津公司；Milli-Q超純水儀 美國(guó)Millipore公司。

1.3 方法

1.3.1 多效唑半抗原的制備

選用微波[18-21]無(wú)溶劑法合成多效唑半琥珀酸酯（paclobutrazol-hemisuccinate，PAC-HS）。用無(wú)水吡啶做溶劑，按照多效唑、琥珀酸酐、DMAP物質(zhì)的量比1∶20∶1的比例混合均勻，氮?dú)獯蹈扇軇⒒旌衔镏糜谖⒉t中（P=406 W）間歇反應(yīng)2.5 h。反應(yīng)結(jié)束后加入2 mL氯仿溶解，取出混合物離心去沉淀，取上清液再加入2 mL二次水，渦旋振蕩2 min，以除去副產(chǎn)物丁二酸。取有機(jī)相，氮?dú)獯蹈?，得到多效唑半抗原。其合成路線見圖1。

圖1 琥珀酸酐法合成路線Fig.1 Synthetic route of PAC-HS by succinic anhydride method

1.3.2 多效唑半抗原的純化及鑒定

采用Agilent 1260液相色譜儀對(duì)上述所合成的多效唑半抗原進(jìn)行純化，收集10～11 min流出液，氮?dú)獯蹈?，得到純化后的多效唑半抗原。其色譜分離條件如下：色譜柱：ZORBAX RX-C18（250 mmh9.4 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇+0.1%甲酸水溶液（65∶35，V/V）；柱溫：30 ℃；流速：3.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：222 nm；進(jìn)樣量：100 μL。

1.3.3 多效唑半抗原的結(jié)構(gòu)鑒定

采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)純化后的多效唑半抗原進(jìn)行分析，正離子模式下做一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜鑒定，并結(jié)合核磁共振氫譜和紅外光譜鑒定，對(duì)多效唑半抗原進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。

1.3.4 NHS活潑酯法[22]制備人工抗原

1.3.4.1 NHS活潑酯法制備免疫抗原

準(zhǔn)確稱取2 mg PAC-HS溶于200 μL DMF中，加入NHS 4 mg（另溶于200 μL DMF），再加入7.5 mg稱量好的EDC，室溫下振蕩反應(yīng)16 h（溶液1）；稱取8.7 mg BSA（PAC-HS與BSA的物質(zhì)的量比為39∶1）溶于1.6 mL 1hPBS中（溶液 2）。再將溶液 1 逐滴加入溶液2 中，邊加邊振蕩，冰浴振蕩反應(yīng)6 h。反應(yīng)混合物移入處理好的透析袋中，用1hPBS透析3 d，每天換兩次透析液，即得到多效唑免疫抗原（PAC-HS-BSA），合成路線見圖2。

圖2 活潑酯法免疫抗原合成路線Fig.2 Synthetic route of immunogen active ester method

1.3.4.2 NHS活潑酯法制備檢測(cè)抗原

稱取1.2 mg PAC-HS溶于200 μL DMF中，加入NHS 2 mg（溶于200 μL DMF），再直接加入3.6 mg EDC，室溫振蕩反應(yīng)16 h（溶液3）；稱取5 mg OVA（n（PAC-HS）∶n（OVA）=26∶1）溶于1.6 mL 1hPBS 中（溶液4）。溶液3與溶液4混勻后，冰浴振蕩反應(yīng)6 h。同上透析即得到多效唑檢測(cè)抗原（PAC-HS-OVA），合成路線同圖2。

采用紫外光譜及高性能基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrix-assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF/MS）法對(duì)多效唑人工抗原進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，其中MALDI-TOF/MS檢測(cè)方法如下：將蛋白及蛋白偶聯(lián)物用 MALDI-TOF/MS 進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)分子質(zhì)量數(shù)據(jù)的改變可說(shuō)明半抗原與蛋白偶聯(lián)成功與否，并可計(jì)算出蛋白與半抗原的偶聯(lián)比[19-20]。

基質(zhì)輔助溶液的配制：將34 μL 0.15% TFA與17 μL的乙腈混合，再加入適量的芥子酸使溶液達(dá)到過(guò)飽和狀態(tài)，超聲15 min，1 000 r/min離心3 min，備用[23]。

將載體蛋白BSA、OVA以及偶聯(lián)物PAC-HS-BSA、PAC-HS-OVA脫鹽后分別與基質(zhì)輔助溶液混合，點(diǎn)到樣品靶上，放入質(zhì)譜儀內(nèi)進(jìn)行激光掃描。多效唑與載體蛋白的結(jié)合比按以下公式[24]計(jì)算。

式中：MA、MB和MC分別表示半抗原、蛋白、偶聯(lián)物的相對(duì)分子質(zhì)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 多效唑半抗原的純化

圖3 未純化的半抗原的質(zhì)譜圖Fig.3 Mass spectrum of non-purified hapten

采用微波無(wú)溶劑法合成得到的多效唑半抗原，正離子模式下一級(jí)質(zhì)譜圖如圖3所示，m/z 394.1離子為目標(biāo)物PAC-HS峰，但仍含有較多的雜質(zhì)信號(hào)，如過(guò)剩的原料多效唑（m/z 294.1），多效唑中的雜質(zhì)（m/z 316.1）和副產(chǎn)物產(chǎn)生等。為了避免雜質(zhì)與載體蛋白偶聯(lián)而干擾免疫效果，需進(jìn)一步提純。

治療4周后，2組患者的FMA-UE、MBI和肩關(guān)節(jié)各方向主動(dòng)關(guān)節(jié)活動(dòng)度均有明顯提高(均P<0.05)，觀察組的FMA-UE和肩關(guān)節(jié)前屈、水平內(nèi)收、水平外展主動(dòng)關(guān)節(jié)活動(dòng)度提高程度更高于對(duì)照組(均P<0.05)，2組患者的肩關(guān)節(jié)后伸、MBI改善程度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2～3。

2.2 多效唑半抗原的結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 PAC-HS的質(zhì)譜鑒定

圖4 PAC-HS的一級(jí)質(zhì)譜圖Fig.4 Full scan mass spectrum of PAC-HS

本實(shí)驗(yàn)采用半制備高效液相色譜法對(duì)合成的多效唑半抗原進(jìn)行純化，得到較純的目標(biāo)物質(zhì)（圖4），能夠有效去除產(chǎn)物中的副產(chǎn)物和過(guò)剩的原料。

圖5 PAC-HS的二級(jí)質(zhì)譜掃描圖Fig.5 Secondary mass spectrum of PAC-HS

圖4 結(jié)果表明，一級(jí)質(zhì)譜ESI+下出現(xiàn)的m/z 394.1，相應(yīng)于加合質(zhì)子準(zhǔn)分子離子峰[M+H]+，與目標(biāo)物的理論相對(duì)分子質(zhì)量（393）相符。對(duì)分子離子進(jìn)行ESI+-MS2鑒定（圖5）出現(xiàn)若干碎片離子峰，各種碎片歸屬如下（圖6）：開裂方式1產(chǎn)生氯芐基峰（m/z 124.9），開裂方式2產(chǎn)生含苯環(huán)和雜環(huán)基峰（m/z 206.1），開裂方式3產(chǎn)生叔丁基峰（m/z 57.1），開裂方式4產(chǎn)生另一個(gè)含苯環(huán)和雜環(huán)基峰（m/z 276.1），開裂方式5產(chǎn)生丁酸殘基峰（m/z 101.0），高質(zhì)量端峰對(duì)應(yīng)母體加合離子峰（[M+H]+，m/z 394.2）。一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜峰表明經(jīng)純化后可得到多效唑半抗原目標(biāo)化合物。

圖6 PAC-HS的結(jié)構(gòu)式圖解Fig.6 Illustrative structural diagram of PAC-HS

2.2.2 PAC-HS紅外光譜鑒定

圖7 多效唑及其半抗原的紅外光譜圖Fig.7 Infrared spectra of paclobutrazol and PAC-HS

由圖7可知，原料和產(chǎn)物紅外光譜有相似之處，如：2 970.4 cm－1處為CüH伸縮振動(dòng)吸收峰，3 130.1 cm－1處為ArüH伸縮振動(dòng)吸收峰，1 690.7、1 500.5、1 410.2 cm－1處為苯環(huán)和雜環(huán)雙鍵骨架伸縮振動(dòng)吸收峰，760.7 cm－1處為ArüH面外彎曲振動(dòng)吸收峰。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)PAC和PAC-HS有明顯的不同，例如：反應(yīng)后多效唑中3 420.9 cm－1處OüH伸縮振動(dòng)吸收峰減弱，而酯基特征顯現(xiàn)，1 730.3 cm－1處為酯C=O伸縮振動(dòng)吸收峰，1 100.3 cm－1處為CüOüC單鍵伸縮振動(dòng)吸收峰。特別是半抗原中出現(xiàn)了1 730.3 cm－1為C=O的伸縮振動(dòng)吸收峰。紅外光譜分析表明多效唑中的羥基與琥珀酸酐形成了酯，即半抗原產(chǎn)物。

2.2.3 PAC-HS核磁共振分析

將PAC及純化后的PAC-HS進(jìn)行1H-NMR分析，結(jié)果見圖8及圖9。由圖8可知：1H-NMR（600 MHz， DMSO）δ 0.616（9H，—(CH3)3），7.105～7.240（4H，苯環(huán)），7.752～8.516（2H，雜芳環(huán)），3.226（2H，üCH2），3.437（1H，—OH），4.750（1H，CHüN），5.506（1H，CHüO）。圖9與圖8相比，PAC-HS的1H-NMR（600 MHz，DMSO）譜圖中保留了母體中苯環(huán)和氮雜環(huán)的氫譜信息，但δ 3.437（H，—OH）峰消失，增加了12.340（H，—COOH）峰和2.613～3.109（4H，—CH2CH2）峰。由此可推測(cè)琥珀酸酐開環(huán)與多效唑發(fā)生了酯化反應(yīng)，同時(shí)其中一個(gè)酰基轉(zhuǎn)變成了羧酸，為新化合物與蛋白質(zhì)結(jié)合創(chuàng)造了條件。

圖8 PAC的核磁共振圖譜Fig.8 1H-NMR spectrum of PAC

圖9 PAC-HS的核磁共振圖譜Fig.9 1H-NMR spectrum of PAC-HS

通過(guò)上述紅外光譜、質(zhì)譜和核磁共振氫譜分析，綜合結(jié)果表明所合成的產(chǎn)物即為理論設(shè)想的多效唑半抗原目標(biāo)物。

2.3 多效唑人工抗原的鑒定

2.3.1 紫外光譜掃描

圖10 PAC-HS（a）、BSA（b）和PAC-HS-BSA（c）的紫外掃描圖譜Fig.10 UV scanning spectra of PAC-HS （a）， BSA （b） and PAC-HS-BSA （c）

BSA在波長(zhǎng)278 nm處有吸收峰，多效唑半抗原在222 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，BSA與半抗原偶聯(lián)后，其產(chǎn)物的峰形發(fā)生變化且吸收產(chǎn)生了一定位移（圖10c），表明PAC-HS與BSA可能產(chǎn)生了偶聯(lián)。同樣，由圖11可知，OVA與PAC-HS也可能產(chǎn)生了偶聯(lián)。

圖11 PAC-HS（a）、OVA（b）和PAC-HS-OVA（c）的紫外掃描圖譜Fig.11 UV scanning spectra of PAC-HS （a）， OVA （b） and PAC-HS-OVA （c）

2.3.2 質(zhì)譜鑒定及偶聯(lián)物結(jié)合比分析

圖12 BSA（a）、OVA（b）、PAC-HS-BSA（c）及PAC-HS-OVA（d）的質(zhì)譜圖Fig.12 Mass spectra of BSA （a）， OVA （b）， PAC-HS-BSA （c） and PAC-HS-OVA （d）

BSA和OVA在連上多效唑分子后，其質(zhì)量數(shù)會(huì)發(fā)生改變，對(duì)照組蛋白質(zhì)BSA 的質(zhì)譜圖（圖12a）可見，單電荷離子峰為66 354.057，對(duì)照組OVA 的質(zhì)譜圖（圖12b）中單電荷離子峰為44 273.303。由PAC-HS-BSA 的質(zhì)譜圖（圖12c）可見，PAC-HS-BSA分子離子峰為71 274.359，PAC-HS-OVA分子離子峰（圖12d）為46 181.668。已知PAC-HS的相對(duì)分子質(zhì)量是393，可得出平均每個(gè)載體蛋白BSA分子上偶聯(lián)的多效唑半抗原分子個(gè)數(shù)=（71 274.359－66 354.057）/ 393≈12.5 個(gè)。載體蛋白OVA 分子上偶聯(lián)的多效唑半抗原分子個(gè)數(shù)=（46 181.668－44 273.303）/393≈4.9 個(gè)。制備相應(yīng)的抗血清小分子化合物合成的全抗原，一般要求小分子與載體蛋白的最適偶聯(lián)比在1∶10～1∶25之間，方可有效地刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答[25]，另有文獻(xiàn)報(bào)道每一載體上含有8～25 個(gè)半抗原能得到效價(jià)較高的抗體[26-27]。從偶聯(lián)比結(jié)果來(lái)看，本實(shí)驗(yàn)制備的多效唑免疫抗原（PAC-HS-BSA）免疫小鼠，有可能產(chǎn)生相應(yīng)的應(yīng)答。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)以琥珀酸酐為反應(yīng)物，采用微波無(wú)溶劑法制備多效唑半抗原，將多效唑中的—OH衍生成為帶有üCOOH的分子，以便利用更多—COOH偶聯(lián)蛋白。同時(shí)采用半制備高效液相色譜法對(duì)合成的多效唑半抗原進(jìn)行了純化，以避免雜質(zhì)與載體蛋白偶聯(lián)而干擾免疫效果。在此基礎(chǔ)上，采用碳二亞胺法制備了多效唑的免疫原及包被原。應(yīng)用質(zhì)譜、紅外光譜及核磁共振等分析技術(shù)，對(duì)所制備的多效唑半抗原及其全抗原進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。同時(shí)采用MALDI-TOF/MS分析技術(shù)，測(cè)得免疫原和包被原的偶聯(lián)比分別為12.5∶1和4.9∶1，成功合成了多效唑人工抗原，為進(jìn)一步研究構(gòu)建食品中多效唑快速分析新方法奠定了基礎(chǔ)。

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Synthesis and Identification of Stable Artificial Paclobutrazol Antigen

WANG Xiaofen1, YAN Aiping2, TAN Ting2, MAO Xuejin3, LIU Junjun1, GUO Lan2, WAN Yiqun1,2,*
(1. College of Chemistry, Nanchang University, Nanchang 330031, China; 2. Center of Analysis and Testing, Nanchang University, Nanchang 330047, China; 3. State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

In order to synthesize a novel and effective artificial paclobutrazol antigen， succinic anhydride method was used to modify the structure of paclobutrazol. Paclobutrazol hapten (PAC-HS) with an active carboxyl group was obtained, and conjugated separately with BSA (bovine serum albumin) and OVA (ovalbumin) by carbodiimide method. Immunogen and coating antigen were obtained and designated as PAC-HS-BSA and PAC-HS-OVA, respectively. The hapten was characterized by mass spectrometry, infrared spectroscopy and1H nuclear magnetic resonance spectroscopy. Ultraviolet spectrophotometry was applied to determine the artificial paclobutrazol antigen. The coupling ratios of the conjugates were determined by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry （MALDI-TOF/MS）. The results suggested that paclobutrazol antigen was successfully synthesized, which will greatly facilitate antibody production and immunoassay development.

paclobutrazol； hapten； artificial antigen； preparation

10.7506/spkx1002-6630-201607025

TS201.2

A

1002-6630（2016）07-0134-06

王曉芬, 鄢愛平, 譚婷, 等. 多效唑人工抗原的合成與鑒定[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(7): 134-139. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201607025. http://www.spkx.net.cn

WANG Xiaofen， YAN Aiping， TAN Ting， et al. Synthesis and identification of stable artificial paclobutrazol antigen［J］. Food Science，2016, 37(7): 134-139. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201607025. http://www.spkx.net.cn

2015-08-15

江西省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（20133ACG70002；20141BBG70093；20141BBF60047）；江西省教育廳2014年度科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（GJJ14221）

王曉芬（1989—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail：luckyfen123@163.com

*通信作者：萬(wàn)益群（1964—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail：wanyiqun@ncu.edu.cn