半抗原
- 抗獨(dú)特型抗體在半抗原免疫檢測(cè)中的應(yīng)用
518118半抗原是一類由于自身分子量過(guò)小而無(wú)法刺激免疫應(yīng)答，必須偶聯(lián)載體蛋白才能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的小分子，這類小分子的檢測(cè)可以廣泛應(yīng)用于多種領(lǐng)域。例如，甾體激素和甲狀腺激素半抗原被廣泛用于臨床診斷［1］；在食品安全和環(huán)境保護(hù)領(lǐng)域，需要檢測(cè)水體、植物和微生物中的天然毒素、人工合成的農(nóng)藥和獸藥等半抗原［2-3］，這些方面的應(yīng)用都迫切需要一種能快速準(zhǔn)確檢測(cè)半抗原且對(duì)檢測(cè)人員和檢測(cè)環(huán)境要求低的方法。相對(duì)于色譜等傳統(tǒng)檢測(cè)手段，免疫檢測(cè)更契合這些需求。由于半抗
生物技術(shù)進(jìn)展 2023年5期2023-10-14
- 一種新型擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥半抗原的設(shè)計(jì)合成及其效果評(píng)價(jià)
體，而重點(diǎn)在于半抗原的設(shè)計(jì)合成。一直以來(lái)，由于對(duì)抗原抗體作用機(jī)理以及半抗原空間結(jié)構(gòu)的了解不足，導(dǎo)致半抗原設(shè)計(jì)具有很大的盲目性，通常需要反復(fù)多次的試錯(cuò)嘗試，耗費(fèi)了大量的資金和時(shí)間。而且對(duì)于非有機(jī)合成專業(yè)的人員來(lái)說(shuō)，對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行有機(jī)修飾或從頭合成半抗原，往往非常困難。另外，擬除蟲(chóng)菊酯是一類典型的手性農(nóng)藥，含有多個(gè)旋光異構(gòu)單體，這對(duì)于能夠識(shí)別手性單體的抗體而言，一種菊酯往往是多種物質(zhì)的混合物，增大了免疫分析的難度。目前針對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯半抗原的合成主要有全合成在苯環(huán)
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年1期2023-02-13
- 廣譜性抗體的制備及其在食品安全快速檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展
物的混合物作為半抗原,最終免疫制得了能識(shí)別32種(氟)喹諾酮類抗生素的廣譜性抗體。采用混合抗原法制備廣譜性抗體具有簡(jiǎn)單高效的特點(diǎn),但存在一些問(wèn)題,如混合抗原中每種抗原的免疫原性不同,優(yōu)勢(shì)抗原往往產(chǎn)生高親和力的抗體,而免疫原性弱的抗原產(chǎn)生的抗體親和力較低或丟失[13]。圖2 采用混合抗原免疫動(dòng)物后制備廣譜性單克隆抗體Fig.2 Preparation of broad-spectrum monoclonal antibodies by immunizing
食品與發(fā)酵工業(yè) 2022年22期2022-11-29
- 稻瘟靈單克隆抗體的制備及評(píng)價(jià)
，合成了稻瘟靈半抗原，并與蛋白偶聯(lián)制備抗體，通過(guò)常規(guī)免疫與雜交瘤細(xì)胞融合，成功篩選得到特異性識(shí)別稻瘟靈的單克隆抗體，并以此為基礎(chǔ)建立了稻瘟靈的快速免疫檢測(cè)方法，為檢測(cè)試紙條等產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供了依據(jù)。1 實(shí)驗(yàn)部分1.1 試劑、材料與儀器弗氏完全/不完全佐劑、牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）、TLC薄層層析板（GF254）、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）、3，3＇，5，5＇-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）均為Sigma公司產(chǎn)品，稻瘟靈等農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（德國(guó)Dr．Ehre
分析測(cè)試學(xué)報(bào) 2022年11期2022-11-18
- 擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥半抗原專利技術(shù)分析
建立，關(guān)鍵在于半抗原的涉及和改造，通過(guò)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)方法加以適當(dāng)?shù)男揎?，使其分子結(jié)構(gòu)的某個(gè)位置上帶上端基為活性基團(tuán)的連接臂，使其轉(zhuǎn)變?yōu)閹в杏坞x氨基或游離羧基的衍生物，從而與大分子載體相連接，生成半抗原-載體的偶聯(lián)物，此偶聯(lián)物即為人工抗原。筆者檢索了國(guó)內(nèi)外涉及擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥半抗原設(shè)計(jì)與合成的發(fā)明專利并對(duì)申請(qǐng)人、發(fā)明內(nèi)容等進(jìn)行梳理，以期為擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥半抗原或人工抗原的研究或相關(guān)發(fā)明專利的挖掘提供參考。1 申請(qǐng)人、申請(qǐng)量特點(diǎn)從申請(qǐng)年度和申請(qǐng)量來(lái)看，全球有關(guān)擬除
世界農(nóng)藥 2022年8期2022-09-02
- 麥角酸二乙基酰胺人工抗原的制備與初步應(yīng)用
制備 LSD 半抗原，并連接于牛血清白蛋白（BSA）得到 LSD 完全抗原，并將其作為包被原應(yīng)用于 LSD 膠體金免疫層析試劑中，建立了 LSD 膠體金免疫層析半定量分析方法，可實(shí)現(xiàn) 5 min 現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 主要儀器設(shè)備 XYZ 大平臺(tái)三維感應(yīng)劃膜噴金儀 HM3260 購(gòu)自上海金標(biāo)生物科技有限公司；HGS510-1 噴金標(biāo)機(jī)購(gòu)自杭州峰航科技有限公司；MCE 1202S-2CCN-0 精密電子天平購(gòu)自德國(guó)Sartori
中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù) 2022年3期2022-06-11
- 吡蟲(chóng)啉人工半抗原合成方法的優(yōu)化
用于IMI人工半抗原的合成，且應(yīng)用最為廣泛。半抗原從-Cl衍生簡(jiǎn)單碳鏈，對(duì)吡蟲(chóng)啉的結(jié)構(gòu)改動(dòng)小，且Cl原子位于分子識(shí)別的遠(yuǎn)端，能使IMI的抗原決定簇充分暴露，合成半抗原的抗體非常靈敏。通過(guò)親和取代反應(yīng)取代IMI吡啶環(huán)上α-Cl這一半抗原合成方法以朱國(guó)念等發(fā)表的最為成熟。雖然此方法為目前最為常用的IMI人工半抗原合成方法，但也存在很多缺點(diǎn)，如：試驗(yàn)過(guò)程中使用高?；瘜W(xué)試劑，易造成火災(zāi)、半抗原合成過(guò)程容易產(chǎn)生較多雜質(zhì)、免疫后小鼠血清抗體效價(jià)低等。本研究旨在減少常規(guī)
- 唑吡坦抗原的合成與鑒定
此，研究唑吡坦半抗原的合成方法及唑吡坦免疫檢測(cè)試劑對(duì)于唑吡坦的濫用快速檢測(cè)非常重要。目前，關(guān)于唑吡坦半抗原設(shè)計(jì)及快速檢測(cè)的方法尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)，本文主要通過(guò)碳二亞胺法合成唑吡坦半抗原并制備唑吡坦（ZOL）免疫檢測(cè)試劑（膠體金法）。擬為唑吡坦的濫用快速檢測(cè)提供解決方案，從而服務(wù)于全球公共衛(wèi)生健康事業(yè)。1 材料與方法1.1 儀器，試劑1.1.1 儀器精 密 電 子 天 平MCE 1202S-2CCN-0（Sartorius），數(shù)顯加熱恒溫磁力攪拌器C-MAG HS7
中國(guó)藥物濫用防治雜志 2021年3期2021-06-20
- 毒品成癮的免疫療法研究進(jìn)展
蛋白為載體合成半抗原，輔以完全弗氏佐劑，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示有50%的免疫接種大鼠對(duì)可卡因?qū)е碌闹袠猩窠?jīng)系統(tǒng)影響表現(xiàn)出完全的抗藥性，且保護(hù)程度與抗可卡因抗體的量密切相關(guān)。1995年，Carrera等[10]研制出第1種公認(rèn)可靠的抗可卡因疫苗，以苯甲酰愛(ài)岡寧(可卡因甲酯的水解物)為原料，以血藍(lán)蛋白為載體，用標(biāo)準(zhǔn)方法合成了以六碳連接體半抗原，后期Sakurai等[11]還合成了1種用兩個(gè)酰胺基取代了六碳連接體兩個(gè)酯基的半抗原，效價(jià)更穩(wěn)定、更有效。接種了可卡因疫苗的老鼠
- 殺菌劑半抗原的合成及其免疫分析技術(shù)的研究進(jìn)展①
抗體的質(zhì)量，而半抗原的設(shè)計(jì)和合成對(duì)抗體質(zhì)量好壞起到?jīng)Q定性作用。因此，本文對(duì)殺菌劑半抗原的合成及免疫分析技術(shù)在殺菌劑殘留檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行綜述。1 殺菌劑半抗原的合成半抗原的設(shè)計(jì)要求既要盡可能保留分析物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，還要盡量減少對(duì)分析物的空間構(gòu)象和電荷分布的影響。下面按照殺菌劑種類不同分別對(duì)半抗原合成進(jìn)行介紹。1.1三唑類殺菌劑半抗原的合成 三唑類殺菌劑是目前生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用的一類殺菌劑，具有廣譜、高效和內(nèi)吸性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)[17]，其共同結(jié)構(gòu)是主碳鏈上含有羥基(或酮基
中國(guó)免疫學(xué)雜志 2020年24期2021-01-26
- 一種滴滴涕膠體金免疫快速檢測(cè)試紙條的研制
。圖1 滴滴涕半抗原合成1.2 方法1.2.1 滴滴涕半抗原的制備取1.7g鄰氯苯乙酸，加5mL氯苯，再加入1.8g水合氯醛，加熱至完全溶解后，加入三氯化鋁5.38g，室溫?cái)嚢?h，停止反應(yīng)，加水80mL和乙酸乙酯120mL，萃取分離，分去水相，有機(jī)相無(wú)水硫酸鈉干燥蒸干，得到黃色油狀物，上硅膠柱，石油醚/乙酸乙酯（v/v，1/1）洗脫分離，得到乙酸滴滴涕半抗原產(chǎn)物1.8g，收率43.9%。1.2.2 免疫原的制備—滴滴涕半抗原與牛血清白蛋白（BSA）偶聯(lián)物
食品安全導(dǎo)刊 2020年28期2020-10-23
- 小鼠CD40胞外片段的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備
細(xì)胞應(yīng)答小分子半抗原的增強(qiáng)作用，利用TRIzol法提取BALB/c小鼠脾臟總RNA，并反轉(zhuǎn)錄成cDNA;根據(jù)CD40的胞外段CDS設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因，構(gòu)建pGEX4T-1-CD40表達(dá)載體，進(jìn)行原核表達(dá)及多克隆抗體制備。結(jié)果表明，成功擴(kuò)增了522 bp的目的基因，表達(dá)并純化獲得了45 ku的CD40重組蛋白，多克隆抗體抗體不但可與重組蛋白結(jié)合，與小鼠脾臟天然CD40蛋白也可以特異性結(jié)合。說(shuō)明CD40重組蛋白表達(dá)成功，且制備的抗體有望模擬CD4
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2020年6期2020-07-09
- 雞肉中金剛烷胺間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立
疫檢測(cè)方法時(shí)，半抗原的設(shè)計(jì)與合成是關(guān)鍵步驟，直接決定了制備的抗體質(zhì)量的優(yōu)劣[28-30]。報(bào)道[20-21]顯示半抗原的復(fù)雜空間結(jié)構(gòu)和分子極性可能是產(chǎn)生高特異性抗體的關(guān)鍵，氨基的保留與否可能不影響抗體特異性，但大多數(shù)抗體表現(xiàn)出低親和力或?qū)€(gè)別藥物具有高選擇性。本研究通過(guò)分析現(xiàn)有的金剛烷胺半抗原及其抗體，設(shè)計(jì)并制備一種針對(duì)金剛烷胺分子特點(diǎn)的新型半抗原，利用產(chǎn)生的金剛烷胺特異性單克隆抗體，擬建立一種與現(xiàn)有檢測(cè)方法相比更為靈敏、適用性強(qiáng)的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附分析
食品科學(xué) 2020年10期2020-06-01
- 甲基苯丙胺疫苗的研究進(jìn)展
白偶聯(lián)METH半抗原(MH6)的抗METH疫苗(MH6-KLH)免疫大鼠，可以阻斷由METH誘導(dǎo)的體溫調(diào)節(jié)和精神運(yùn)動(dòng)，并且減少由METH引起的自發(fā)活動(dòng)；對(duì)疫苗組與對(duì)照組大鼠的藥代動(dòng)力學(xué)研究顯示其血清中METH濃度更高，且腦內(nèi)METH濃度更低，并且每只小鼠中METH的濃度與其自身抗體效價(jià)相關(guān)。之后研究人員用該候選疫苗接種大鼠模型，發(fā)現(xiàn)其能夠抑制METH的自我給藥，并且在維持期間產(chǎn)生了瞬時(shí)的和劑量依賴性的自我給藥效應(yīng)。與對(duì)照組比較，MH6-KLH接種大鼠血液中
醫(yī)學(xué)研究雜志 2019年6期2019-12-10
- 以煙草花葉病毒為載體的μE3單克隆抗體的制備及鑒定①
。雌三醇是一種半抗原，在體內(nèi)通過(guò)雌二醇的代謝而產(chǎn)生，其主要是存在于尿液中的一種天然的雌激素，在胎盤(pán)中芳構(gòu)化形成雌三醇[1]。雌三醇在孕婦體內(nèi)含量的變化與巨大兒和唐氏綜合征或愛(ài)德華氏綜合征等疾病密切相關(guān)[2-5]。在孕婦體內(nèi)未結(jié)合的雌三醇濃度非常低，則預(yù)示著胎兒存在染色體異常的可能，可能患有愛(ài)德華氏綜合征或唐氏綜合征；而雌三醇異常升高，則增加了孕婦懷有巨大兒的風(fēng)險(xiǎn)，因此雌三醇檢測(cè)是篩查孕婦胎兒畸形的重要指標(biāo)，在優(yōu)生優(yōu)育中有著重要作用。免疫學(xué)方法是利用抗原、抗
中國(guó)免疫學(xué)雜志 2019年20期2019-11-20
- 殺草丹半抗原及其人工抗原的制備與鑒定
藥與三嗪類農(nóng)藥半抗原的設(shè)計(jì)要點(diǎn),為獲取高質(zhì)量特異性抗體提供資料參考。Shiro 等[12]合成了一種殺草丹半抗原并制備出單克隆抗體,利用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫法對(duì)谷物和水質(zhì)中殺草丹農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢測(cè)。免疫分析方法的建立,關(guān)鍵技術(shù)在于能獲取到特異性強(qiáng)的抗體[13]。要實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo),前提條件就得合成制備出合適的人工抗原。殺草丹化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,直接進(jìn)行修飾引入活性基團(tuán)形成半抗原所需反應(yīng)條件較為劇烈、苛刻[14]。為使分子結(jié)構(gòu)中氯苯環(huán)最大限度的暴露出來(lái),本研究利用乙基羥乙胺
食品工業(yè)科技 2019年14期2019-09-11
- 農(nóng)藥吡蟲(chóng)啉酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法研究進(jìn)展
進(jìn)行綜述。1 半抗原設(shè)計(jì)小分子酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法研究的前提是設(shè)計(jì)合理的半抗原，再利用半抗原與載體蛋白連接制備完全抗原。吡蟲(chóng)啉分子量為255.7，為一種小分子，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是通過(guò)碳鏈連接的咪唑環(huán)和吡啶環(huán)，咪唑環(huán)上有一個(gè)—NO2，吡啶環(huán)上有一個(gè)—Cl。這些基團(tuán)與載體蛋白的連接較困難，需要對(duì)吡蟲(chóng)啉分子先進(jìn)行衍生。在前人的報(bào)道中，有6種衍生方法(圖1)，分別給吡蟲(chóng)啉分子衍生了易于與載體蛋白連接的—COOH(I[15]、Ⅱ[15]、Ⅲ[16]、Ⅳ[17]、V[16])或
安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年12期2018-05-03
- 呋喃西林代謝物半抗原的制備及其免疫檢測(cè)中的應(yīng)用
M 衍生制備了半抗原，通過(guò)偶聯(lián)蛋白后免疫小鼠制備了單克隆抗體，其IC50值為31.25 μg/L。任海濤[11]等將4-（4-醛基苯氧基）-丁酸和4-（4-醛基苯氧基）-乙酸與SEM衍生合成半抗原，通過(guò)偶聯(lián)蛋白后免疫小鼠制備了單克隆抗體，其 IC50值為12.37 μg/L。Huang Deng Yu等[12]用4-羧基苯甲醛與SEM衍生制備了半抗原，通過(guò)偶聯(lián)蛋白后免疫小鼠制備了單克隆抗體，其IC50值為0.54 μg/L?，F(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道合成的SEM半抗原結(jié)
現(xiàn)代食品科技 2018年3期2018-04-24
- 克百威人工抗原合成及其免疫應(yīng)用
性的抗體，包括半抗原設(shè)計(jì)、人工抗原合成及抗體制備，而半抗原的設(shè)計(jì)與合成是農(nóng)藥免疫分析的前提、基礎(chǔ)和關(guān)鍵。做為典型的小分子化合物，克百威本身不具有免疫原性，同時(shí)其結(jié)構(gòu)中不含有可直接偶聯(lián)的功能基團(tuán)，需要進(jìn)行半抗原衍生化或者人工合成。Abad等[9]設(shè)計(jì)合成4種克百威半抗原(表1)，根據(jù)抗體制備和免疫分析結(jié)果，確定免疫效果最好的克百威半抗原為4-[〔(2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基〕氨基]丁酸(BFNB)。因而在此后的克百威免疫分析中，多選
西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào) 2018年1期2018-01-31
- 基于3種載體蛋白的萊克多巴胺抗原的合成與檢測(cè)
AC-琥珀酸酯半抗原與3種載體蛋白（BSA、OVA和KLH）偶聯(lián)合成人工抗原，采用紫外光譜掃描、測(cè)定偶聯(lián)比和ESI-MS進(jìn)行鑒定；通過(guò)免疫小鼠獲得抗血清，采用ELISA比較其效價(jià)，對(duì)3種人工抗原的免疫原性進(jìn)行評(píng)定，結(jié)果顯示3種抗血清效價(jià)為4 000～32 000，表明合成的3種人工抗原都具有免疫原性，其中以KLH為載體蛋白的抗原的免疫效果較好，可用于制備高效RAC抗體。萊克多巴胺；載體蛋白；半抗原；人工抗原；免疫原性萊克多巴胺（ractopamine，RA
廣東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年7期2017-11-03
- 西維因人工抗原的合成與鑒定
且?guī)Щ钚曰鶊F(tuán)的半抗原；(2)使半抗原的活性基團(tuán)與小牛血清及卵清蛋白等載體蛋白偶聯(lián)制備具有免疫原性和特異性的人工抗原。1 材料和方法1.1 試驗(yàn)試劑吡啶、α-萘酚、N-羥基琥珀酰亞胺、卵清蛋白(OVA)、對(duì)硝基苯氯甲酸酯、6-氨基己酸、牛血清蛋白、乙酸乙酯、石油醚、N,N-二環(huán)己基碳二亞胺(縮寫(xiě)作DCC)、丙酮、硼酸鹽緩沖液、乙醚、磷酸鹽緩沖液、H硅膠、鹽酸。1.2 試驗(yàn)儀器ZF-1型紫外分析燈，UV-7504型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，F(xiàn)rontier FT-I
山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版） 2017年10期2017-10-10
- 三嗪類除草劑免疫分析技術(shù)的研究進(jìn)展
鍵技術(shù)環(huán)節(jié),即半抗原及人工抗原的設(shè)計(jì)合成、抗體的制備以及各種免疫分析技術(shù)在三嗪類除草劑檢測(cè)中的應(yīng)用,并對(duì)目前存在的問(wèn)題和今后的發(fā)展方向進(jìn)行了討論。免疫分析技術(shù),三嗪類,除草劑,農(nóng)藥殘留三嗪類除草劑(triazine herbicides)自20世紀(jì)50年代問(wèn)世以來(lái),被廣泛用作抑制農(nóng)田中雜草生長(zhǎng)的高效除草劑,其分子結(jié)構(gòu)以六元環(huán)為主體由三個(gè)C和三個(gè)N對(duì)稱排列,所以也可稱作“均三氮苯類除草劑”。常見(jiàn)的三嗪類除草劑品種有阿特拉津(atrazine)、西瑪津(sim
食品工業(yè)科技 2017年16期2017-09-18
- 食品中黃曲霉毒素總量免疫分析方法研究進(jìn)展
對(duì)上述B族AF半抗原分子設(shè)計(jì)、抗原合成方法及所產(chǎn)生抗體特性進(jìn)行綜合分析,作者認(rèn)為,肟化活潑酯法效果最優(yōu),選擇AFB1的2位羰基為活性位點(diǎn),通過(guò)肟化引入活性基團(tuán)羧基,以單酰胺鍵為間隔臂合成抗原,該方法操作步驟簡(jiǎn)單,反應(yīng)條件溫和,產(chǎn)物產(chǎn)率較高;同時(shí),所產(chǎn)生抗體具有效價(jià)高(免疫動(dòng)物易產(chǎn)生抗體)、敏感(IC50為0.066 μg/kg)、特異(100%識(shí)別AFB1)、廣譜(同時(shí)100%識(shí)別AFB2)等特性。其次是混合酸酐法和半縮醛法,均是選擇AFB2a的3位羥基為
食品工業(yè)科技 2017年13期2017-07-31
- 酶聯(lián)免疫吸附分析法應(yīng)用于戰(zhàn)場(chǎng)水環(huán)境TNT檢測(cè)的可行性研究
造性提出了合成半抗原的3種方法；對(duì)應(yīng)3類半抗原采用不同蛋白偶聯(lián)方法合成3種人工抗原；分析動(dòng)物體對(duì)TNT人工抗原可產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答并可獲得滿足ELISA要求的抗血清；樣品前處理方法可滿足快速檢測(cè)要求。從理論證明建立TNT的ELISA并滿足檢測(cè)要求的可行性；同時(shí)，提出了利用此法檢測(cè)待解決和優(yōu)化的問(wèn)題。關(guān)鍵詞：TNT；水環(huán)境；酶聯(lián)免疫吸附分析法；半抗原；抗血清中圖分類號(hào)：TJ41；X832 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）01-0125-
湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年1期2017-03-09
- 酶聯(lián)免疫分析技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用
術(shù)要點(diǎn)2.1 半抗原的設(shè)計(jì)多數(shù)農(nóng)藥都是小分子物質(zhì)，本身不對(duì)機(jī)體產(chǎn)生刺激，并不產(chǎn)生針對(duì)農(nóng)藥抗原決定簇的特異性，需與大分子載體產(chǎn)生藕聯(lián)后才能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生刺激，進(jìn)而產(chǎn)生抗體。因此，需要合成可與載體藕聯(lián)，并能最大程度地對(duì)待測(cè)分析結(jié)構(gòu)進(jìn)行模擬的半抗原。有學(xué)者認(rèn)為，理想的半抗原應(yīng)包括待測(cè)物特征結(jié)構(gòu)、便于機(jī)體對(duì)特征結(jié)構(gòu)進(jìn)行識(shí)別的連接臂及末端可與蛋白載體產(chǎn)生共價(jià)連接的功能基團(tuán)[3]。因此，半抗原設(shè)計(jì)原則為盡可能保留待測(cè)物特征結(jié)構(gòu)，并在恰當(dāng)位置引入合適連接臂及功能基團(tuán)，方便其
食品安全導(dǎo)刊 2017年24期2017-02-01
- 一種新型可替寧抗原的合成
(S)-可替寧半抗原及人工抗原，并鑒定其是否合成成功。以(S)-可替寧為起始原料，經(jīng)硝化、還原和羧基化等一系列反應(yīng)得到(S)-可替寧半抗原，再通過(guò)DCC法將半抗原與BSA偶聯(lián)得到人工抗原；(S)-可替寧半抗原經(jīng)HPLC-MS結(jié)構(gòu)確認(rèn)，人工抗原經(jīng)紫外掃描和免疫學(xué)方法鑒定，結(jié)果表明目標(biāo)半抗原及人工抗原合成成功。通過(guò)本文的合成方法可以得到活性強(qiáng)、免疫性強(qiáng)的人工抗原?？商鎸帲?span id="syggg00" class="hl">半抗原；人工抗原；化學(xué)合成；免疫檢測(cè)(S)-可替寧，化學(xué)名為(S)-1-甲基-5-(3-吡
廣州化工 2016年22期2016-12-14
- 氯吡脲人工抗原的合成與鑒定
，EDC）法將半抗原分別與牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）和卵清蛋白（ovalbumin，OVA）進(jìn)行偶聯(lián)，獲得CPPU的免疫抗原（CPPU-BSA)和包被抗原（CPPU-OVA）。采用質(zhì)譜、元素分析和核磁共振氫譜對(duì)CPPU半抗原（CPPU-COOH）的分子結(jié)構(gòu)式進(jìn)行鑒定；采用紫外光譜和高性能基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)偶聯(lián)物的結(jié)構(gòu)和相對(duì)分子質(zhì)量進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示成功合成出CPPU人工抗原，為其抗體的制備和免疫學(xué)方法
食品科學(xué) 2016年21期2016-12-02
- 多效唑人工抗原的合成與鑒定
含羧基的多效唑半抗原。將純化后的半抗原分別與牛血清白蛋白和卵清蛋白經(jīng)N-羥基琥珀酰亞胺活潑酯法偶聯(lián)制備免疫原和包被原。采用質(zhì)譜、紅外光譜、核磁共振氫譜對(duì)多效唑半抗原的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定；采用紫外光譜及高性能基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)偶聯(lián)物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示成功合成出多效唑人工抗原，為其抗體的制備和免疫學(xué)方法的構(gòu)建奠定了前期研究基礎(chǔ)。多效唑；半抗原；人工抗原；制備多效唑（paclobutrazol，PAC）作為一種抑制類的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有延緩植
食品科學(xué) 2016年7期2016-11-14
- 直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定飼料中沙丁胺醇
。目前沙丁胺醇半抗原的合成多采用酸酐與沙丁胺醇的醇羥基或酚羥基反應(yīng)形成酯鍵衍生出含羧基末端的連接臂[13,14]，因此連接臂難以定位，半抗原可能存在不同異構(gòu)體；半抗原中的酯鍵不夠穩(wěn)定[20]，特別是在免疫動(dòng)物制備抗體的過(guò)程中，易被動(dòng)物體內(nèi)的酯酶降解，難以得到單一高效的抗沙丁胺醇抗體。本實(shí)驗(yàn)室采用在沙丁胺醇的酚羥基上通過(guò)醚鍵衍生間隔臂，得到的半抗原(圖1)結(jié)構(gòu)單一，穩(wěn)定性好；采用活性酯法將牛血清白蛋白(BSA)和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)分別與沙丁胺醇半抗原共
分析科學(xué)學(xué)報(bào) 2016年6期2016-10-16
- 天名精內(nèi)酯酮多克隆抗體的制備
核加成反應(yīng)制備半抗原天名精內(nèi)酯酮縮氨基脲(CN)，使用MS和NMR對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定；采用戊二醛法將半抗原和載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)，合成天名精內(nèi)酯酮免疫原(CN-BSA)和包被原(CN-OVA)，采用紫外吸收掃描法、紅外光譜法對(duì)免疫原及包被原進(jìn)行鑒定；用制備好的免疫原免疫健康BALB/c小鼠獲得天名精內(nèi)酯酮多克隆抗體，通過(guò)間接非競(jìng)爭(zhēng)ELISA法測(cè)定其效價(jià)。【結(jié)果】 成功制備了天名精內(nèi)酯酮免疫原(CN-BSA)和包被原(CN-OV
西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版） 2016年4期2016-06-15
- 孔雀石綠單克隆抗體制備和酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的建立
合成1種高質(zhì)量半抗原。通過(guò)偶聯(lián)載體蛋白、動(dòng)物免疫和細(xì)胞融合， 制備出一株高質(zhì)量的單克隆抗體MGDA4C7，亞類為IgG1，輕鏈為κ型。 通過(guò)對(duì)包被原濃度、抗體濃度、二抗?jié)舛鹊膬?yōu)化，建立了孔雀石綠間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法。方法半抑制濃度（IC50）為0.96 μg/L，線性檢測(cè)范圍（IC20～C80）為0.1～8.1 μg/L，LOD（IC10）為0.05 μg/L，回歸方程y=Symbolm@@ 0.3274lgx+0.4698（R2=0.9891）。 本
分析化學(xué) 2016年9期2016-05-14
- 變應(yīng)性接觸性皮炎的免疫機(jī)制
，ACD)是由半抗原-特應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo)、于過(guò)敏原接觸皮膚后激發(fā)產(chǎn)生的遲發(fā)型超敏反應(yīng)(Ⅳ型超敏反應(yīng))，以抗原刺激后局部皮膚出現(xiàn)一系列的皮膚炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、炎癥介質(zhì)釋放為主要特征[1]。ACD是目前世界上職業(yè)性皮膚病的最大難題之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)約占職業(yè)性疾病發(fā)病率的20%[2]，這種職業(yè)性的接觸性過(guò)敏不僅存在于產(chǎn)業(yè)工人中，也常見(jiàn)于醫(yī)護(hù)人員、銀行職員中[3]，在中國(guó)ACD的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢(shì)[4]。目前，關(guān)于ACD的分子機(jī)制和細(xì)胞通路研究多基于動(dòng)物模型的接觸性超敏反
中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志 2016年3期2016-04-11
- 黃曲霉毒素B1半抗原分子設(shè)計(jì)與抗原合成及抗體特性研究進(jìn)展
黃曲霉毒素B1半抗原分子設(shè)計(jì)與抗原合成及抗體特性研究進(jìn)展王亞楠1,2,王曉斐3,牛琳琳1,2,雷 壯1,2,張海棠1,2,王自良1,2,*(1.河南科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院,河南新鄉(xiāng) 453003;2.動(dòng)物病毒病防控與藥殘分析河南省高校重點(diǎn)學(xué)科開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室,河南新鄉(xiāng) 453003;3.河南科技學(xué)院新科學(xué)院,河南新鄉(xiāng) 453003)本文綜述了國(guó)內(nèi)外半抗原分子設(shè)計(jì)方法、基本要求、應(yīng)遵循原則、抗原合成方法等方面的研究進(jìn)展,尤其是對(duì)黃曲霉毒素B1(AFB1)半抗原分子設(shè)
食品工業(yè)科技 2016年23期2016-02-09
- 新型喹乙醇?xì)埩魳?biāo)志物人工半抗原的設(shè)計(jì)及其在動(dòng)物組織殘留檢測(cè)中的應(yīng)用
殘留標(biāo)志物人工半抗原的設(shè)計(jì)及其在動(dòng)物組織殘留檢測(cè)中的應(yīng)用白玉惠，王鶴佳，劉智宏*，黃耀凌，徐士新(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081)為提高酶聯(lián)免疫方法測(cè)定喹乙醇?xì)埩魳?biāo)志物(MQCA)的檢測(cè)性能，設(shè)計(jì)了一種新型MQCA人工半抗原，該半抗原既完整保留MQCA分子特征性基團(tuán)和結(jié)構(gòu)，又具有便于和蛋白質(zhì)載體偶聯(lián)的基團(tuán)-NH2。通過(guò)三步化學(xué)反應(yīng)合成該半抗原，將其與蛋白質(zhì)載體偶聯(lián)成為免疫抗原后，進(jìn)一步制備特異性抗體,研制了MQCA酶聯(lián)免疫試劑盒，靈敏度高，特異性好，
中國(guó)獸藥雜志 2016年2期2016-02-07
- 水胺硫磷半抗原分子的設(shè)計(jì)及其免疫效果*
計(jì)合成了ICP半抗原，并制備了抗ICP多克隆抗體。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器1.1.1 主要試劑弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、3，3'，5，5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)，美國(guó)Sigma公司;水胺硫磷及其相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH;羊抗兔IgG-HRP，購(gòu)于博士德公司;三氯硫磷，西亞試劑公司;二環(huán)已基碳二亞胺(DCC)、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、N，N-二甲基甲酰胺(DM
食品與發(fā)酵工業(yè) 2015年8期2015-12-25
- 芴完全抗原和多克隆抗體制備與鑒定
鍵性一步。芴是半抗原，相對(duì)分子質(zhì)量224.26，只具有反應(yīng)原性，不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，與載體蛋白偶聯(lián)，制備完全抗原是制備芴抗體以及進(jìn)一步建立免疫學(xué)檢測(cè)方法的前提。本實(shí)驗(yàn)制備了針對(duì)芴的兩種完全抗原，并制備出多克隆抗體，以期為ELISA和免疫膠體金試紙條等檢測(cè)方法的建立奠定基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 動(dòng)物與試劑2 只SPF級(jí)6～8 周齡雌性BALB/c小鼠，購(gòu)于吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，合格證號(hào)為2011-0003，動(dòng)物使用許可證號(hào)為長(zhǎng)春生物制品研究所
食品科學(xué) 2015年9期2015-12-13
- 一種新的沙丁胺醇人工抗原的合成及單克隆抗體的制備
4-溴丁酸乙酯半抗原合成人工抗原可制備靈敏度高、特異性好的單克隆抗體.【方法】將硫酸沙丁胺醇(SAL)與4-溴丁酸乙酯反應(yīng)制備半抗原(SAL-HS);通過(guò)N-羥基琥珀酰亞胺活化酯法合成免疫原與包被原，用聚丙烯酰胺凝膠電泳、紫外光譜和質(zhì)譜方法對(duì)沙丁胺醇免疫原及包被原進(jìn)行鑒定.免疫原免疫Balb/c小鼠，采用融合技術(shù)產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞株，體內(nèi)誘生腹水法制備單克隆抗體，并鑒定其免疫學(xué)特性.【結(jié)果和結(jié)論】篩選出1株雜交瘤細(xì)胞株，其細(xì)胞培養(yǎng)上清液效價(jià)達(dá)1∶128 000
- 半抗原DNP修飾自體腫瘤疫苗治療晚期惡性黑色素瘤的臨床研究
瘤二科臨床研究半抗原DNP修飾自體腫瘤疫苗治療晚期惡性黑色素瘤的臨床研究陳殿君 李曉松 趙輝 付艷 胡佳 祁楠 石秀麗 杜楠作者單位：100048 北京 解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院腫瘤二科目的 探討半抗原二硝基氟苯（dinitrophenyl，DNP）修飾自體腫瘤疫苗在晚期惡性黑色素瘤治療中的作用。方法 84例Ⅲ期或Ⅳ期可切除惡性黑色素瘤患者隨機(jī)分為半抗原DNP修飾瘤苗組和半抗原DNP未修飾瘤苗組，每組42例，分別采用半抗原DNP修飾的自體腫瘤疫苗和半抗原D
中國(guó)癌癥防治雜志 2014年3期2014-04-30
- 小分子半抗原直接包被ELISA用于蝦肉氯霉素檢測(cè)
000）小分子半抗原直接包被ELISA用于蝦肉氯霉素檢測(cè)賽娜1，吳蘊(yùn)棠1，孫忠1，烏蘭圖雅2，黃國(guó)偉1，*（1.天津醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)系，天津300070；2.錫林郭勒職業(yè)學(xué)院信息技術(shù)工程系，內(nèi)蒙古錫林浩特026000）探討新型氨基化小分子半抗原直接包被ELISA方法檢測(cè)食品中氯霉素殘留的可行性。采用氨基化氯霉素直接包被在經(jīng)戊二醛活化后的酶標(biāo)板表面，并通過(guò)生物素-鏈霉親和素放大系統(tǒng)進(jìn)一步提高該檢測(cè)方法的靈敏度。結(jié)果表明，氨基化小分子半抗原
食品研究與開(kāi)發(fā) 2014年18期2014-03-21
- 真菌毒素人工抗原制備方法研究進(jìn)展
礎(chǔ)。真菌毒素；半抗原；人工抗原；制備真菌毒素（mycotoxin）是由真菌（青霉屬、曲霉屬和鐮孢屬等）產(chǎn)生的具有毒性的次生代謝產(chǎn)物[1-2]，通過(guò)直接污染農(nóng)產(chǎn)品和食品、飼料，間接污染動(dòng)物產(chǎn)品（乳、肉、蛋）等方式進(jìn)入食物鏈，威脅人類健康安全。目前對(duì)農(nóng)產(chǎn)品和食品污染和危害 較大、檢出率較高的真菌毒素主要包括黃曲霉毒素（aflatoxin，AF）[4-5]、赭曲霉毒素A（ochratoxin A，OTA）[6]、伏馬菌素（fumonisins）[7]、玉米赤霉烯
食品科學(xué) 2014年5期2014-01-19
- 呋喃唑酮代謝物人工抗原的合成及抗體的制備
代謝物結(jié)構(gòu)得到半抗原，采用N－羥基琥珀酰亞胺活化酯法制備了人工抗原，抗AOZ特異性抗體的制備為免疫檢測(cè)方法的建立與優(yōu)化奠定了基礎(chǔ)。1 材料與方法1．1 材料及主要儀器 AOZ，華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室合成;對(duì)醛基苯甲酸、鈀碳、1－乙基3－(3－二甲胺丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、N－羥基琥珀酸亞胺(NHS)，阿拉丁試劑公司;牛血清白蛋白(BSA)、雞卵清白蛋白(OVA)，上海金穗生物科技有限公司;羊抗兔IgG－HRP、弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑，
中國(guó)獸藥雜志 2013年6期2013-10-09
- 酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)除草劑異丙甲草胺
草劑作為小分子半抗原物質(zhì)，不具有免疫原性，需要化學(xué)衍生或重頭合成合適的半抗原，然后還需化學(xué)偶聯(lián)制備出人工抗原才能免疫動(dòng)物，除草劑抗體的制備過(guò)程較大分子全抗原物質(zhì)的抗體制備步驟更為繁復(fù)，其中半抗原的設(shè)計(jì)、合成及人工全抗原的制備成為影響除草劑抗體制備、免疫分析方法建立的關(guān)鍵。Schlaeppi等[8]采用重頭合成法，經(jīng)過(guò)六步化學(xué)反應(yīng)，獲得苯環(huán)上帶一個(gè)羧基的異丙甲草胺半抗原，盡管制備出了抗體，但半抗原合成步驟過(guò)于復(fù)雜，對(duì)生物分析工作者難度較大，不易實(shí)施；Feng
食品科學(xué) 2013年10期2013-08-07
- 萊克多巴胺人工抗原的合成與鑒定
團(tuán)的萊克多巴胺半抗原，經(jīng)碳二亞胺法與載體BSA蛋白偶聯(lián)制備萊克多巴胺人工抗原，采用紫外光譜掃描法、蛋白質(zhì)電泳法和膠體金免疫層析法檢測(cè)偶聯(lián)物。萊克多巴胺半抗原的結(jié)構(gòu)經(jīng)氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀確證。結(jié)果表明：萊克多巴胺人工合成抗原連接成功，與抗萊克多巴胺抗體有特異性反應(yīng)，具有抗原性。該方法合成的萊克多巴胺人工抗原結(jié)構(gòu)未見(jiàn)報(bào)道、穩(wěn)定性優(yōu)越，可作為萊克多巴胺免疫檢測(cè)方法中包被抗原用于萊克多巴胺檢測(cè)，也可作為免疫源性抗原用于制備抗萊克多巴胺抗體。萊克多巴胺；半抗原；人工抗原；
食品科學(xué) 2013年18期2013-03-06
- 百草枯半抗原分子設(shè)計(jì)合成及表征
7 Da，屬于半抗原，只具有反應(yīng)原性，而無(wú)免疫原性。由于百草枯自身沒(méi)有可供偶聯(lián)的活性官能團(tuán)（如氨基、羧基等），因此，必須對(duì)百草枯分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，使其具有活性基團(tuán)——羧基，然后與大分子載體蛋白質(zhì)交聯(lián)，才能刺激動(dòng)物產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。由于百草枯分子結(jié)構(gòu)中，聯(lián)吡啶環(huán)上兩氮原子均連有甲基，不易直接連入帶有一段碳連的羧基。為此，作者選取百草枯的結(jié)構(gòu)類似物—4，4’-聯(lián)吡啶，通過(guò)控制反應(yīng)先在其一側(cè)氮原子上加入甲基，然后再在另一氮原子上連入帶有一段碳連的羧基，即為百草
食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào) 2013年5期2013-02-19
- 呋喃西林代謝物多克隆抗體制備及酶聯(lián)免疫吸附分析方法
設(shè)計(jì)合成的系列半抗原與牛血清白蛋白（BSA）偶聯(lián)制備免疫原并免疫新西蘭大白兔，篩選獲得源于新穎半抗原H3的具有高親和力、高特異性抗SEM多克隆抗體。同時(shí)，基于設(shè)計(jì)合成的系列同/異源包被抗原，考察了不同結(jié)構(gòu)包被原對(duì)ELISA靈敏度的影響，發(fā)現(xiàn)H4-OVA作為異源包被原建立SEM的ELISA檢測(cè)方法可獲得最佳的檢測(cè)效果，結(jié)果顯示：ELISA方法的半抑制濃度（IC50）為12.37ng/mL；定量檢測(cè)線性范圍（IC20～I(xiàn)C80）為0.439～110.78ng/
食品工業(yè)科技 2012年5期2012-11-15
- 兔抗MyosinⅩ多克隆抗體的制備及初步應(yīng)用
；多克隆抗體；半抗原1 材料與方法1．1 動(dòng)物新西蘭大白兔，由北京華阜康動(dòng)物中心提供，雌性，體重約2k g．1．2 M y oⅩ分子N端多肽抗原的合成參考H i r o s h i T o k u o和M i t s u o I k e b e的報(bào)道［10］，根據(jù)M y oⅩN端1000～1021氨基酸序列設(shè)計(jì)并合成多肽作為半抗原，多肽序列為N′－D D D D A F K D S P N P S HE GH S D QR T S－C′．免疫用抗原為C端交
東北師大學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版） 2012年1期2012-09-08
- 格列本脲人工抗原的合成與鑒定
基苯甲酸法制備半抗原，將半抗原分別與牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)通過(guò)碳二亞胺法偶聯(lián)制備免疫原(Gli-BSA)和包被原(Gli-OVA)，利用紫外掃描進(jìn)行抗原的化學(xué)鑒定，通過(guò)免疫原免疫Balb/c小鼠，間接酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定抗血清進(jìn)行生物鑒定。結(jié)果：制備了Gli-BSA、Gli-OVA的人工抗原，經(jīng)紫外光譜掃描，偶聯(lián)比分別為4:1和17.7:1。免疫小鼠后獲得抗血清的效價(jià)均達(dá)到32000以上，半抑制質(zhì)量濃度為10μg/mL。結(jié)論：成功合成了格
食品科學(xué) 2012年1期2012-04-01
- 對(duì)甲基苯甲酸連接的氯霉素全抗原合成與鑒定
-對(duì)甲基苯甲酸半抗原(CAP-MBAⅠ、CAP-MBAⅡ)，再與牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)制備全抗原;通過(guò)紫外、熒光光譜掃描定性鑒定合成成功;bradford法結(jié)合TNBS法定量計(jì)算出全抗原表面半抗原密度(HD)。再將CAP-MBAⅡ與卵清蛋白(OVA)合成包被抗原(CAP-MBAⅡ-OVA)，間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA計(jì)算其抑制率。研究結(jié)果表明，半抗原全抗原偶聯(lián)效率優(yōu)于CAPMBAⅠ，MCB與CAP反應(yīng)合成的半抗原CAP-MBAⅡ更適合蛋白偶聯(lián)。采用CAP-MB
食品工業(yè)科技 2011年3期2011-11-06
- 兩種特異性氰戊菊酯人工抗原的合成與鑒定
，成功合成兩種半抗原Fen1和Fen2，并與牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)偶聯(lián)合成了兩種氰戊菊酯免疫特異性人工抗原Fen1-BSA、Fen2-BSA，經(jīng)紫外分光光度儀掃描，人工抗原的紫外圖譜相對(duì)于半抗原和載體蛋白有明顯差異，測(cè)得偶聯(lián)比分別約為9:1和10:1，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測(cè)表明偶聯(lián)成功。氰戊菊酯；半抗原；人工抗原；合成氰戊菊酯(fenvalerate，F(xiàn)en)是擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥的一種，也是目前使用最普遍、蔬菜農(nóng)藥
食品科學(xué) 2011年7期2011-10-27
- 新煙堿殺蟲(chóng)劑噻蟲(chóng)嗪免疫學(xué)特性研究
,TMX）人工半抗原,采用碳二亞胺法（EDC）將該抗原與牛血清蛋白和卵清蛋白偶聯(lián)成功制備了分子結(jié)合比合理的免疫抗原（TMX-BSA）和包被抗原（TMX-OVA）.對(duì)經(jīng)TMX-BSA免疫的6周齡Balb/c實(shí)驗(yàn)鼠的免疫抗血清進(jìn)行了間接ELISA和阻斷ELISA,初步明確了抗噻蟲(chóng)嗪多克隆抗體（TMX-pAb）的免疫學(xué)特性,為噻蟲(chóng)嗪殘留免疫學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)開(kāi)發(fā)和檢測(cè)產(chǎn)品研制奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ).噻蟲(chóng)嗪；單克隆抗體；殘留；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法噻蟲(chóng)嗪（thiamethoxam
- 孔雀石綠抗原的合成及多克隆抗體的制備
羧基的孔雀石綠半抗原(CMG)，并用液-質(zhì)聯(lián)用法進(jìn)行分析鑒定。半抗原經(jīng)重氮化法處理后分別偶聯(lián)兩種載體蛋白BSA和OVA，并通過(guò)紫外分光光度法進(jìn)行鑒定。與CMG標(biāo)準(zhǔn)品和兩種載體蛋白的紫外吸收光譜相比，偶聯(lián)物的吸收峰發(fā)生了明顯的偏移，計(jì)算得免疫原的偶聯(lián)比為10.6:1，說(shuō)明偶聯(lián)成功。通過(guò)免疫制備多克隆抗體，并通過(guò)間接ELISA法對(duì)CMG抗血清的效價(jià)進(jìn)行檢測(cè)，并進(jìn)一步檢測(cè)抗體的特異性，兩只兔子的IC50值分別為8.1ng/mL和4.6ng/mL?？兹甘G；抗原；
食品科學(xué) 2011年7期2011-04-01
- 中藥有效成分半抗原抗體制備技術(shù)的研究進(jìn)展
免疫原性，屬于半抗原。由于分子量太小，半抗原結(jié)構(gòu)中含有較少的抗原表位，不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，故必須和特定的高分子量的蛋白類或多肽結(jié)合，形成半抗原-載體復(fù)合物(完全抗原)，經(jīng)動(dòng)物免疫程序才能制備針對(duì)半抗原的特異性抗體。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外科研人員在中藥有效成分半抗原的抗體制備這一領(lǐng)域做了大量的探索和研究，并開(kāi)始將中藥有效成分半抗原抗體應(yīng)用到中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域。本文主要對(duì)近年來(lái)中藥有效成分半抗原的抗體制備過(guò)程中的研究情況作一綜述。1 中藥半抗原的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)中藥有效成分半抗
中成藥 2011年6期2011-02-12
- 大黃素-BSA不同表位構(gòu)型的免疫原性和特異性研究
散法;大黃素;半抗原-載體偶聯(lián)法;表位制備抗中藥成分抗體,運(yùn)用抗原抗體檢測(cè)技術(shù)定性或定量測(cè)定中藥成分,對(duì)于鑒定中藥材品質(zhì)和控制中藥制劑質(zhì)量,具有廣闊的應(yīng)用前景。中藥的有效或標(biāo)志性成分,多數(shù)是小分子半抗原,須與大分子載體偶聯(lián)成半抗原-載體復(fù)合物,才具免疫原性,方能制備抗體。在制備半抗原-載體復(fù)合物時(shí),選擇中藥小分子成分（半抗原）與蛋白載體連接的偶聯(lián)方法,決定著半抗原的表位構(gòu)型,直接影響著其免疫原性和特異性。大黃素為蒽醌類化合物,是蓼科中藥材中常見(jiàn)的有效成分和
中國(guó)免疫學(xué)雜志 2011年5期2011-02-06
- 百菌清人工抗原的制備與鑒定
菌清的衍生物(半抗原)；采用活化酯法與混合酸酐法分別將半抗原與載體蛋白(牛血清蛋白、卵清蛋白)進(jìn)行偶聯(lián)，制備百菌清的人工抗原，同時(shí)通過(guò)免疫新西蘭大白兔獲得抗血清，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定其效價(jià)。利用紅外光譜(IR)、質(zhì)譜(MS)、核磁共振波譜(NMR)對(duì)百菌清半抗原進(jìn)行表征，并用紫外掃描的方法對(duì)人工抗原進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，成功制備出百菌清半抗原及人工抗原，并且半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)比分別為27.86:1和12.32:1，抗血清效價(jià)約為1:1.28
食品科學(xué) 2010年13期2010-10-27
- 兩種方法制備氟苯尼考人工抗原及其鑒定
法制備兩種人工半抗原(HP1和HP2)。將兩種半抗原與牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)通過(guò)活潑酯法和戊二醛法進(jìn)行偶聯(lián)，制備人工免疫原和人工包被原，分別命名為HP1-BSA、HP1-OVA、HP2-BSA和HP2-OVA。分別將兩種方法合成的人工免疫原用于動(dòng)物免疫，用兩種人工包被原對(duì)獲得的兩種抗血清進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果：經(jīng)質(zhì)譜、紫外光譜表征，氟苯尼考兩種半抗原均合成成功，并且與載體蛋白的偶聯(lián)比分別為12.4:1(HP1-BSA)、8.5:1(HP1-O
食品科學(xué) 2010年15期2010-09-13
- T-2毒素人工抗原的制備
有羥基的小分子半抗原，其本身不具有免疫原性，不能像細(xì)菌等天然抗原一樣可單獨(dú)用于動(dòng)物免疫，刺激其產(chǎn)生特異性抗體。因此，獲得T-2抗體的關(guān)鍵是將T-2半抗原與蛋白質(zhì)大分子偶聯(lián)，轉(zhuǎn)變成 T-2完全抗原。本實(shí)驗(yàn)采用琥珀酸酐法制備T-2毒素抗原，即T-2BSA和T-2OVA，預(yù)備用來(lái)免疫動(dòng)物以獲得 T-2抗體。通過(guò)紫外和SDS聚丙烯酰胺電泳分析確定人工抗原的分子量。由于半抗原抗體的特異性不僅取決于半抗原整個(gè)分子或部分結(jié)構(gòu)的性質(zhì)，還與其人工抗原中載體上連接的半抗原數(shù)目
化學(xué)與生物工程 2010年9期2010-06-05
- 半抗原免疫分析在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用
723000)半抗原免疫分析在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用張小鶯1，趙津子1，陳 琛2，韓水仲1，田澤華1(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2.陜西理工學(xué)院 陜西省資源生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 漢中 723000)綜述近幾年來(lái)關(guān)于小分子半抗原的設(shè)計(jì)、人工抗原合成的研究，以及人工抗原合成中尚存在的問(wèn)題和計(jì)算機(jī)模擬技術(shù)在半抗原合成中的應(yīng)用；介紹多克隆抗體、單克隆抗體、卵黃抗體及基因工程抗體在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用，分析近年來(lái)ELISA、膠體金免疫層
食品科學(xué) 2010年17期2010-03-23