魏若堯，趙作濤，陳天成，刁　穎，李　摯，高　虹，孫勁旅

(中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 醫(yī)學實驗動物研究所，北京協(xié)和醫(yī)學院比較醫(yī)學中心， 北京 100021)

ChinJAllergyClinImmunol，2016，10(3)：255- 263

變應性接觸性皮炎(allergic contact dermatitis，ACD)是由半抗原-特應性T細胞介導、于過敏原接觸皮膚后激發(fā)產(chǎn)生的遲發(fā)型超敏反應(Ⅳ型超敏反應)，以抗原刺激后局部皮膚出現(xiàn)一系列的皮膚炎癥細胞浸潤、炎癥介質(zhì)釋放為主要特征[1]。ACD是目前世界上職業(yè)性皮膚病的最大難題之一，據(jù)統(tǒng)計約占職業(yè)性疾病發(fā)病率的20%[2]，這種職業(yè)性的接觸性過敏不僅存在于產(chǎn)業(yè)工人中，也常見于醫(yī)護人員、銀行職員中[3]，在中國ACD的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢[4]。目前，關(guān)于ACD的分子機制和細胞通路研究多基于動物模型的接觸性超敏反應(contact hypersen-sitivity，CHS)，并已有許多文獻報道，也為找到ACD有效的治療手段奠定基礎(chǔ)。本文將近年來關(guān)于CHS的研究中，參與致敏階段與激發(fā)階段反應的細胞及分子進行綜述(圖1)。

致敏階段

半抗原

CHS是從皮膚與半抗原的第一次接觸開始的。半抗原是一種小分子量(相對分子質(zhì)量<1 000)的化合物，常用于動物模型的半抗原有二硝基氟苯(dinitrofluoroben-zene，DNFB)、惡唑酮、異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)和硝基氯代苯(Trinitrochloro-benzene，TNCB)等。幾乎所有的半抗原都是親電子分子，因其小體積和親脂性的特點，可以滲入皮膚并與皮膚蛋白的親核殘基共價結(jié)合。半抗原的共同特點為：自身不具有免疫原性，但通過與蛋白質(zhì)結(jié)合從而獲得免疫原性[5]。除此之外半抗原還具有促炎癥特點，即可活化皮膚的固有免疫反應，調(diào)節(jié)朗格漢斯細胞(Langerhans cells，LCs)和真皮內(nèi)樹突狀細胞(dermal dendritic cells，dDCs)的募集，遷移和成熟[6- 7]。

抗原提呈細胞

皮膚在穩(wěn)態(tài)時，至少有三種亞型的樹突狀細胞(dendritic cells，DCs)存在：LCs、CD103+dDCs、CD103-dDCs[8- 10]。LCs主要存在于表皮中，并且是皮膚中數(shù)量最多的DCs。CD103-dDCs約占dDCs的80%，CD103+dDCs約占10%[8- 10]。

LCs 長久以來一直被認為是在CHS致敏階段起關(guān)鍵作用的抗原呈遞細胞，并誘導1型輔助性T細胞(Th1細胞)/1型細胞毒性T細胞(Tc1細胞)產(chǎn)生。

圖1CHS參與細胞與分步反應示意圖

Fig1Illustration of the sensitization and elicitation phase of CHS

CHS：接觸性超敏反應

原因在于：(1)LCs在體外具有有效的抗原提呈能力；(2)LCs在表皮中為含量最多的DCs；(3)通過人工使用藥物移除皮膚中的LCs后，CHS反應減輕[11]。但最近有研究表明，在致敏階段消除LCs不會對CHS反應造成影響。反而，在致敏階段消除CD103+dDCs則會顯著地減輕CHS反應[8,12- 13]?，F(xiàn)在通常認為CD103+dDCs是在致敏階段最為重要的DCs亞型。但是CD103+dDCs也許對于致敏并非必不可少。有研究證明，缺失CD103+dDCs的Batf-/-小鼠，也可以表現(xiàn)出CHS反應[14]。因此，盡管現(xiàn)在 CD103+dDCs被認為是調(diào)節(jié)CHS致敏階段的關(guān)鍵性細胞，但最近的研究數(shù)據(jù)說明也許所有的DCs都具有調(diào)節(jié)致敏的能力。除了LCs和dDCs，角質(zhì)細胞(Keratinocytes，KCs)、肥大細胞和巨噬細胞也許也有抗原提呈的作用[15]。

肥大血細胞活化

最初，肥大細胞在CHS中的作用是有爭議的。在一些研究中，肥大細胞缺失的小鼠在TNCB引起的CHS中表現(xiàn)出炎癥反應減輕[16- 17]。另外一些研究則導致炎癥表現(xiàn)惡化[18]。但在這些研究中，都使用C57BL/6-KitW-sh/W-sh或者WBB6F1-Kitw/w-v小鼠模型。這些小鼠不僅表現(xiàn)為肥大細胞缺失，同時也有著許多其他的免疫改變。使其影響肥大細胞在CHS中的作用的研究。

2011年，兩個課題組建立了一種新型的肥大細胞缺失小鼠模型[19- 20]。其肥大細胞可以通過白喉毒素的調(diào)節(jié)有條件的缺失。通過實驗，肥大細胞缺失組小鼠均表現(xiàn)為CHS反應減輕[20]。同時，肥大細胞細胞膜上的腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)可以通過細胞間黏附分子- 1(intercellular cell adhesion molecule- 1，ICAM- 1)刺激DCs。而活化的DCs則反過來增加肥大細胞的Ca2+的攝入。即肥大細胞可以和DCs相互活化。因此當肥大細胞缺失時，在CHS致敏階段，皮膚中DCs的遷移和T細胞的活化都發(fā)生了削弱從而造成CHS反應減弱。在激發(fā)階段時，由于肥大細胞缺失，組胺分泌量減少從而血管通透性降低也會造成CHS反應減弱[19]。

T細胞活化

T細胞的活化依賴三種信號：(1)第一種信號是T細胞受體(T cell receptor，TCR)和主要組織相容性復合體(major histocompatibility complex，MHC)/肽復合體之間的相互作用。半抗原的物理特點造成抗原提呈細胞(antigen presenting cells，APCs)對它的處理和提呈通路的不同。一種為半抗原和胞外的細胞表面蛋白結(jié)并發(fā)內(nèi)化至胞內(nèi)，然后被內(nèi)含體/溶酶體處理為肽段并提呈給Ⅱ型MHC分子，活化CD4+T細胞。半抗原結(jié)合的胞外的細胞表面蛋白也會交叉提呈給CD8+T細胞。另一種是因為大多數(shù)半抗原具有脂溶性，可以通過被動擴散進入細胞然后與胞內(nèi)蛋白結(jié)合。通過內(nèi)生途徑的處理，與Ⅰ型MHC分子結(jié)并發(fā)提呈給 CD8+T細胞[21]。(2)第二種信號是APCs上的共刺激分子：CD80 和CD86，它們是在T細胞上表達的CD28分子的配體[22]。這個通路對CHS反應來說是必不可少的，有研究顯示CD28缺失的小鼠幾乎不表現(xiàn)出任何的CHS反應[23]。在CHS反應中CD86的作用比CD80的作用更加重要，這與CD86在LCs 上的表達量更高有關(guān)[22, 24]。(3)第三種信號是促使T細胞分化成為不同亞型的效應細胞的關(guān)鍵。CD4+T細胞的分化主要取決于在APCs和T細胞相互作用時分泌的細胞因子的類型。白細胞介素(interleukin，IL)- 12和γ干擾素(interferon-γ，IFN-γ)存在時，CD4+T細胞分化成為Th1細胞，釋放IL- 2和IFN-γ; 在IL- 4作用下，CD4+T細胞分化為2型輔助性T細胞(Th2細胞)，分泌IL- 4、IL- 5和IL- 13[25]。CD8+T細胞分化成為Tc1和2型細胞毒性T細胞(Tc2細胞)所需要的細胞活素與CD4+T細胞相同[26]，并合成相同類型的細胞活素(Tc1分泌IL- 2、IFN-γ和TNF-α，Tc2分泌IL- 4、IL- 5和IL- 10)。

在活化之后，T細胞通過淋巴輸出管遷移出淋巴結(jié)，進入循環(huán)。生成兩種亞型的記憶T細胞。效應記憶T細胞(Tem)，不表達趨化因子受體CCR7，可以快速進入炎癥器官進行作用。而儲存記憶T細胞(Tcm)表達CCR7，具有從血液中再循環(huán)至引流淋巴結(jié)(draining lymph nodes，dLNs)的能力。當再次暴露于半抗原時可以快速地增殖?？乖禺愋訲細胞從dLNs遷移出標志著致敏過程的結(jié)束(圖2)。

與皮膚免疫相關(guān)的CD4輔助T細胞(Th細胞)和CD8細胞毒性T細胞(Tc細胞)可以再細分為三個亞型：Th1/Tc1、Th2/Tc2和Th17/Tc17。Th1/Tc1細胞的特點在于分泌IFN-γ，Th2/Tc2細胞分泌IL- 4、IL- 5和IL- 13，同時Th17/Tc17分泌IL- 17A和IL- 22[27]。每種半抗原會具有不同的特點，所以誘導產(chǎn)生的占主導地位的Th/Tc亞型也是不同的，不同的實驗鼠品系也會造成不同的結(jié)果。我們在解釋每種T細胞在接觸性皮炎中的作用時，也應該考慮這一點。常用的可以引起接觸性皮炎的半抗原包括TNCB、DNFB和FITC。其中TNCB、DNFB通常被認為促進Th1細胞的激活和IFN-γ的釋放；FITC則因為鄰二苯基的輔助作用促進Th2細胞的激活和IL- 4的釋放[28]。

圖2T細胞活化示意圖

Fig2Activation of the T cell by contact allergens

IL- 17 被報道在致敏階段和激發(fā)階段都起到了作用[29- 30]。IL- 17也由其他細胞如γδT 細胞和中性粒細胞產(chǎn)生。實驗數(shù)據(jù)證明，在接觸性皮炎的激發(fā)期，各T細胞亞型的相對重要性取決于實驗所使用的模型。與接觸性皮炎致敏期和激發(fā)期抗原特異性T細胞出現(xiàn)并激活相關(guān)的因素可能包括抗原第一次呈遞時的微環(huán)境(皮膚或其他身體部位；正常皮膚或炎癥皮膚)，抗原的類型以及個體的基因背景。模型動物對于動物房設(shè)施內(nèi)存在的微生物所產(chǎn)生的反復的免疫反應，在一定條件下也會影響到T細胞的類型。

激發(fā)過程

固有免疫細胞的活化

在激發(fā)的起始階段，中性粒細胞對皮膚的浸潤是效應T細胞浸潤的前提[17, 31- 32]。效應T細胞在炎癥皮膚中的募集和停留只部分地依賴于抗原特異性[33]。因此效應Th1/Tc1細胞可以隨著半抗原引起的炎癥浸潤至皮膚。當半抗原的濃度無法引起這個非抗原特異性的炎癥時，CHS反應不會發(fā)生[7]。半抗原引起皮膚炎癥包括直接的細胞接觸和間接的活化Toll樣受體(Toll-like receptor，TLRs)和NOD樣受體(NOD-like receptors，NLRs)。捕獲抗原的皮膚DCs激活效應T細胞，并使之產(chǎn)生細胞因子。細胞因子激發(fā)抗原特異性炎癥。近來有報道稱固有免疫系統(tǒng)中的TLRs和NLRs激活是引起半抗原炎癥的重要機制[5, 34- 35]。半抗原與細胞接觸引起損傷，致使活性氧類(reactive oxygen species，ROS)生成[36- 37]。ROS降解細胞外基質(zhì)(如透明質(zhì)酸)，形成低分子量透明質(zhì)酸[5]。這樣的低分子量透明質(zhì)酸刺激周邊細胞，如DCs、KCs和肥大細胞上表達的 TLR2和TLR4[38- 40]，最終引起核素-κB(nuclear factor-kappaB，NF-κB)和蛋白酶分裂原(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)活化，并引起多種促炎細胞因子和趨化因子釋放。這些細胞活素和趨化因子驅(qū)使DCs遷移至dLNs并引導炎性細胞浸潤至皮膚。半抗原同時引起三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)的釋放。ATP刺激嘌呤能受體P2X7，此受體觸發(fā)NOD的亮氨酸富集區(qū)域受體(leucine rich repeat，LRR)和pyrin 區(qū)域(NLR family pyrin domain containing3，NLRP3)，激活KCs中的NLRP3。KCs釋放IL- 1β和IL- 18，這兩種IL也可以造成皮膚炎癥[41- 42]。半抗原也會引起肥大細胞釋放組胺，增加血管通透性?？傮w來說，半抗原引起固有免疫細胞活化，啟動了中性粒細胞浸潤，然后引起效應T細胞在皮膚中募集(圖3)。

圖3固有免疫細胞活化過程示意圖[43]

Fig3Activation of the innate immune system by contact allergens[43]

白細胞簇狀結(jié)構(gòu)形成

在抗原引起的抗原非特異性炎癥之后，白細胞簇狀結(jié)構(gòu)形成是皮膚中效應T細胞的活化和T細胞調(diào)節(jié)的抗原特異性炎癥形成的必要的一環(huán)。T細胞浸潤進入皮膚，和攜帶抗原的DCs形成穩(wěn)定的相互作用并釋放細胞因子[44]。DCs在效應T細胞的活化過程中起到重要的作用[45]。由活化的T細胞產(chǎn)生的細胞因子刺激皮膚中固有細胞，然后進一步引發(fā)T細胞的募集和增殖。最近的研究發(fā)現(xiàn)皮膚中的白細胞在抗原刺激后形成簇狀結(jié)構(gòu)，這個結(jié)構(gòu)對高效地活化皮膚中的效應T細胞十分重要[45]。在皮膚處于正常狀態(tài)時，皮膚中的DCs是在皮膚中隨機分布，積極運動的。但是，在接觸半抗原后，DCs在毛細小靜脈周圍形成簇狀結(jié)構(gòu)，效應T細胞也在其四周積累成為簇狀結(jié)構(gòu)。若巨噬細胞缺失，則DCs的簇狀結(jié)構(gòu)完全無法形成，同時也伴隨著在皮膚中效應T細胞活化的削弱，阻斷IL- 1或趨化因子2(C-X-C motif chemokine 2，CXCL2)削弱了白細胞簇狀結(jié)構(gòu)的形成和效應T細胞的活化。KCs是IL- 1的主要生產(chǎn)者。在兩種亞型的巨噬細胞中，經(jīng)典激活的M1型和選擇激活的M2型巨噬細胞，M2型具有顯著較高水平的IL- 1受體表達，IL- 1作用于M2型巨噬細胞后，釋放CXCL2[45]。這個結(jié)果表明，白細胞簇狀結(jié)構(gòu)對于皮膚中效應T細胞的活化是必不可少的，IL- 1、CXCL2通過M2型巨噬細胞調(diào)節(jié)簇狀結(jié)構(gòu)形成[45]。

B細胞、自然殺傷T細胞和自然殺傷細胞的活化

最近的研究證實B細胞在CHS中的重要意義，特別是對其亞型B- 1細胞的研究較為詳細。有研究表明T細胞在早期補體活化的時候募集并且產(chǎn)生C5a補體片段，C5a受體敲除小鼠在激發(fā)2 h和24 h之后，均表現(xiàn)出耳腫脹反應的減輕。說明C5a在CHS的激發(fā)階段中起作用。在致敏后的1 h之內(nèi)，B- 1細胞被激活，并遷移至脾和淋巴結(jié)，產(chǎn)生半抗原特異性的lgM抗體[46]。這些抗體與半抗原結(jié)合為免疫復合體從而活化補體。這種補體片段大量生成并合成C5a，然后發(fā)起效應T細胞的募集并促成小鼠在24 h后皮膚的反應[47]。體現(xiàn)了在此過程中的B細胞的作用。

盡管 B- 1 細胞的激活不依賴于T細胞，但受到自然殺傷(natural killer，NK)T細胞調(diào)節(jié)。NKT細胞的對B- 1細胞的激活作用主要依靠在致敏過程中由皮膚釋放的胞內(nèi)脂質(zhì)。這種脂質(zhì)和肝臟的APCs結(jié)合引起肝臟的NKT細胞釋放IL- 4。半抗原蛋白質(zhì)復合體從致敏部位和IL- 4一同釋放，共同活化B- 1細胞[48]。與野生型小鼠相比，B細胞缺失小鼠CHS反應減弱[47]。綜上所述，B細胞在CHS反應中確實起到了一定作用。

長期以來NK細胞被認為是固有免疫系統(tǒng)的細胞。但是，最近許多研究顯示其有一些亞型具有記憶性。這種特征使NK細胞也成為適應性免疫系統(tǒng)的一部分。有實驗利用T細胞和B細胞缺失的小鼠模型，發(fā)現(xiàn)NK細胞展現(xiàn)出了對半抗原的抗原特異性免疫記憶。通過進一步研究，發(fā)現(xiàn)這種記憶性反應由肝臟NK細胞調(diào)控[49- 50]。NK細胞在未來將會在CHS和其他類型的炎癥反應中得到更徹底的研究。

調(diào)節(jié)性T細胞和B細胞

對于接觸性皮炎中調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells，Tregs)的調(diào)節(jié)機制的研究逐漸增多，在激發(fā)期之前，外源轉(zhuǎn)移Tregs，會抑制耳腫脹反應。對于這種抑制反應，目前提出的機制有以下幾種：(1)Tregs分泌的IL- 10通過下調(diào)血管內(nèi)皮細胞中的E/P選擇蛋白的表達，抑制了白細胞進入皮膚[51]。(2)通過腺苷調(diào)節(jié)機制，Tregs通過大量表達的CD39/73降解ATP，形成腺苷。腺苷抑制白細胞活性，同時也可以通過下調(diào)血管內(nèi)皮細胞中的E/P調(diào)節(jié)蛋白類抑制白細胞進入皮膚[52]。但是，ATP不僅是生成腺苷的底物，同時也可以作用于Tregs上的P2X7受體，激活Tregs的免疫抑制作用[53]。在接觸性皮炎的致敏期移除Tregs同樣也可以抑制炎癥反應。淋巴結(jié)中的Tregs通過ATP激活獲得活性顯性，活化的Tregs和淋巴結(jié)中的DCs結(jié)合，造成與激活的CD8 T細胞結(jié)合的DCs減少[54]。當致敏期的Tregs被剔除之后，會造成CD4和CD8 T細胞的更高水平的表達，引起增強耳腫脹反應并延長其反應時間。說明內(nèi)源性Tregs對調(diào)控致敏也存在特有的作用[31]。在激發(fā)期Tregs被去除時，也造成了耳腫脹的增強和反應時間的延長，證明Tregs對于炎癥終止的作用[55]。在炎癥過程中，皮膚中的Tregs會顯著增加，證明Tregs對炎癥部位存在抑制作用。曾有報道稱，在正常皮膚中CCR4是對Tregs遷移至皮膚中起關(guān)鍵性作用的受體[56]。但最近有報道稱CCR4受體缺失對Tregs向皮膚遷移至炎癥激發(fā)部位并無顯著的抑制作用。因為在激發(fā)期的皮膚中CCR4缺失小鼠表現(xiàn)出相同甚至更高水平的Tregs數(shù)目[57]。在接觸性皮炎發(fā)生過程中，其他趨化因子受體(如CCR10)，可能會對CCR4的作用產(chǎn)生代償。

除了Tregs，調(diào)節(jié)性B細胞(regulatory B cells，Bregs)被認為是接觸性皮炎的過程中存在的另一種調(diào)節(jié)細胞。Bregs的標志為細胞表面的CD1bCD5+，并分泌大量IL- 10[58- 59]。有1%～2%的脾臟B220+T細胞是Bregs。CD19缺乏小鼠表現(xiàn)出炎癥反應增強，將Bregs轉(zhuǎn)移至CD19缺失小鼠體內(nèi)可以正?；装Y程度[60]。

小結(jié)與展望

ACD的炎癥反應涉及許多不同的通路和免疫機制，包括大量不同的細胞類型、細胞因子、趨化因子和受體，還涉及局部和系統(tǒng)免疫反應，并同時覆蓋了固有免疫系統(tǒng)和自身免疫系統(tǒng)。這使得CHS模型為許多機制的研究提供了合適的研究模型。許多免疫調(diào)節(jié)劑類藥物(如TNF-α抑制劑、IL- 6 拮抗劑、IL- 12抑制劑或CTLA4-Ig拮抗劑)在CHS模型中顯示了很好的效果。這些情況說明這種模型可能在抗炎前體藥物的體內(nèi)機制研究上發(fā)揮重要作用。但是，關(guān)于CHS反應還有許多未知方面需要在未來研究中進一步探索，如：半抗原如何激活固有免疫系統(tǒng)并調(diào)節(jié)信號激活APCs。此外，第二次的抗原提呈過程中，相關(guān)的定位和細胞類型也需要進一步的研究。同時，B細胞、NK細胞、NKT細胞在CHS反應中表現(xiàn)出的作用使得研究更加復雜。而且更多的細胞類型，如KCs、肥大細胞和血小板對CHS反應的重要作用以及未知的受體、通路和遞質(zhì)在未來肯定還會被不斷發(fā)現(xiàn)。

[1]Huang C, Liu W, Hu Y, et al. Updated prevalences of asthma, allergy, and airway symptoms, and a systematic review of trends over time for childhood asthma in Shanghai, China[J]. PLoS One, 2015, 10: e0121577.

[2]Peiser M, Tralau T, Heidler J, et al. Allergic contact dermatitis: epidemiology, molecular mechanisms,invitromethods and regulatory aspects. Current knowledge assembled at an international workshop at BfR, Germany[J]. Cell Mol Life Sci, 2012, 69: 763- 781.

[3]Sibbald B, Rink E. Epidemiology of seasonal and perennial rhinitis: clinical presentation and medical history[J]. Thorax, 1991, 46: 895- 901.

[4]Silverberg JI, Braunstein M, Lee-Wong M. Association between climate factors, pollen counts, and childhood hay fever prevalence in the United States[J]. J Allergy Clin Immunol, 2015, 135: 463- 469.

[5]Martin SF, Dudda JC, Bachtanian E, et al. Toll-like receptor and IL- 12 signaling control susceptibility to contact hypersensitivity[J]. J Exp Med, 2008, 205: 2151- 2162.

[6]Villén J, Rodríguez-Mias RA, Núez JI, et al. Rational dissection of binding surfaces for mimicking of discontinuous antigenic sites[J]. Chem Biol, 2006, 13: 815- 823.

[7]Grabbe S, Steinert M, Mahnke K, et al. Dissection of antigenic and irritative effects of epicutaneously applied haptens in mice. Evidence that not the antigenic component but nonspecific proinflammatory effects of haptens determine the concentration-dependent elicitation of allergic contact dermatitis[J]. J Clin Invest, 1996, 98: 1158- 1164.

[8]Bursch LS, Wang L, Igyarto B, et al. Identification of a novel population of Langerin+ dendritic cells[J]. J Exp Med, 2007, 204: 3147- 3156.

[9]Ginhoux F, Collin MP, Bogunovic M, et al. Blood-derived dermal langerin+ dendritic cells survey the skin in the steady state[J]. J Exp Med, 2007, 204: 3133- 3146.

[10] Poulin LF, Henri S, de Bovis B, et al. The dermis contains langerin+ dendritic cells that develop and function independently of epidermal Langerhans cells[J]. J Exp Med, 2007, 204: 3119- 3131.

[11] McMinn PC, Halliday GM, Muller HK. Effects of gliotoxin on Langerhans’ cell function: contact hypersensi-tivity responses and skin graft survival[J]. Immunology, 1990, 71: 46- 51.

[12] Kissenpfennig A, Henri S, Dubois B, et al. Dynamics and function of Langerhans cells in vivo: dermal dendritic cells colonize lymph node areas distinct from slower migrating Langerhans cells[J]. Immunity, 2005, 22: 643- 654.

[13] Wang L, Bursch LS, Kissenpfennig A, et al. Langerin expressing cells promote skin immune responses under defined conditions[J]. J Immunol, 2008, 180: 4722- 4727.

[14] Edelson BT, KC W, Juang R, et al. Peripheral CD103+ dendritic cells form a unified subset developmentally related to CD8alpha+ conventional dendritic cells[J]. J Exp Med, 2010, 207: 823- 836.

[15] Grabbe S, Schwarz T. Immunoregulatory mechanisms involved in elicitation of allergic contact hypersensitivity[J]. Immunol Today, 1998, 19: 37- 44.

[16] Askenase PW, Van Loveren H, Kraeuter-Kops S, et al. Defective elicitation of delayed-type hypersensitivity in W/Wv and SI/SId mast cell- deficient mice[J]. J Immunol, 1983, 131: 2687- 2694.

[17] Biedermann T, Kneilling M, Mailhammer R, et al. Mast cells control neutrophil recruitment during T cell-mediated delayed-type hypersensitivity reactions through tumor necrosis factor and macrophage inflammatory protein 2[J]. J Exp Med, 2000, 192: 1441- 1452.

[18] Mekori YA, Galli SJ. Undiminished immunologic tolerance to contact sensitivity in mast cell-deficient W/Wv and Sl/Sld mice[J]. J Immunol, 1985, 135: 879- 885.

[19] Dudeck A, Dudeck J, Scholten J, et al. Mast cells are key promoters of contact allergy that mediate the adjuvant effects of haptens[J]. Immunity, 2011, 34: 973- 984.

[20] Otsuka A, Kubo M, Honda T, et al. Requirement of interaction between mast cells and skin dendritic cells to establish contact hypersensitivity[J]. PLoS One, 2011, 6: e25538.

[21] Kalish RS, Wood JA, LaPorte A. Processing of urushiol (poison ivy) hapten by both endogenous and exogenous pathways for presentation to T cellsinvitro[J]. J Clin Invest, 1994, 93: 2039- 2047.

[22] Reiser H, Schneeberger EE. Expression and function of B7- 1 and B7- 2 in hapten-induced contact sensitivity[J]. Eur J Immunol, 1996, 26: 880- 885.

[23] Kondo S, Kooshesh F, Wang B, et al. Contribution of the CD28 molecule to allergic and irritant-induced skin reactions in CD28 -/- mice[J]. J Immunol, 1996, 157: 4822- 4829.

[24] Xu H, Heeger PS, Fairchild RL. Distinct roles for B7- 1 and B7- 2 determinants during priming of effector CD8+Tc1 and regulatory CD4+Th2 cells for contact hypersensitivity[J]. J Immunol, 1997, 159: 4217- 4226.

[25] Nguyen TH, Casale TB. Immune modulation for treatment of allergic disease[J]. Immunol Rev, 2011, 242: 258- 271.

[26] Sad S, Marcotte R, Mosmann TR. Cytokine-induced differentiation of precursor mouse CD8+T cells into cytotoxic CD8+T cells secreting Th1 or Th2 cytokines[J]. Immunity, 1995, 2: 271- 279.

[27] Weaver CT, Hatton RD, Mangan PR, et al. IL- 17 family cytokines and the expanding diversity of effector T cell lineages[J]. Annu Rev Immunol, 2007, 25: 821- 852.

[28] Larson RP, Zimmerli SC, Comeau MR, et al. Dibutyl phthalate-induced thymic stromal lymphopoietin is required for Th2 contact hypersensitivity responses[J]. J Immunol, 2010, 184: 2974- 2984.

[29] Nakae S, Komiyama Y, Nambu A, et al. Antigen-specific T cell sensitization is impaired in IL- 17-deficient mice, causing suppression of allergic cellular and humoral responses[J]. Immunity, 2002, 17: 375- 387.

[30] He D, Wu L, Kim HK, et al. IL- 17 and IFN-gamma mediate the elicitation of contact hypersensitivity responses by different mechanisms and both are required for optimal responses[J]. J Immunol, 2009, 183: 1463- 1470.

[31] Honda T, Matsuoka T, Ueta M, et al. Prostaglandin E(2)-EP(3) signaling suppresses skin inflammation in murine contact hypersensitivity[J]. J Allergy Clin Immunol, 2009, 124: 809- 818, e2.

[32] Engeman T, Gorbachev AV, Kish DD, et al. The intensity of neutrophil infiltration controls the number of antigen-primed CD8 T cells recruited into cutaneous antigen challenge sites[J]. J Leukoc Biol, 2004, 76: 941- 949.

[33] Honda T, Egen JG, L?mmermann T, et al. Tuning of antigen sensitivity by T cell receptor-dependent negative feedback controls T cell effector function in inflamed tissues[J]. Immunity, 2014, 40: 235- 247.

[34] Kaplan DH, Igyártó BZ, Gaspari AA. Early immune events in the induction of allergic contact dermatitis[J]. Nat Rev Immunol, 2012, 12: 114- 124.

[35] Martin SF, Esser PR, Weber FC, et al. Mechanisms of chemical-induced innate immunity in allergic contact dermatitis[J]. Allergy, 2011, 66: 1152- 1163.

[36] Galbiati V, Papale A, Galli CL, et al. Role of ROS and HMGB1 in contact allergen-induced IL- 18 production in human keratinocytes[J]. J Invest Dermatol, 2014, 134: 2719- 2727.

[37] Kim DH, Byamba D, Wu WH, et al. Different characteristics of reactive oxygen species production by human keratinocyte cell line cells in response to allergens and irritants[J]. Exp Dermatol, 2012, 21: 99- 103.

[38] Lebre MC, van der Aar AM, van Baarsen L, et al. Human keratinocytes express functional Toll-like receptor 3, 4, 5, and 9[J]. J Invest Dermatol, 2007, 127: 331- 341.

[39] Mempel M, Voelcker V, K?llisch G, et al. Toll-like receptor expression in human keratinocytes: nuclear factor kappaB controlled gene activation by Staphylococcus aureus is toll-like receptor 2 but not toll-like receptor 4 or platelet activating factor receptor dependent[J]. J Invest Dermatol, 2003, 121: 1389- 1396.

[40] Iwasaki A, Medzhitov R. Toll-like receptor control of the adaptive immune responses[J]. Nat Immunol, 2004, 5: 987- 995.

[41] Watanabe H, Gehrke S, Contassot E, et al. Danger signaling through the inflammasome acts as a master switch between tolerance and sensitization[J]. J Immunol, 2008, 180: 5826- 5832.

[42] Sutterwala FS, Ogura Y, Szczepanik M, et al. Critical role for NALP3/CIAS1/Cryopyrin in innate and adaptive immunity through its regulation of caspase- 1[J]. Immunity, 2006, 24: 317- 327.

[43] Honda T, Kabashima K. Novel concept of iSALT (inducible skin-associated lymphoid tissue) in the elicitation of allergic contact dermatitis[J]. Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci, 2016, 92: 20- 28.

[44] Egawa G, Honda T, Tanizaki H, et al.Invivoimaging of T-cell motility in the elicitation phase of contact hypersensitivity using two-photon microscopy[J]. J Invest Dermatol, 2011, 131: 977- 979.

[45] Natsuaki Y, Egawa G, Nakamizo S, et al. Perivascular leukocyte clusters are essential for efficient activation of effector T cells in the skin[J]. Nat Immunol, 2014, 15: 1064- 1069.

[46] Itakura A, Szczepanik M, Campos RA, et al. An hour after immunization peritoneal B- 1 cells are activated to migrate to lymphoid organs where within 1 day they produce IgM antibodies that initiate elicitation of contact sensitivity[J]. J Immunol, 2005, 175: 7170- 7178.

[47] Tsuji RF, Szczepanik M, Kawikova I, et al. B cell-dependent T cell responses: IgM antibodies are required to elicit contact sensitivity[J]. J Exp Med, 2002, 196: 1277- 1290.

[48] Campos RA, Szczepanik M, Itakura A, et al. Cutaneous immunization rapidly activates liver invariant Valpha14 NKT cells stimulating B- 1 B cells to initiate T cell recruitment for elicitation of contact sensitivity[J]. J Exp Med, 2003, 198: 1785- 1796.

[49] O’Leary JG, Goodarzi M, Drayton DL, et al. T cell- and B cell-independent adaptive immunity mediated by natural killer cells[J]. Nat Immunol, 2006, 7: 507- 516.

[50] Paust S, Gill HS, Wang BZ, et al. Critical role for the chemokine receptor CXCR6 in NK cell-mediated antigen-specific memory of haptens and viruses[J]. Nat Immunol, 2010, 11: 1127- 1135.

[51] Ring S, Sch?fer SC, Mahnke K, et al. CD4+CD25+regulatory T cells suppress contact hypersensitivity reactions by blocking influx of effector T cells into inflamed tissue[J]. Eur J Immunol, 2006, 36: 2981- 2992.

[52] Ring S, Oliver SJ, Cronstein BN, et al. CD4+CD25+regulatory T cells suppress contact hypersensitivity reactions through a CD39, adenosine-dependent mechanism[J]. J Allergy Clin Immunol, 2009, 123: 1287- 1296, e2.

[53] Ring S, Enk AH, Mahnke K. ATP activates regulatory T cellsinvivoduring contact hypersensitivity reactions[J]. J Immunol, 2010, 184: 3408- 3416.

[54] Ring S, Karakhanova S, Johnson T, et al. Gap junctions between regulatory T cells and dendritic cells prevent sensitization of CD8(+) T cells[J]. J Allergy Clin Immunol, 2010, 125: 237- 246, e1- 7.

[55] Tomura M, Honda T, Tanizaki H, et al. Activated regulatory T cells are the major T cell type emigrating from the skin during a cutaneous immune response in mice[J]. J Clin Invest, 2010, 120: 883- 893.

[56] Dudda JC, Perdue N, Bachtanian E, et al. Foxp3+regulatory T cells maintain immune homeostasis in the skin[J]. J Exp Med, 2008, 205: 1559- 1565.

[57] Lehtim?ki S, Tillander S, Puustinen A, et al. Absence of CCR4 exacerbates skin inflammation in an oxazolone-induced contact hypersensitivity model[J]. J Invest Dermatol, 2010, 130: 2743- 2751.

[58] Bouaziz JD, Yanaba K, Tedder TF. Regulatory B cells as inhibitors of immune responses and inflammation[J]. Immunol Rev, 2008, 224: 201- 214.

[59] Yanaba K, Bouaziz JD, Haas KM, et al. A regulatory B cell subset with a unique CD1dhiCD5+phenotype controls T cell-dependent inflammatory responses[J]. Immunity, 2008, 28: 639- 650.

[60] Watanabe R, Fujimoto M, Ishiura N, et al. CD19 expression in B cells is important for suppression of contact hypersensitivity[J]. Am J Pathol, 2007, 171: 560- 570.