李前勇,，張德志，曹立亭，熊仲良，吳柏青，左福元

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動醫(yī)系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市動物疫病防控中心，重慶 渝北 401120；3.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動科系，重慶 榮昌 402460）

重慶三峽庫區(qū)肉牛結(jié)核病布魯菌病的調(diào)查

李前勇1,，張德志1，曹立亭1，熊仲良2，吳柏青1，左福元3

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動醫(yī)系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市動物疫病防控中心，重慶 渝北 401120；3.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動科系，重慶 榮昌 402460）

采用牛提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)結(jié)合γ-干擾素試驗、虎紅平板凝集試驗、試管凝結(jié)試驗及ELISA法分別對重慶三峽庫區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病進行了抽樣檢測。結(jié)果顯示，該區(qū)域肉牛結(jié)核病陽性檢出率為1.2%，布魯菌病陽性檢出率為1.04%。其中，庫區(qū)東北部區(qū)縣肉牛結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，分別為1.83%、1.14%；3種肉牛養(yǎng)殖規(guī)模條件下，個體散養(yǎng)農(nóng)戶牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，分別為2.21%、2.94%；所調(diào)查的3個年齡段牛群中，19月齡以上牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率最高，分別為2.91%、4.85%。

重慶三峽庫區(qū)；肉牛；結(jié)核??；布魯菌病

牛結(jié)核病和布魯菌病是由牛結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium bovis）、布魯菌屬細菌（Genus Brucella）所引起的兩種重要人畜共患傳染病，流行較廣，在世界各地均有分布，對養(yǎng)牛業(yè)生產(chǎn)和人類健康均構(gòu)成了嚴重威脅，是世界衛(wèi)生組織（OIE）列為強制通報的疾病，我國列為B類動物疫病［1-3］。牛結(jié)核病、布魯菌病在我國養(yǎng)牛業(yè)生產(chǎn)中較易發(fā)生，每年都有相關(guān)報道，但多偏向于奶牛，而對于肉牛結(jié)核病、布魯菌病的報道卻很少。我國是世界第4大養(yǎng)牛國，牛肉年產(chǎn)量達679.5萬噸，近年來肉牛養(yǎng)殖發(fā)展勢頭較好［1］；重慶三峽庫區(qū)位于我國西南肉牛主要產(chǎn)區(qū)，可利用草資源豐富，2001年市政府實施了草食牲畜百萬工程項目，促進了該市肉牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，據(jù)報道，2010年重慶市肉牛存欄量已達140余萬頭［2］，但尚未見我市肉牛結(jié)核病、布魯菌病的調(diào)查報道。為此，我們于2012-2013年對重慶三峽庫區(qū)肉牛結(jié)核、布魯菌的感染情況進行了調(diào)查，以期為該區(qū)域肉牛結(jié)核病、布魯菌病制定科學(xué)的防制對策提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1調(diào)查牛只以重慶三峽庫區(qū)巫山、奉節(jié)、云陽、開縣、萬州、梁平、忠縣、石柱、墊江、豐都、長壽、涪陵、渝北、巴南、江津等15區(qū)縣肉牛為調(diào)查對象，按規(guī)模化牛場（存欄牛＞500頭）、肉牛養(yǎng)殖專業(yè)戶及個體散養(yǎng)農(nóng)戶3種養(yǎng)殖方式，豐都、云陽、石柱3個肉牛養(yǎng)殖優(yōu)勢區(qū)縣各選擇規(guī)模場2個、養(yǎng)殖專業(yè)戶5個、散養(yǎng)農(nóng)戶5個，其余區(qū)縣各選擇養(yǎng)殖專業(yè)戶5個、散養(yǎng)農(nóng)戶5個，按抽樣比例5%確定調(diào)查牛只，共得1 249頭牛只作為調(diào)查試驗對象。

1.2試驗試劑牛提純結(jié)核菌素（哈藥集團生物疫苗有限公司，批號：201007）；牛結(jié)核分枝桿菌γ-干擾素檢測試劑盒（瑞士進口分裝，北京測迪科技有限公司）；牛布魯菌病陽性、陰性血清（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號：201104）；虎紅平板凝集診斷抗原、試管凝集診斷抗原（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號：201110）；牛布魯菌病ELISA檢測試劑盒（美國IDEXX公司產(chǎn)品，P04130-2）。

1.3試驗方法

1.3.1結(jié)核病的檢測按照《動物結(jié)核病診斷技術(shù)（GB/T18645-2002）》，采用提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)對參試肉牛進行檢測，依據(jù)國標規(guī)定進行陽性判斷。對陽性病牛再用γ-干擾素試驗［3］進行復(fù)檢。

1.3.2布魯菌病的檢測依據(jù)《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)（GB/T 18646-2002）》，對參試肉牛先采用虎紅平板凝集試驗進行初篩，再用試管凝結(jié)試驗對初篩陽性樣本進行復(fù)檢；對凝集試驗呈現(xiàn)陽性、可疑樣本運用酶聯(lián)免疫吸附試驗［4］進行最終檢測。

2　結(jié)果

2.1重慶三峽庫區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病檢出情況1 249頭參試肉牛結(jié)核病分別采用提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)（PPD皮內(nèi)注射試驗）、γ-干擾素試驗的檢出情況，見表1。PPD皮內(nèi)注射試驗與γ-干擾素試驗檢出牛只的陽性符合率為78.95%。

表1　重慶三峽庫區(qū)肉牛結(jié)核病調(diào)查結(jié)果

參試肉牛布魯菌病分別采用血清虎紅平板試驗、試管凝集試驗及酶聯(lián)免疫吸附試驗的檢出情況，見表2。比較3種檢測方法，試管凝集試驗與虎紅平板試驗的陽性符合率為81.25%，酶聯(lián)免疫吸附試驗法與試管凝集試驗法的陽性符合率為100%。

2.2不同飼養(yǎng)規(guī)模下，肉牛結(jié)核病、布魯菌病陽性情況結(jié)果表明，不同飼養(yǎng)規(guī)模下，重慶三峽庫區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率表現(xiàn)為散養(yǎng)農(nóng)戶牛群＞專業(yè)養(yǎng)殖戶牛群＞規(guī)?；B(yǎng)殖場，見表3。

表2　重慶三峽庫區(qū)肉牛布魯菌病調(diào)查結(jié)果

表3　重慶三峽庫區(qū)三種飼養(yǎng)規(guī)模下牛結(jié)核病、布魯菌病調(diào)查結(jié)果

2.3不同年齡肉牛群結(jié)核病、布魯菌病陽性情況結(jié)果表明，重慶三峽庫區(qū)19月齡以上牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，6月齡以下犢牛群所檢兩種病的陽性率最低，其中布魯菌病陽性率為0。見表4。

表4　重慶三峽庫區(qū)不同年齡肉牛結(jié)核病、布魯菌病調(diào)查結(jié)果

2.4不同地理區(qū)域牛群結(jié)核病、布魯菌病陽性情況對重慶三峽庫區(qū)東北部（包括巫山、奉節(jié)、云陽、開縣、萬州、梁平）、庫區(qū)中部（墊江、忠縣、石柱、豐都、涪陵）及庫區(qū)西南部（有江津、渝北、巴南、長壽）肉牛結(jié)核病、布魯菌病調(diào)查結(jié)果進行比較，結(jié)果表明，庫區(qū)東北部區(qū)縣肉牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性率為最高，庫區(qū)西南部肉牛結(jié)核病未檢出，但該區(qū)域布魯菌病陽性卻高于庫區(qū)中部。見表5。

表5　重慶三峽庫區(qū)不同區(qū)域牛群結(jié)核病、布魯菌病調(diào)查結(jié)果

3　討論

據(jù)記載，牛結(jié)核病于1955年在我國牛群中的檢出率高達36.4%［5］，1952-1982年間，我國牛羊布魯菌病的血清陽性率高約41.27%［6］。以后，我國獸醫(yī)科技人員對上述兩種疾病均有較多報道。重慶三峽庫區(qū)是我國牛業(yè)生產(chǎn)的主要區(qū)域之一，進入21世紀以來，在市政府實施“草食牲畜百萬工程”項目的帶動下，庫區(qū)肉牛養(yǎng)殖業(yè)進入了快速發(fā)展時期，截止目前，該區(qū)域年存欄肉牛已達到180萬頭，但尚未見肉牛結(jié)核病、布魯菌病流行病學(xué)的報道。本試驗對重慶三峽庫區(qū)15區(qū)縣肉牛群進行了牛結(jié)核病、布魯菌病的隨機抽樣調(diào)查，結(jié)果表明，結(jié)核病的陽性檢測率為1.2%，布魯菌病的陽性檢出率為1.04%。本調(diào)查結(jié)果比新疆［7］、青海湟中地區(qū)［8］、陜西［9］等我國養(yǎng)牛業(yè)優(yōu)勢省區(qū)奶牛結(jié)核病感染率的報道略高，但卻顯著低于郭開彬［5］對四川某縣奶牛場結(jié)核病的陽性檢出率（25.57%）、程振濤等［10］對貴州省某種牛場牛結(jié)核病感染率（9.32%）和布魯菌病感染率（2.48%）的報道。我國《動物布魯菌病控制技術(shù)規(guī)范》（NY/T907-2004）及《牛結(jié)核菌病防治技術(shù)規(guī)范》（2009）規(guī)定，牛魯桿菌病省級控制標準為牛群布魯菌病的陽性率應(yīng)低于1.0%（試管凝結(jié)法）；牛結(jié)核病省級控制、凈化標準為牛群的陽性率應(yīng)低于0.05%（PPD法），由此說明，重慶三峽庫區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病的防控未達到國家規(guī)定的控制或凈化標準。

我國動物結(jié)核菌病診斷技術(shù)（GB/T 18645-2002）規(guī)定，牛結(jié)核病的檢測應(yīng)使用牛結(jié)核分支桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗進行。然而，采用牛結(jié)核分支桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗檢查牛結(jié)核病存在檢出假陽性［12］，γ-干擾素試驗法是一種新型的牛結(jié)核病診斷方法，已被OIE認定為惟一的輔助診斷試驗，該法檢測牛結(jié)核病具有特異性好、靈敏度高等優(yōu)點［11］。本試驗過程中，采用了γ-干擾素試驗法對PPD法檢出陽性牛進行再次檢測，共剔除假陽性牛4頭，PPD皮內(nèi)注射試驗與γ-干擾素試驗檢出牛只的陽性符合率為78.95%。這一結(jié)果與陳祥等［3］的報道基本一致。動物布魯菌病診斷技術(shù)（GB/T 18646-2002）規(guī)定，牛布魯菌病應(yīng)使用虎紅平板凝集結(jié)合試管凝集試驗進行檢測；但是，目前研究認為，這種方法存在特異性、敏感性不高的缺點［12］，牛布魯菌病酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測法是OIE2002年列為用于牛布魯菌病檢測的一種新方法，該法具有快速、方便、特異、敏感等特點［4］，并有逐漸代替?zhèn)鹘y(tǒng)經(jīng)典的虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗的趨勢。本研究在試驗過程中，對試管凝集試驗檢測出的陽性牛血清樣本，采用美國IDEXX公司出品的牛布魯菌病ELISA檢測試劑盒進行了再次檢測，結(jié)果該法與試管凝集試驗檢查的陽性符合率為100%，這一結(jié)果與宮曉煒等［4］的報道一致。

對重慶三峽庫區(qū)不同飼養(yǎng)規(guī)模、不同年齡、不同區(qū)域肉牛群牛結(jié)核病、布魯菌病的檢出情況進行分析，發(fā)現(xiàn)庫區(qū)肉牛結(jié)核病、布魯菌病陽性檢出率均表現(xiàn)為散養(yǎng)農(nóng)戶牛群＞專業(yè)養(yǎng)殖戶牛群＞規(guī)模化養(yǎng)殖場；19月齡以上牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率均為最高，6月齡以下犢牛群所檢兩種病的陽性率最低；庫區(qū)東北部區(qū)縣肉牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性率均為最高，庫區(qū)西南部肉牛結(jié)核病卻未檢出。造成這種現(xiàn)象的原因可能是庫區(qū)屬于高山地區(qū)，肉牛飼養(yǎng)個體農(nóng)戶分散，牛疫病防控知識傳遞不暢，開展結(jié)核病、布魯菌病檢測工作有實際困難；19月齡以上肉牛多為種牛和繁殖母牛，這些牛群經(jīng)濟價值高，即使過去表現(xiàn)檢疫陽性，也因經(jīng)濟上的原因?qū)嵭刑蕴欣щy，同時該牛群飼喂時間長，易與羊、豬等結(jié)核病、布魯菌病易感動物接觸，致使感染幾率升高；庫區(qū)東北部是重慶市的偏遠山區(qū)，信息到達不暢，養(yǎng)牛戶牛疫病防控意識淡薄，因而造成了該區(qū)域內(nèi)牛群結(jié)核病、布魯菌病的陽性檢出率最高的局面。

本結(jié)果表明，重慶三峽庫區(qū)肉牛群結(jié)核病、布魯菌病的防控均未達到國家規(guī)定的控制或凈化標準，并存在一定的疫病流行風(fēng)險。建議當?shù)貞?yīng)切實開展肉牛結(jié)核病、布魯菌病的檢疫，加大宣傳力度，搞好活畜的市場監(jiān)管，有效控制肉牛結(jié)核病、布魯菌病的蔓延。

［1］曹賓海.我國的肉牛產(chǎn)業(yè)及其發(fā)展展望［J］.飼料與畜牧，2012，5：6-7.

［2］陳紅躍，熊廷奎，左福元.重慶市肉牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀分析與對策建議［J］.中國牛業(yè)科學(xué)，2010，3：31-33.

［3］陳祥，徐正中，時振華，等.γ—干擾素試驗與皮試變態(tài)反應(yīng)對檢測奶牛結(jié)核病的比較［J］.中國人獸共患病學(xué)報，2011，27（2）：97-100.

［4］宮曉煒，邱昌慶，藺國珍，等.牛布氏桿菌間接ELISA檢測方法的建立［J］.中國獸醫(yī)科學(xué)，2010，40（6）：598-602.

［5］郭開彬.奶牛結(jié)核病流行病學(xué)的調(diào)查研究［J］.草業(yè)與畜牧，2008，12：39-44.

［6］胡森，步志高.布氏桿菌病概括及其研究進展［J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2003，12：9-11.

［7］李愛巧，趙建國，胡德江，等.烏魯木齊市奶牛結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查與防治［J］.中國動物檢疫，2012，29（10）：52-54.

［8］李?；?，梅以賽，田生花，等.青海省湟中地區(qū)奶牛布病結(jié)核病感染情況調(diào)查［J］.養(yǎng)殖與飼料，2008，8：25-26.

［9］段旭基，張鵬，王波，等.陜西關(guān)中地區(qū)奶牛結(jié)核病調(diào)查［J］.中國動物檢疫，2009，26（7）：50-52.

［10］程振濤，王開功，馮杰，等.4種牛主要傳染病的血清學(xué)調(diào)查［J］.山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報，2004，23（3）：220-223.

［11］蔣柏茂，李文平，劉從松，等.奶牛結(jié)核病實驗診斷技術(shù)研究進展［J］.中國奶牛，2009，4：38-39.

［12］Nelsen K，Smith P，Yu W L，et al.Second generation competition enzyme immunoassay for detection of bovine antibody to Brucella abortus［J］.Vet.Microbiol，2007，24（12）：173-177.

Investigation of Tuberculosis and Brucellosis in Beef Cattlefrom ThreeGorges Reservoir of Chongqing

LI Qian-yong1，ZHANG De-zhi1，CAO Li-ting1，XIONG Zhong-liang2，WU Bai-qing1，ZUO Fu-yuan3
（1.The Department of Veterinary Medicine，Southwest University Rongchang Campus，Chongqing 402460，China；2.Center for Animal Disease Control and Prevent of Chongqing，Chongqing 401120，China；3.The Department of Animal Science，Southwest University Rong-chang Campus，Chongqing 402460，China）

Detection of tuberculosis and brucellosis in beef cattle from three gorges reservoir of Chongqing was performed by methods including bovine purified tuberculin intradermal allergic combine gamma-interferon test，rose bengal precipitation test，standard tube agglutination test，and ELISA.Our results showed that the positive rate of tuberculosis was 1.2%，and brucellosis was 1.04%.The positive rates of tuberculosis and brucellosis in beef cattle from northeastern counties in the reservoir area were higher than that of libraries in Central and Southwest，which were 1.83%and 1.14%，respectively.The tuberculosis and brucellosis positive rates in individual backyard farm-raised cattles were the highest，which were 2.21%and 2.94%，respectively.The positive rate in cattle older than 19 months was also the highest，which were 2.91%and 4.85%，respectively.

Three Gorges Reservoir of Chongqing；Beef Cattle；Tuberculosis；Brucellosis

S858.23

A

0529-6005（2016）04-0003-03

2015-03-02

國家科技支撐計劃（2011BAD36B01）；重慶市科技支撐示范工程項目（jcsf121-2012-01-1）

李前勇（1966-），男，副教授，博士，研究方向為肉牛疾病防控，E-mail：qianyong_l@126.com