郭玉杰, 牛永春, 鄧 暉

(中國農業(yè)科學院農業(yè)資源與農業(yè)區(qū)劃研究所, 農業(yè)部農業(yè)微生物資源收集與保藏重點實驗室, 北京 100081)

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研究報告ResearchReports

我國北方玉米上平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌及其所致葉斑病

郭玉杰, 牛永春, 鄧 暉*

(中國農業(yè)科學院農業(yè)資源與農業(yè)區(qū)劃研究所, 農業(yè)部農業(yè)微生物資源收集與保藏重點實驗室, 北京 100081)

平臍蠕孢屬(Bipolaris)和彎孢屬(Curvularia)真菌可引起多種玉米葉斑病。為了解當前玉米生產上此類病害的發(fā)生情況,2014年8-9月對我國玉米主產區(qū)北京、河北、河南、黑龍江和吉林5省市玉米上疑似由該兩屬真菌引起的葉部病斑樣品進行了采集,隨后進行了真菌的分離和鑒定。共采集樣品42份,根據其形狀特點歸為4類:長條形、橢圓形、小點狀和梭形病斑。經組織分離獲得平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌28株,基于形態(tài)學和rDNA-ITS序列的系統(tǒng)發(fā)育分析共鑒定出5個種:玉蜀黍平臍蠕孢(B.maydis)、玉米平臍蠕孢(B.zeae)、玉米生平臍蠕孢(B.zeicola)、新月彎孢(C.lunata)和穂狀彎孢(C.spicifera)。從長條形病斑和橢圓形病斑上分離到的主要是B.maydis和B.zeicola,從小點狀病斑分離到的主要是C.lunata,其次是B.zeae。分離出C.lunata的樣品病斑較為稀疏、顏色略淺、呈蒼白色,分離出B.zeae的樣品病斑更為密集、顏色較深。從梭型病斑分離到的是C.spicifera。有少數樣品可分離到上述兩種菌。采用孢子懸浮液噴霧法對溫室玉米苗接種,上述5種真菌均可致病。以接種B.maydis發(fā)病最快,發(fā)病最重;接種B.zeicola、C.lunata或C.spicifera發(fā)病較慢,癥狀明顯;接種B.zeae發(fā)病最慢,僅引起小點狀病斑。研究結果可為玉米葉斑病的正確診斷提供資料和依據。

玉米; 葉斑病; 診斷; 平臍蠕孢; 彎孢

玉米是我國重要的糧食、飼料和經濟作物,種植面積位居禾谷類作物之首,每年播種面積在3 000萬～3 067萬hm2,在農業(yè)生產和國民經濟發(fā)展中占據重要地位[1]。平臍蠕孢屬(BipolarisShoemaker)和彎孢屬(CurvulariaBoedijn)的多種真菌都是禾本科植物上的重要病原菌,主要引起葉斑病[2-3]。在玉米上常見的有引起玉米小斑病的玉蜀黍平臍蠕孢(B.maydis)、引起玉米圓斑病的玉米生平臍蠕孢(B.zeicola)和引起玉米彎孢葉斑病的新月彎孢(C.lunata)[4-6]。

玉米小斑病和玉米圓斑病的病原菌同屬于平臍蠕孢屬,田間病害特征也有很多相似之處,有報道統(tǒng)稱為“小型葉斑病”[7],主要危害玉米葉部,也可侵染葉鞘、苞葉,玉米葉片上的病斑常較小且密集,病斑形狀大多呈橢圓型、長方形或梭形,發(fā)病嚴重時,病斑可連在一起形成大面積的壞死葉斑。另外,玉米小斑病菌不同的生理小種在各抗病品種上引起的病斑也有較大差異[8]。近年來,彎孢屬真菌引起的玉米彎孢葉斑病在我國各大玉米產區(qū)均有發(fā)生,已成為危害玉米生產的重要病害之一。玉米彎孢葉斑病主要侵染玉米葉片,病斑圓形、較小,直徑1～4 mm,呈灰白色,邊緣具有黃色暈圈,有時多個圓形病斑擴展成長方形,可長達 1 cm,形成類似于小斑病的長方形病斑,發(fā)病嚴重時病斑密布葉片,使葉片枯死[9-10]。

由于田間玉米葉片發(fā)病癥狀的復雜性和多樣性,僅通過葉斑的癥狀有時難以判斷病原菌的種類。Schoch等[11]提出以rDNA ITS作為真菌界的DNA條形碼,以利于真菌多型分類、生態(tài)學和生物多樣性的研究。近幾年國內外學者對平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌分子系統(tǒng)學的研究有了不少進展[12-14],為該兩屬真菌的準確鑒定奠定了基礎。田間植物病害的發(fā)生是動態(tài)變化的,為了解當前引起玉米葉斑病害的平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌的種類和發(fā)生情況,2014年我們對我國玉米主產區(qū)5省市進行了玉米葉斑類病害樣品的采集和分離,對分離獲得的菌株進行形態(tài)學觀察和rDNA ITS序列系統(tǒng)發(fā)育分析,本文報道了平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌的相關研究結果,為認識和鑒別玉米葉斑病害及其病原真菌種類提供參考。

1 材料與方法

1.1 病害樣品采集

2014年8-9月分別對北京、河北、河南、黑龍江、吉林5省市的玉米田葉斑病發(fā)病葉片進行采集,在采集過程中現(xiàn)場拍攝癥狀照片并記錄采集地點、日期、采集地生境和采集人姓名等樣品信息。

1.2 病原真菌的分離保藏

采用組織分離法對采集的樣品進行病原真菌的分離。從葉片發(fā)病部位的病健交界處切取0.5 cm左右見方的組織塊,浸入75%乙醇消毒30 s～1 min,無菌水沖洗3次,移至PDA平板上,每平板上均勻放4塊組織塊,每個病斑樣品分離2個平板,于25℃恒溫箱中培養(yǎng)。待菌落長出后,從組織塊菌落邊緣挑取少量菌絲,移入PDA平板上純化培養(yǎng),將純化菌株保藏備用。

1.3 病原真菌的形態(tài)學觀察

將菌株接種在PDA培養(yǎng)基上,待長滿大半個平皿后用打孔器在菌落邊緣打5 mm菌餅,將菌餅接種到水瓊脂麥稈培養(yǎng)基上,定期觀察菌株的菌落形態(tài)、顏色和生長速度。培養(yǎng)14 d左右菌落產孢后在顯微鏡下觀察分生孢子梗形態(tài)以及分生孢子在分生孢子梗上的著生狀態(tài),測量分生孢子和分生孢子梗的大小。

1.4 菌株DNA提取、PCR擴增及ITS序列測定

將菌株接種到PDA平板上,25℃培養(yǎng),待長滿平板時刮取菌絲,用混合式研磨儀(Retsch MM400)破碎菌絲后,采用KingFisher Duo磁珠純化系統(tǒng)和Fisher Scientific公司的試劑盒(LabServ_24)進行DNA提取。用引物ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)和ITS5(5′-GAAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′)對提取的DNA進行rDNA-ITS區(qū)域的PCR擴增[15],擴增產物經檢測后送北京三博遠志生物技術有限責任公司測序。

1.5 基于rDNA-ITS的系統(tǒng)發(fā)育分析

將測得的rDNA-ITS序列提交GenBank,根據相關文獻從GenBank下載參照菌株的rDNA ITS序列信息[12-14,16]。將所有的rDNA-ITS序列經軟件Clustal X進行對齊后[17],采用MEGA 6.0軟件中的neighbor-joining (NJ)法構建系統(tǒng)發(fā)育樹[18-19]。

1.6 致病性測定

每個真菌種選擇一株代表性菌株進行致病性測定。在溫室中種植玉米‘中昌158’,待長至6～7葉期用于接種。預先將純化后的菌株接種到水瓊脂麥稈培養(yǎng)基或PDA平板上,25℃條件下培養(yǎng)使菌株產孢。用含0.1%吐溫-80的無菌水將孢子從平板上洗脫,雙層紗布過濾,配制成濃度為1×105～1×106個/mL的孢子懸浮液。采用噴霧法接種,每株菌接種玉米植株6株,接種量為30 mL/株,以含0.1%吐溫-80的無菌水作對照。玉米植株接種后于30℃密閉保濕24 h,取出后置于溫室培養(yǎng)(白天33～35℃,夜間25～27℃)。每天觀察記載植株發(fā)病情況,接種14 d后取發(fā)病玉米葉片進行組織分離并對再分離的病菌進行鑒定。

2 結果與分析

2.1 玉米葉斑病害樣品的采集及整理

從5省市共采集疑似由平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌引起的葉斑病樣品42份。根據病斑特征將這42份樣品大致分成4類,其中長條形病斑17份,5省市都有;橢圓形病斑12份,采自除黑龍江外的其他4省市;小點狀病斑9份,采自北京、河北和黑龍江3省市;梭形病斑4份,采自北京、河南和吉林3省市。

2.2 平臍蠕孢屬和彎孢屬分離菌株的系統(tǒng)發(fā)育關系分析

42份葉斑病樣品有24份分離到平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌共28株,其中有4份樣品各分離到2株。分離到的28株真菌及其rDNA-ITS序列信息見表1。

表1 分離到的平臍蠕孢屬和彎孢屬菌株及其rDNA-ITS序列信息Table 1 Bipolaris and Curvularia strains and their rDNA-ITS sequence information

選取AlternariaalternataCBS916.96和DrechsleraavenaceaDAOM208989作為外群與參照菌株序列一起構建系統(tǒng)發(fā)育樹。系統(tǒng)發(fā)育樹分成平臍蠕孢屬和彎孢屬兩個大的分支,本研究分離獲得的菌株分別與5個種的模式菌株或參照菌株穩(wěn)定聚在相同分支上,支持率均大于50%(圖1)。

平臍蠕孢屬的7個菌株ACCC38959、ACCC38960、ACCC38961、ACCC38962、ACCC38963、ACCC38964、ACCC38965與B.zeicola的參照菌株 FIP532完全聚類到一個分支上且支持率為63%;2個菌株ACCC38957、ACCC38958與B.zeae的模式菌株BRIP11512在一個進化支上,支持率為54%;9個菌株ACCC38948、CCC38949、ACCC38950、ACCC38951、ACCC38952、ACCC38953、ACCC38954、ACCC38955、ACCC38956與B.maydis的模式菌株CBS13629及參照菌株CBS137271聚類到一起,支持率為87%(圖1)。

彎孢屬的4個菌株ACCC38972、ACCC38975、ACCC38976、ACCC38977與C.spicifera的模式菌株JN192387聚類到同一分支上,并且支持率為91%;6個菌株ACCC38966、ACCC38967、ACCC38968、ACCC38969、ACCC38970、ACCC38971與C.lunata的模式菌株CBS73096聚類到一起,且支持率為97%(圖1)。

圖1 平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌rDNA ITS序列構建的NJ樹Fig.1 Neighbor-joining tree of Bipolaris and Curvularia strains based on rDNA-ITS sequences

2.3 引起玉米葉斑病的平臍蠕孢屬和彎孢屬5個種的形態(tài)學鑒別

平臍蠕孢屬與彎孢屬系統(tǒng)發(fā)育關系相近,形態(tài)上有一些相似之處,但它們存在明顯區(qū)別,主要在分生孢子的大小、形態(tài)和假隔膜數這3個方面。平臍蠕孢屬真菌的分生孢子較大、長度一般在30 μm以上,直立或略有彎曲,假隔膜數目通常超過4個;彎孢屬真菌分生孢子較小,多數因中間細胞不對稱膨大產生彎曲,少數沒有膨大的中間細胞而呈直立形(圖2)。

與B.zeae和B.zeicola相比,B.maydis分生孢子顏色較淺、有明顯彎曲,分生孢子的寬度平均為15.1 μm,而B.zeae和B.zeicola分生孢子寬度均不超過14 μm,分生孢子平均寬度小于13 μm。B.zeicola和B.zeae的分生孢子顏色均較深且彎曲不明顯,其中B.zeicola分生孢子較短,平均48.3 μm×12.7 μm,中間的細胞寬于兩端,基細胞鈍圓(圖2h);B.zeae分生孢子較長,平均73.2 μm×12.9 μm,梭形或倒卵形(圖2f)。C.lunata與C.spicifera分生孢子的主要區(qū)別是,C.lunata分生孢子基部第三個細胞膨大使孢子彎曲,分生孢子頂端粗而鈍,基部細而尖(圖2j,k);C.spicifera的分生孢子正直,呈橢圓形(圖2m,n)。

圖2 平臍蠕孢屬和彎孢屬5個種的形態(tài)Fig.2 Morphology of five species of Bipolaris and Curvularia

2.4 不同葉斑類型的病原菌種類分析

經對不同玉米葉斑類型和分離到的平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌種類進行統(tǒng)計和分析,采集的17份長條形病斑樣品中有5份分離到B.maydis、4份分離到B.zeicola,其中2份樣品D14037和D14041都同時分離到了B.maydis和B.zeicola。采集的12份橢圓形病斑樣品中有4份分離到了B.maydis、3份分離到了B.zeicola和1份分離到了C.lunata,其中樣品D14032同時分離到了B.maydis和B.zeicola,樣品D14042同時分離到了B.zeicola和C.lunata。采集的9份小點狀病斑樣品中有5份分離到了C.lunata、有2份分離到了B.zeae。仔細比較分離到B.zeae和C.lunata的樣品病斑特征發(fā)現(xiàn),B.zeae引起的小點狀病斑更為密集,病斑顏色較深;C.lunata引起的病斑較為稀疏,顏色略淺,呈蒼白色(圖3)。采集的4份梭形病斑樣品全都分離到了C.spicifera(表2)。

2.5 分離菌株的致病性

接種B.maydis的植株發(fā)病較快,接種48 h后就隱約可見葉片有褪色斑點,隨著病情發(fā)展,3 d后小斑點連成片導致葉片大面積枯死。接種B.zeicola、C.lunata和C.spicifera的植株都在接種4 d后出現(xiàn)明顯病斑,而接種B.zeae的植株在接種7 d后葉部才出現(xiàn)褪綠小點。對照組玉米植株除了底層葉片有正常變黃外,未見發(fā)病。采集發(fā)病葉片,進行再次分離,均分離到與接種病原菌一致的真菌,證明了它們的致病性。

圖3 分離到平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌的玉米葉斑樣品Fig.3 Corn leaf spot samples from which Bipolaris and Curvularia were isolated

病斑類型Typeoflesion真菌種及樣品數 Fungalspeciesandnumberofsamples玉蜀黍平臍蠕孢B.maydis玉米平臍蠕孢B.zeae玉米生平臍蠕孢B.zeicola新月彎孢C.lunata穂狀彎孢C.spicifera長條形Elongate50400橢圓形Elliptic40310小點狀Speckle02050梭形Spindle00004總計Total92764

3 結論與討論

經對我國北方5省市田間發(fā)生的疑似由平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌引起的玉米葉斑病害進行采集和病菌的分離鑒定,共鑒定到該兩屬真菌5種,即B.maydis、B.zeicola、B.zeae、C.lunata和C.spicifera。根據各種真菌分離到的頻率判斷,條形和橢圓形病斑主要由B.maydis和B.zeicola引起,即主要為玉米小斑病和圓斑病。小點狀病斑主要由C.lunata引起,即玉米彎孢葉斑病為主,B.zeae引起的葉斑病次之。從癥狀上看,C.lunata引起的小點狀病斑較為稀疏、顏色略淺、呈蒼白色,而B.zeae引起的點狀病斑更為密集、顏色較深。梭形病斑主要由C.spicifera引起。試驗中有少量樣品同時分離到了上述5種中的2種真菌,說明有混合侵染的情況。

B.maydis和B.zeicola分別作為玉米小斑病和玉米圓斑病的病原菌,相關研究已有很多報道。玉米平臍蠕孢(B.zeae)主要寄生在小麥、玉米和一些禾本科雜草上[3],國內有報道從陜西楊凌玉米上分離到B.zeae[20]。本研究從黑龍江省甘南縣采集的玉米葉斑樣品中也分離到B.zeae,溫室接種只在玉米葉片引起褪綠小點,說明該菌致病性可能較弱。

國際上報道彎孢屬有8個種能引起玉米葉斑病,我國常見的有C.lunata,C.pallescens,C.eragrostidis,C.clavata,C.intermedia,C.inaequalis6種[21-23]。本研究采集的樣品中彎孢屬分離到2個種C.lunata和C.spicifera,C.lunata作為玉米彎孢葉斑病的主要病原菌已有很多報道;而C.spicifera是一個廣布種,在空氣、土壤和多種禾本科植物上都有分布[3],耿月華等[24]報道河南鄭州周邊地區(qū)玉米田土壤中分離到了穗狀平臍蠕孢(B.spicifera),即C.spicifera[12],但尚未見引起玉米葉斑病害的報道。本研究分離到C.spicifera的樣品病斑大多呈梭形,與玉米大斑病(Exserohilumturcicum)引起的病斑形狀相似,但C.spicifera引起的葉斑較小,也沒有大斑病那樣的很大的長條斑。溫室接種試驗中C.spicifera在玉米葉片上引起小點狀病斑,沒有田間的病斑大,也可能與玉米品種、生育期和溫濕度等因素有關,其致病性和在田間的發(fā)生情況值得進一步研究。

平臍蠕孢屬和彎孢屬真菌嚴重危害我國玉米的種植生產[25]。除了常見的玉米小斑病、玉米圓斑病和玉米彎孢葉斑病外,該兩屬真菌的其他類群引起的玉米葉斑病害也有零星報道[20, 24, 26]。該兩屬真菌引起玉米病斑復雜多樣,存在同一病原引起的癥狀差別很大和不同病原引起相似癥狀的特點,同時還存在二者混合發(fā)生的情況。因此,僅通過葉斑的癥狀有時難以判斷病原菌的種類。本研究通過對玉米不同類型葉斑的病原菌進行分離和鑒定,明確了發(fā)生于我國北方玉米上的平臍蠕孢屬和彎孢屬的主要真菌種類及其所致病斑特點,為此類病害的正確診斷提供了依據和資料。

[1] 王曉鳴, 石杰, 晉齊鳴, 等. 玉米病蟲害田間手冊[M]. 北京: 中國農業(yè)科學技術出版社, 2010: 1-324.

[2] Drechsler C.Phytopathological and taxonomic aspects ofOphiobolus,Pyrenophora,Helminthosporiumand a new genus,Cochlioblus[J]. Phytopathology, 1934, 24(9): 953-983.

[3] Sivanesan A.Graminicolous species ofBipolaris,Curvularia,Drechslera,Exserohilumand their teleomorphs [M]. Oxford: CAB International Mycological Institute, 1987: 1-263.

[4] 姜廣正. 中國禾本科植物上的蠕形菌(Helminthosporium)[J]. 植物病理學報, 1959, 5(1): 21-34.

[5] 劉國勝. 玉米蠕孢類病菌生理分化研究的歷史與現(xiàn)狀[J]. 河北農業(yè)大學學報, 1993, 16(3): 99-103.

[6] Manamgoda D S, Cai L, Bahkali A H, et al.Cochliobolus: an overview and current status of species [J]. Fungal Diversity, 2011, 51(1): 3-42.

[7] 劉露. 雅安市玉米葉斑病的危害及小型葉斑病的病原研究[D]. 雅安: 四川農業(yè)大學, 2012.

[8] 羅畔池, 劉克明,楊明漪，等. 我國玉米小斑病菌的生理小種[J]. 植物病理學報, 1981, 11(3): 49-56.

[9] 李富華, 王玉濤, 潘開文. 玉米彎孢葉斑病研究現(xiàn)狀、問題與展望[J]. 植物保護, 2004, 30(6): 5-10.

[10]趙來順, 田學軍, 李玉琴, 等. 玉米黃斑病研究I·病原菌鑒定[J]. 河北農業(yè)大學學報, 1995, 18(2): 43-45.

[11]Schoch C L, Seifert K A, Huhndorf S, et al. Nuclear ribosomal internal transcribed spacer (ITS) region as a universal DNA barcode marker for fungi [J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2013, 109(16): 6241-6246.

[12]Manamgoda D S, Cai L, McKenzie E H C, et al. A phylogenetic and taxonomic re-evaluation of theBipolaris-Cochliobolus-Curvulariacomplex [J]. Fungal Diversity, 2012, 56(1): 131-144.

[13]Tan Y P, Madrid H, Crous P W, et al.Johnalcorniagen. et. comb. nov., and nine new combinations inCurvulariabased on molecular phylogenetic analysis [J]. Australasian Plant Pathology, 2014, 43(1): 589-603.

[14]Manamgoda D S, Rossman A Y, Castlebury L A, et al. The genusBipolaris[J]. Studies in Mycology, 2014, 10(2): 1-68.

[15]White T J, Bruns T, Lee S, et al. Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics [M]∥Innis M A, Gelfand D H, Sninsky J J, et al. PCR Protocols: A Guide to methods and applications.San Diego:Academic Press,1990:315-322.

[16]Berbee M L, Pirseyedi M, Hubbard S.Cochliobolusphylogenetics and the origin of known, highly virulent pathogens, inferred from ITS and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene sequences [J]. Mycologia, 1999, 91(6): 964-977.

[17]Thompson J D, Gibson T J, Plewniak F, et al. The CLUSTAL_X windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools [J]. Nucleic Acids Research, 1997, 25(24): 4876-4882.

[18]Saitou N, Nei M. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees [J].Molecular Biology and Evolution, 1987, 4(4): 406-425.

[19]Tamura K, Stecher G, Peterson D, et al. MEGA6: molecular evolutionary genetics analysis version 6.0 [J]. Molecular Biology and Evolution, 2013, 30(12): 2725-2729.

[20]孫廣宇, 張?zhí)煊? 離蠕孢屬1新種和7個國內新記錄[J]. 西北農業(yè)大學學報, 1992, 20(4): 84-86.

[21]Shurtleff M C.Compendium of corn diseases [M]. 2nd Edition. Minnesota: American Phytopathological Society, 1980:103-105.

[22]石潔, 劉玉瑛, 魏利民. 玉米彎孢菌葉斑病病原菌的研究[J]. 沈陽農業(yè)大學學報, 2000, 31(5): 479-481.

[23]戴法超, 高衛(wèi)東, 王曉鳴. 玉米彎孢菌葉斑病的初步研究簡報[J]. 植物保護, 1998, 22(4): 36-37.

[24]耿月華, 張猛, 李躍. 河南鄭州玉米田 4 種暗色絲孢真菌的鑒定[J]. 安徽農業(yè)科學, 2014, 42(13): 3884-3886.

[25]呂國忠, 陳捷, 白金鎧, 等. 我國玉米病害發(fā)生現(xiàn)狀及防治措施[J]. 植物保護, 1997, 23(4): 20-21.

[26]黃世臣, 趙敏. 1株產膽紅素氧化酶新菌株的分離與鑒定研究[J]. 安徽農業(yè)科學, 2014, 42(12): 3486-3490.

(責任編輯：田 喆)

BipolarisandCurvulariaspecies associated with corn leaf spot in northern China

Guo Yujie, Niu Yongchun, Deng Hui

(Key Laboratory of Microbial Resources, Ministry of Agriculture, Institute of Agricultural Resources and Regional Planning, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China)

Several species ofBipolarisandCurvulariacan cause common corn leaf spot. To investigate current corn diseases caused by these fungal species, we collected the suspected samples of corn leaf spot caused by species of the two genera from five provincial regions, including Beijing, Hebei, Henan, Heilongjiang, and Jilin, the main corn-growing areas in China in August to September in 2014. Then the fungi were isolated and identified. A total of 42 collected samples were divided into four types based on the form of the lesions: elongate, elliptic, speckle, and spindle. Twenty-eight strains ofBipolarisandCurvulariawere obtained by the tissue isolation method, and identified asB.maydis,B.zeae,B.zeicola,C.lunataandC.spiciferabased on their morphological characteristics and the phylogenetic analysis of rDNA-ITS sequences. The strains isolated from the elongate and elliptic lesions were mainlyB.maydisandB.zeicola. The strains isolated from the speckle lesions were mostlyC.lunata, followed byB.zeae. The lesions were sparse and pale on the samples withC.lunataisolated, and serried and dark on the samples withB.zeaeisolated. The strains isolated from the spindle lesions wereC.spicifera. There were a few samples with two fungal species being isolated from the same sample. All the five fungal species were pathogenic to corn seedlings in inoculation experiments by using the spore suspension spray method. The plants inoculated withB.maydisshowed symptoms quickly and severely, and those inoculated withB.zeicola,C.lunataorC.spiciferashowed symptoms slowly and markedly, while those inoculated withB.zeaeshowed only small speckle spots on corn leaves. The results may be helpful for the diagnosis of corn leaf spot.

corn; leaf spot; diagnosis;Bipolaris;Curvularia

2015-11-13

2015-12-28

國家“863”計劃課題(2013AA102801, 2013AA102802); 國家微生物資源平臺(NIMR)

S 435.13

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.05.006

* 通信作者 E-mail: denghuimail@aliyun.com