宋金萍

摘要：以曼地亞紅豆杉為試驗(yàn)材料，切取不同植株嫩芽進(jìn)行紅豆杉植株培養(yǎng)試驗(yàn)，確定最佳培養(yǎng)基配方及抑制褐化成分。試驗(yàn)結(jié)果表明：最適培養(yǎng)基的配方為1/2MS+KT 1.0 mg/L+IBA 0.1 mgL，添加瓊脂粉6.0 g、蔗糖30 g、活性炭粉0.3 g、抗氧化VC 0.3 g；最佳抗氧化試劑成份為VC 0.3 g、活性炭0.3 g。

關(guān)鍵詞：培養(yǎng)基；曼地亞紅豆杉；褐化；抗氧化試劑

中圖分類號：S791.49 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2016）07-0011-02

紅豆杉是常綠喬木，小枝秋天變成黃綠色或淡紅褐色，葉條形，雌雄異株，種子扁卵圓形。種子用來榨油，也可入藥。紅豆杉的藥用價值主要為其提取物—次生代謝衍生物—紫杉醇。紫杉醇最早是從短葉紅豆杉種皮中分離出來的抗腫瘤活性成分，是治療轉(zhuǎn)移性卵巢癌和乳腺癌的最好藥物之一，且對肺癌、食道癌有顯著療效，同時對腎炎及細(xì)小病毒有抑制作用。

因?yàn)榧t豆杉樹皮有抗癌物質(zhì)——紫杉醇，所以有許多人進(jìn)林中剝樹皮，使得紅豆杉的數(shù)量急劇下降。為此，以曼地亞紅豆杉為試驗(yàn)材料，切取不同植株的嫩芽進(jìn)行植株培養(yǎng)，探討其對不同培養(yǎng)基的適應(yīng)情況，篩選出最適培養(yǎng)基。

1 材料與方法

1.1 材料處理

采用盤錦博亞惠農(nóng)科技有限公司18 曼地亞紅豆杉母株作為組培試驗(yàn)材料。取嫩枝上的嫩芽作為組培材料，用洗衣粉洗凈芽上殘留物后，再用自來水沖洗30 min后拿出，用0.1%升汞浸泡10 min，75%酒精浸泡30 s。然后用無菌水沖洗4次，使外植體變成無菌植株，接入滅菌培養(yǎng)基中，在23 ℃下培養(yǎng)。要求光照強(qiáng)度2 500 lux。

1.2 初代培養(yǎng)基選配

選擇1/2MS培養(yǎng)基，對不同濃度的細(xì)胞分裂素與生長素進(jìn)行對比試驗(yàn)。采用細(xì)胞分裂素6-BA，KT，TDZ，ZT，以及生長素NAA，IBA做不同濃度對比試驗(yàn)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：1/2 MS+6-BA 0.10 mg/L+IBA 0.05 mg/L為最適宜的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 培養(yǎng)基篩選 不同濃度的細(xì)胞分裂素類激素與生長素互相配合，有利于選出適宜的增殖培養(yǎng)基與生根培養(yǎng)基。增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基不同激素對比試驗(yàn)設(shè)計見表1，其中1—4號為增殖培養(yǎng)基，5—6號為生根培養(yǎng)基。

將紅豆杉小芽分別接種到編號為1，2，3，4的培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)室進(jìn)行恒溫增殖培養(yǎng)。小芽對光有一定需求，因此將光照強(qiáng)度由原來的2 000 lux增加到2 500 lux。瓶苗1.5～2.0個月重新繼代一次。

生根小苗在培養(yǎng)室培養(yǎng)1.5個月長出新根后，移到日光溫室進(jìn)行馴化培養(yǎng)。在3～4 d后打開瓶蓋，將小苗移栽到配比好的基質(zhì)上，判斷其在各基質(zhì)上的生長情況，篩選適于生長的基質(zhì)?；|(zhì)共有3種：1為草炭1份+珍珠巖0.5份+壤土2份；2為草炭1份+蛭石0.5份+壤土2份；3為草炭1份+蛭石0.5份+壤土2份+珍珠巖0.5份。

1.3.2 抑制褐化濃度選擇 杉屬植物在進(jìn)行組織培養(yǎng)時，常發(fā)生褐化現(xiàn)象。因此在培養(yǎng)基中添加不同的抗褐化試劑，利于紅豆杉增殖、繼代與生根培養(yǎng)。主要添加的褐變抑制劑有抗氧化劑Vc、ppo抑制劑、PV、硫脲、二氨基二硫代甲酸鈉等?？扇苄跃垡蚁┻量┩橥╬vp）是酚類物質(zhì)的專一性吸附劑。

活性碳是抑制褐化最好的吸附劑，吸附褐化物質(zhì)時也吸附細(xì)胞分裂素和生長素。配制培養(yǎng)基時，若培養(yǎng)基里有活性炭成分，應(yīng)適當(dāng)增加細(xì)胞分裂素和生長素的濃度。

1 L培養(yǎng)基中添加的抗褐化試劑量見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 最適增殖培養(yǎng)基

增殖培養(yǎng)結(jié)果表明：在培養(yǎng)基1和4中，紅豆杉小苗長勢比較好，生長比較旺盛。紅豆杉小苗在培養(yǎng)基2表現(xiàn)為愈傷長勢比較旺盛，誘導(dǎo)叢生小苗比較困難，但愈傷上有小苗長出，長勢不太好，不利于生根。紅豆杉小苗在培養(yǎng)基3表現(xiàn)為有愈傷，隨著培養(yǎng)時間延長愈傷慢慢枯死，最后導(dǎo)致小苗萎蔫死亡。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可知，培養(yǎng)基1和4適宜進(jìn)行紅豆杉增殖培養(yǎng)。

2.2 最適生根培養(yǎng)基

生根對比試驗(yàn)中，20%>5號生根率>50%，30%>6號生根率>70%，5號比6號生根數(shù)量少。

2.3 最適基質(zhì)

生長情況表明，基質(zhì)3的栽植成活率最高，達(dá)到90%以上。

2.4 抑制褐化濃度

試驗(yàn)結(jié)果表明：培養(yǎng)基1中的苗長勢比較好，醌類物質(zhì)分泌少，不影響苗正常生長；培養(yǎng)基2和3中的苗醌類物質(zhì)分泌多，抑制褐化效果不明顯，對瓶苗生長和生根有一定的影響，不予采用。

3 結(jié)論

對比試驗(yàn)結(jié)果表明：最適培養(yǎng)基的配方為1/2MS+KT 1.0 mg/L+IBA 0.1 mgL，添加瓊脂粉6.0 g、蔗糖30 g、活性炭粉0.3 g、抗氧化VC 0.3 g；最佳抗氧化試劑成份為VC 0.3 g、活性炭0.3 g。

參考文獻(xiàn)

[1] 卓嘎，楊小林，辛福梅，等.喜馬拉雅紅豆杉愈傷組織的誘導(dǎo)[J].西部林業(yè)科學(xué)，2015（4）：100-104.

[2] 姚曉，步達(dá)，陳建偉，等.南方紅豆杉愈傷組織培養(yǎng)及其紫杉烷二萜類成分的分析[J].中草藥，2014（18）：2 696-2 702.

[3] 郄亞微.南方紅豆杉組織培養(yǎng)體系優(yōu)化[J].長江大學(xué)學(xué)報自然科學(xué)版，2016（3）：42-45.