羅先 岑曉鵬 應清香 范斯敏

（1，福建農林大學動物科學學院 350002；2，福建省南平市延平區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所 353000；3，福建省南平市動物疫病預防控制中心 353000；4，福建省南平市建陽區(qū)動物疫病預防控制中心 354200）

仔豬豬瘟母源抗體消長規(guī)律測定

羅先1岑曉鵬2應清香3范斯敏4

（1，福建農林大學動物科學學院 350002；2，福建省南平市延平區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所 353000；3，福建省南平市動物疫病預防控制中心 353000；4，福建省南平市建陽區(qū)動物疫病預防控制中心 354200）

選擇福建省南平市某規(guī)?；i場豬瘟抗體檢測合格的10頭能繁母豬，分別從每頭母豬所生的仔豬中隨機抽取2頭，共20頭，25日齡斷奶，不注射豬瘟疫苗，分別于l日齡、5日齡、10日齡、15日齡、20日齡、25日齡、30日齡、35日齡、40日齡用豬瘟病毒抗體ELISA檢測試劑盒檢測豬瘟抗體水平，通過檢測數據掌握母源抗體的消長規(guī)律。結果表明，哺乳仔豬出生后5～10日齡血清抗體陽性率達到了100%，為最高。抗體水平于15日齡以后開始降低，至25日齡左右達到保護臨界值 (80%陽性率)，40日齡時降低到5%。

仔豬；豬瘟；母源抗體；消長規(guī)律

哺乳仔豬在一段時間內被動地獲得抵御病毒的能力，完全依賴于母源抗體的存在，但母源抗體又會影響免疫接種。本研究監(jiān)測了斷奶前后不同日齡的仔豬豬瘟抗體水平，得出的數據便于掌握母源抗體消長規(guī)律，有利于豬瘟免疫程序的合理制定。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品

挑選的哺乳仔豬為福建省南平市某規(guī)?；i場同期分娩的10頭經產母豬 (分娩前均經過血清學檢測，判定為豬瘟抗體合格保護力)所產，隨機抽取每頭母豬所產的仔豬中的2頭，共20頭。不接種豬瘟疫苗免疫，仔豬于25日齡斷奶。分別于l日齡、5日齡、10日齡、15日齡、20日齡、25日齡、30日齡、35日齡、40日齡采集血液分離血清，并進行豬瘟抗體檢測，觀察母源抗體的消長規(guī)律。

1.2 試劑

IDEXX公司豬瘟病毒抗體 (CSFV-Ab)ELISA檢測試劑盒，批號43220-Y241。包括用CSFV-Ag包被的微量反應板，陽性對照血清（Positive Control）， 陰性對照血清（Negative Control）， 樣品稀釋液（Sample Diluent）， 酶標抗體（Conjugate）， 10 倍濃縮洗滌液（Wash Concentrate×10）， TMB 底物溶液（TMB Substrate）， 終止液（Stop Solution）， 均購自北京IDEXX生物科技有限公司。

1.3 實驗器材

MH-2微量振蕩器、QL-901 Vortex離心機、Eppendorf 10～100μl單道移液器、 BRAND30～300μl 8 道移液器、 AXYGEN 200μl移液器吸頭、Thermo Multiskan MK3型酶標儀、BioTek洗板機、500ml量筒、超純水機、記時器等。

1.4 試驗方法

（1）試驗前，所有試劑需恢復到室溫（18～25℃）。通過輕輕旋轉使試劑均勻混合。

（2）取出用抗體包被的微量反應板，并將每個樣品的位置在記錄表上標記好。

（3）用8道移液器吸取50μl的樣品稀釋液加入每個反應孔中。

（4）陰陽性對照各設置2孔，余下的反應孔為被檢樣品。用單道移液器吸取50μl陰性對照血清加入陰性對照孔，再吸取50μl陽性對照血清加入陽性對照孔，然后吸取50μl被檢樣品加入余下的反應孔。

（5）將反應板置于振蕩器中，振蕩混勻。

（6）在恒溫箱室溫孵育2h。

（7）用洗板機洗滌每個反應孔，每孔加入300μl洗液，洗滌3次。最后一次洗滌后，將反應板在折疊好的紗布上拍干。

（8）用8道移液器吸取100μl酶標抗體加入每個反應孔中，在恒溫箱室溫下孵育30min。

（9）重復步驟（7）。

（10）用8道移液器吸取100μl的TMB底物溶液加入每個反應孔中。在室溫條件下于避光處孵育10min。

（11）用8道移液器吸取100μl終止液加入每個反應孔中，終止反應。

（12）置于酶標儀上，用450nm單波長測定樣本以及對照的吸光值（A450值）。

（13）結果計算：阻斷率=（陰性對照平均A450值-樣品A450值）/陰性對照平均A450值×100%；

（14）實驗成立條件：陰性對照的平均A450值大于0.50， （陰性對照平均A450值-陽性對照平均A450值）/陰性對照平均A450值×100%的值大于50%。

（15）判定標準：具體見表1。

表1 豬瘟抗體檢測結果判定

2 結果

母源抗體結果詳見表2。

3 分析與討論

從表2可以看出，仔豬出生后5～10日齡血清抗體陽性率達到了100%，為最高?？贵w水平于15日齡以后開始降低，至25日齡左右達到保護臨界值 (80%陽性率)，40日齡時已經降低到了5%。因為本試驗中規(guī)定仔豬在25日齡斷奶，所以母源抗體水平在25日齡后下降的速度變快，應該與此有關。鑒于該場的現(xiàn)有情況看來，在不采用超前免疫的情況下，26日齡為較佳的豬瘟疫苗免疫時間。

通過試驗還發(fā)現(xiàn)，仔豬母源抗體水平下降速度取決于對應母豬的抗體水平，這與以往的一些研究結果基本符合。Vandeputte[1]發(fā)現(xiàn)，母源抗體能在哺乳仔豬吃奶后2h后被檢測到，并能持續(xù)7周以上。豬瘟強毒在仔豬7周齡免疫后不能感染機體，未免疫的對照組則呈現(xiàn)出典型的發(fā)病癥狀。劉莉等[2]通過檢測400頭仔豬的血清抗體發(fā)現(xiàn)，豬瘟疫苗按常規(guī)免疫接種后，母豬產下的仔豬其母源抗體呈現(xiàn)出正態(tài)分布，從1日齡開始逐漸升高，可在11～16日齡達到最高峰值，之后母源抗體將隨著仔豬日齡的增長開始逐漸降低，大約有部分仔豬（將近50%）的抗體水平于21日齡時降到1：16甚至更低。在這個階段接種免疫疫苗不但能保持抗體在血清中的效價，還能避開干擾的母源抗體。林毅等[3]應用豬瘟Dot-ELISA試劑盒檢測仔豬的抗體結果如下：7日齡豬的瘟抗體保護率為80.0%、14日齡的保護率為60.0%、21日齡的保護率為33.3%、28日齡的保護率為13.4%、35日齡的保護率為6.7%。其中7日齡仔豬的母源抗體水平較高。

表2 仔豬豬瘟母源抗體檢測結果

綜上所述，仔豬的母源抗體消長規(guī)律決定了仔豬豬瘟的免疫日齡，而這一規(guī)律必須通過抗體監(jiān)測數據來確定。選擇的免疫時間應該為仔豬母源抗體降低至保護率80%的這個最低臨界值的日齡，這樣既能維持抗體在血清中的效價，又能不受母源抗體的干擾。由于母豬的血清抗體與仔豬的母源抗體水平有著緊密的聯(lián)系，所以在生產實踐中應定期監(jiān)測母豬的母源抗體水平，根據檢測所得的數據對免疫程序進行調整優(yōu)化，才能夠更科學地提高豬群對豬瘟病毒的免疫力，有效地控制和避免豬瘟疫情在豬場的發(fā)生。

[1]災andeputte J,Too HL.Adsorption of colostral antibodies against classical swine fever,persistence of maternal antibodies,and effect on response to vaccination in baby pigs[J].Am J災et Res,2001,62(11):1805-1811.

[2]劉莉,金璐娟,楊旭,等.規(guī)?；i場豬瘟母源抗體消退規(guī)律[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2004(10)：46-47.

[3]林毅,馮金傳,張道永.規(guī)?；i場4種免疫程序的免疫效果比較[J].中國獸醫(yī)科技,2000,30(4)：20-22.