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(1.黔西南州食品藥品檢驗檢測中心， 貴州 興義 562400； 2.黔西南州天地藥業(yè)貿易有限公司， 貴州 興義 562400)

黔西南州引種金銀花中藥質量檢測研究

范紅梅1，劉志海1，金昭1，趙列香2

(1.黔西南州食品藥品檢驗檢測中心， 貴州 興義 562400； 2.黔西南州天地藥業(yè)貿易有限公司， 貴州 興義 562400)

以3年不同批次的加工藥材為試驗材料，采用HPLC法，對其綠原酸和木犀草苷的含量進行了測定，旨在評估黔西南州引種金銀花的中藥材質量，為其質量檢測及引種栽培提供科學依據(jù)。結果表明，檢測色譜系統(tǒng)的適用性優(yōu)良，檢測條件的精密度和穩(wěn)定性好；3年不同批次的引種金銀花中綠原酸的含量為2.4%～4.2%，木犀草苷含量為0.067%～0.137%，均明顯高于藥典規(guī)定含量，質量優(yōu)良。

HPLC法； 綠原酸； 木犀草苷； 金銀花

金銀花又名忍冬、雙花等，為忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾或帶初開的花，傳統(tǒng)以花蕾入藥，是常用大宗中藥材，主產于山東、河南、湖北等地。金銀花藥用價值高，耐旱、耐寒、抗鹽堿、抗風沙，是防風固沙、保持水土、綠化荒山的良好生態(tài)植物[1]。金銀花味甘，性寒，歸肺、心、胃經(jīng)，具有清熱解毒、疏散風熱之功效，用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫病發(fā)熱等癥[2]?，F(xiàn)代藥理及臨床研究表明，金銀花對于多種病菌有較強的抗菌作用和較好的治療效果。有關金銀花及同屬植物的化學成分研究有很多報道，從金銀花中分離鑒定的化學成分類型較多，主要有揮發(fā)油類[3-5]、有機酸類[6-9]、黃酮類[10]和環(huán)烯醚萜類[11-12]等。貴州省黔西南州在“石漠化”攻堅扶貧過程中，成功總結出了中海拔地區(qū)的金銀花種植模式，據(jù)不完全統(tǒng)計，截止2014年全州種植面積7 330 hm2左右。近年來，隨著產業(yè)發(fā)展及藥用習慣的規(guī)范，黔西南州金銀花引種試種栽培也時有發(fā)生。2012年黔西南州天地藥業(yè)貿易有限公司從山東省平邑引種金銀花(忍冬)到黔西南州進行種植試驗。本研究旨在跟蹤和檢測引種金銀花質量，以期對金銀花的引種和技術檢測提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

供試材料為黔西南州引種忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的加工藥材，由黔西南州天地藥業(yè)貿易有限公司提供。

1.2 試藥與儀器

綠原酸(含量96.6%)，木犀草苷(含量94.0%)，均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈(色譜純)、水(超純水)、磷酸、乙醇、冰醋酸、甲醇均為為分析純。Waters e 2695型高效液相色譜儀，Empower色譜數(shù)據(jù)工作站，電子天平，電熱恒溫干燥箱。

1.3 方 法

1.3.1 綠原酸含量測定

1) 色譜條件：Gemini-NX 5 u C18110 A(250×4.6 mm)色譜柱，以乙腈∶0.4%磷酸溶液(13∶87)為流動相，柱溫30 ℃；流速1 mL/min；進樣量10μL；檢測波長327 nm。

2) 對照品溶液的制備：精密稱取綠原酸對照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含45.2μg的溶液，上機測定。

3) 供試品溶液的制備：取金銀花粉末(過4號篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 50%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率35 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻、濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，上機測定。

4) 線性關系的考察：分別吸取綠原酸對照品溶液2，5，10，20，25μL注入液相色譜儀，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，以對照品進樣量為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(y)，計算回歸方程。

5) 精密度試驗：精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，記錄綠原酸峰面積。

6) 重復性試驗：精密稱取同一批金銀花粉末6份，按1.3.1 3)項下方法操作，制備供試品溶液，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，計算其含量。

7) 穩(wěn)定性考察：取同一批金銀花供試品溶液，在0，2，4，8，12，24 h，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，記錄綠原酸峰面積。

8) 加樣回收試驗：精密稱取已知含量的樣品金銀花藥材6份，每份約0.25 g，加入同等量的綠原酸對照品，按1.3.1 3)項方法操作，制備供試品溶液，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，記錄峰面積，計算回收率。

1.3.2 木犀草苷含量測定

1) 色譜條件：采用Agilent ZORBAX SB-phenyl(4.6×250 mm)色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.5%冰醋酸溶液為流動相B，0～15 min流動相A(10%→20%)，流動相B(90%→80% )；15～30 min流動相A(20%)，流動相B(20%)，30～40 min流動相A(20%→30%)，流動相B(80%→70%)進行梯度洗脫，柱溫30 ℃；流速1 mL/min；進樣量10μL，檢測波長350 nm。

2) 對照品溶液的制備：精密稱取木犀草苷對照品適量，加70%乙醇制成每1 mL含35.5μg的溶液，上機測定。

3) 供試品溶液的制備：取金銀花粉末(過4號篩)約 2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率35 kHz)1 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾10 mL，回收溶劑至干，殘渣用70%乙醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，上機測定。

4) 線性關系的考察：分別吸取木犀草苷對照品溶液2，5，10，20，25μL注入液相色譜儀，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，以對照品進樣量為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(y)，計算回歸方程。

5) 精密度試驗：精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，記錄木犀草苷峰面積。

6) 重復性試驗：精密稱取同一批金銀花粉末6份，按1.3.2 3)項方法操作，制備供試品溶液，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，計算其含量。

7) 穩(wěn)定性考察：取同一批金銀花供試品溶液，在0，2，4，8，12，24 h，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，記錄木犀草苷峰面積。

8) 加樣回收試驗：精密稱取已知含量的樣品金銀花藥材6份，每份約1 g，加入同等量的木犀草苷對照品，按1.3.2 3)項方法操作，制備供試品溶液，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，記錄峰面積，計算回收率。

2 結果與分析

2.1 系統(tǒng)適用性、精密度與穩(wěn)定性

按照1.3.1和1.3.2的操作，綠原酸和木犀草苷的色譜分離較好，峰形對稱(圖1～圖4)，不受試劑或樣品中其他物質干擾，表明這2種中物質的檢測色譜條件可行。綠原酸標準曲線為y=33 464x-5 742，R2=0.999 9；精密度檢測RSD值為0.7%；重復性檢測RSD值為1.1%；穩(wěn)定性檢測的RSD值為1.5%，添加回收率為95.1%。木犀草苷標準曲線為y=30 506x+2 107，R2=0.999 8；精密度檢測RSD值為0.4%；重復性檢測RSD值為1.7%；穩(wěn)定性檢測的RSD值為1.1%，添加回收率為92.1%。說明檢測系統(tǒng)精密度和穩(wěn)定性良好。

2.2 供試樣品的藥用質量

3年內不同批次樣品綠原酸的含量在2.4%～4.2%之間，是藥典規(guī)定含量的1.6～2.8倍；木樨草苷含量變化為0.067%～0.137%，是藥典規(guī)定含量的1.34～2.74倍，說明貴州黔西南州引種金銀花的中藥材質量均已達到要求且質量優(yōu)良。

圖1 綠原酸對照品色譜圖

圖3 木犀草苷對照品色譜圖

圖4 供試品木犀草苷色譜圖

3 討 論

3年的跟蹤檢測結果(表1)表明，黔西南州引種試驗所產金銀花主要成分綠原酸和木犀草苷的含量均符合《中國藥典》的要求(2015年版規(guī)定(綠原酸含量不得少于1.5%；木犀草苷含量不得少于0.050%)[13]，黔西南州引種金銀花試驗基本成功，從樣品含量結果可以看出，綠原酸含量雖有所降低，但遠高于《中國藥典》之規(guī)定，木犀草苷含量從引種第1年的0.137%(最高)到第3年的0.067%，逐年下降，是否由于黔西南州氣候、土壤等環(huán)境因素不利于有效成分木犀草苷的富集，還有待進一步考察研究。

表1 不同批次供試樣品的綠原酸和木犀草苷含量

年份批號 藥典規(guī)定含量① 供試樣品量 綠原酸(%)木犀草苷(%)綠原酸(%)木犀草苷(%)20132013064．20．1312013073．90．1372014201404≥1．5≥0．052．40．0952014052．70．10320152015053．00．067201505013．10．0832015062．70．072

注：“①”引自2015版《中華人民共和國藥典》。

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The Detection of Medical Quality for Honeysuckle Introduced in Southwest of Guizhou

FANHongmei1，LIUZhihai1，JINZhao1，ZHAOLiexiang2

2016-07-26

范紅梅(1964—)，女，貴州盤縣人；本科學士學位，副主任藥師，主要從事藥品檢驗、化學藥及民族藥研究工作。

10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.12.054

S 567.1+9

A

1001-4705(2016)-0054-03