劉調(diào)俠 張曉瓚 李延琴

(銅川市婦幼保健院 1.兒科；2.檢驗(yàn)科， 陜西 銅川 727007)

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·論著·

兒童肺炎支原體感染及耐藥檢測(cè)與分析*

劉調(diào)俠1張曉瓚2李延琴1

(銅川市婦幼保健院 1.兒科；2.檢驗(yàn)科， 陜西 銅川 727007)

目的 分析肺炎患兒中肺炎支原體(MP)的感染及耐藥情況，并探討其臨床特點(diǎn)及基因分型特征，為臨床合理選擇抗生素提供理論依據(jù)。方法 收集2015年1月至2015年12月銅川市婦幼保健院兒科以發(fā)熱、咳嗽等呼吸道癥狀首診確定MP感染的住院患兒120例。通過(guò)肺炎支原體抗體檢測(cè)、體外培養(yǎng)及核酸檢測(cè)了解肺炎支原體感染狀況，測(cè)定多種抗菌藥物的最低抑菌濃度(MIC值),分離出耐藥菌株。根據(jù)藥敏試驗(yàn)鑒定結(jié)果分為耐藥組(n=98)和非耐藥組(n=22)，比較耐藥組與非耐藥組患兒臨床特征；將耐藥組98例患兒依據(jù)初選抗生素種類分為初選阿奇霉素或紅霉素組(n=78)和初選頭孢或青霉素類(n=20)，比較兩組患兒的臨床特點(diǎn)。將耐藥菌株的23SrRNA基因序列與標(biāo)準(zhǔn)珠相比對(duì)，研究耐藥菌株的23SrRNA基因突變位點(diǎn)。結(jié)果 120例經(jīng)臨床診斷為MP肺炎的患兒中，98例體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果提示為耐藥支原體肺炎，對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類藥物高度耐藥。耐藥組發(fā)熱時(shí)間、住院時(shí)間及給予大環(huán)內(nèi)酯類藥物(阿奇霉素)后發(fā)熱時(shí)間均較非耐藥組長(zhǎng)(P<0.05)，兩組間年齡、呼吸道癥狀時(shí)間、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞比例、C反應(yīng)蛋白(CRP)、血沉(ESR)、影像所見好轉(zhuǎn)時(shí)間、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(ML)總療程比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。耐藥組與非耐藥組之間預(yù)后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中非耐藥組痊愈患兒比例高于耐藥組。98例耐藥支原體肺炎中初選頭孢或青霉素類抗生素組20例，治療中更改為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的平均時(shí)間為病程第(5.2±1.8)天。初選不同治療藥物兩組在呼吸道癥狀持續(xù)時(shí)間、使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素后發(fā)熱時(shí)間、白細(xì)胞計(jì)數(shù)等指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。肺炎支原體核糖體23S rRNA全序列分析：其中約90%耐藥MP株發(fā)生了2063位A→G(A2063G)的突變，少數(shù)MP耐藥株發(fā)生了 A2064G(約5%)、A2063C、C2617G/A 的突變。結(jié)論 銅川地區(qū)2015年支原體肺炎患兒對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，其耐藥機(jī)制主要與2063位A→G(A2063G)的點(diǎn)突變有關(guān)。非耐藥組患兒預(yù)后好于耐藥組。MP快速鑒定培養(yǎng)與直接藥敏試驗(yàn)方法標(biāo)本獲取容易，檢測(cè)技術(shù)操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果可為臨床診療提供科學(xué)依據(jù)。

肺炎支原體； 感染； 兒童； 耐藥機(jī)制

肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae，MP)是患兒急性上、下呼吸道感染的常見病原體之一。研究表明，肺炎支原體肺炎具有年齡分布特征和季節(jié)性，不同國(guó)家和地區(qū)的發(fā)病率差別較大。兒童MP感染主要以大環(huán)內(nèi)酯類藥物治療為主；近年來(lái)關(guān)于MP耐藥現(xiàn)象的報(bào)道較多[1]。本研究通過(guò)對(duì)銅川地區(qū)住院肺炎患兒肺炎支原體感染及耐藥檢測(cè)與分析，以期對(duì)臨床MP肺炎的診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2015年1月至2015年12月以發(fā)熱、咳嗽等呼吸道癥狀首診確定MP感染的住院患兒120例，其中男性患兒64例(53.33%)，女性患兒56例(46.67%)。MP肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第7版診斷標(biāo)準(zhǔn)，有發(fā)熱、持續(xù)劇烈咳嗽、肺部啰音等呼吸道癥狀及體征，伴胸部影像學(xué)單側(cè)或雙側(cè)異常改變，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)肺炎支原體抗原陽(yáng)性，青霉素或頭孢類抗生素治療無(wú)效，病程初期未發(fā)現(xiàn)其他病原感染的證據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①體液和細(xì)胞免疫異常。②正在接受免疫抑制劑治療。③既往患支氣管哮喘、反復(fù)呼吸道感染、先天性或繼發(fā)性免疫抑制或缺陷、腎臟或肝臟疾病、心血管疾病及結(jié)締組織疾病等，既往1個(gè)月內(nèi)接受住院治療。④既往有重癥肺炎病史仍未痊愈。⑤病歷資料不完整。納入本研究的病例均已獲患兒家屬知情同意。依據(jù)是否耐藥分為耐藥組(n=98)和非耐藥組(n=22)；依據(jù)98例耐藥支原體肺炎按初選抗生素種類分為初選阿奇霉素或紅霉素組(n=78)及初選頭孢或青霉素類抗生素組(n=20)。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器及試劑 TGL-16G型臺(tái)式高速離心機(jī)、Bio-rad公司Opticon 2 PCR擴(kuò)增儀、GeneAmp PCR System9600、HB-100型電熱恒溫水槽、ELX-800酶標(biāo)儀、Milli-Q純水系統(tǒng)、DNP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱、PCR擴(kuò)增試劑、MP-IgM檢測(cè)試劑盒、DNA提取試劑盒、MP快速液體培養(yǎng)基、MP標(biāo)準(zhǔn)株MP-129。

1.2.2 標(biāo)本采集 所有患兒在入院后24 h內(nèi)完成標(biāo)本的采集,抽取外周血2 ml用于ELISA法檢MP-IgM抗體，用無(wú)菌生理鹽水浸濕的無(wú)菌咽拭子適度用力刮拭患兒咽后壁,標(biāo)記后行MP培養(yǎng)和MP-PCR檢測(cè)。

1.2.3 檢測(cè)方法 ①酶聯(lián)免疫吸附法試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)MP-IgM抗體:按照深圳博卡生物有限公司提供的試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作及結(jié)果的判定。②MP快速液體培養(yǎng)法：液體培養(yǎng)基在使用前置于4 ℃保存,用時(shí)移至室溫待培養(yǎng)基融化后使用。應(yīng)注意MP對(duì)熱和干燥敏感,取材后應(yīng)立即接種,若置于轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中,4 ℃能保存72 h。 所有患兒采取標(biāo)本前用溫水漱口,然后用無(wú)菌生理鹽水浸濕的咽拭子在患兒口腔咽后壁捻轉(zhuǎn)數(shù)次,60 min內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室,小心取出棉拭子,置于含培養(yǎng)基的小瓶中,攬動(dòng)棉拭子數(shù)次,再把棉拭子對(duì)著瓶壁,盡量擠壓出其中液體,取出棉拭子棄至醫(yī)療垃圾桶中。蓋上瓶塞,置37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48 h即可觀察結(jié)果，待培養(yǎng)基顏色由紅轉(zhuǎn)黃且無(wú)明顯沉淀物時(shí)，判斷為肺炎支原體培養(yǎng)陽(yáng)性。利用九種抗生素的高低濃度在體外對(duì)微生物生長(zhǎng)的抑制作用,對(duì)微生物作耐藥性進(jìn)行分析,采用珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程股份有限公司生產(chǎn)的MP 培養(yǎng)藥敏試劑盒，嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行操作。③肺炎支原體PCR檢測(cè)：向咽拭子中加入4倍體積的生理鹽水，用1 ml移液器反復(fù)吹打后置4 ℃冰箱。用移液器混勻后吸取1～1.5 ml離心管中。12 000 rpm離心5 min后棄上清；在沉淀中加入50 μL的DNA提取液充分混均。100 ℃恒溫處理10 min;12 000 rpm離心5min后保存于-20 ℃冰箱中備用。2×緩沖液10.0 μL，10.0 μmol/L 的引物 P3 1.0 μL，10.0 μmol/L 引物 P4 1.0 μL，模板DNA 1.0 μL，ddH2O 7.0 μL。反應(yīng)條件及循環(huán)：93 ℃變性2 min；95 ℃ 1 min，50 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)；75 ℃延伸5 min。熒光測(cè)定PCR產(chǎn)物采用膠回收試劑盒回收，采用T Easy載體連接體系克隆，4 ℃連接過(guò)夜。轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞，藍(lán)白斑篩選。采用Blast功能進(jìn)行序列分析，挑選測(cè)序結(jié)果一致的克隆提取質(zhì)粒備用。巢式PCR：2×緩沖液10.0 μL，40×Assay Mix(含P3，P4，T3和T4各0.5 μL)，DNA模板1.0 μL，ddH2O 7.0 μL，總體積20.0 μL。反應(yīng)條件及循環(huán)：95 ℃ 1 min，92 ℃ 15 s；60 ℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)。收集擴(kuò)增前，擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增后熒光信號(hào)，采用SDS 軟件獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線。④肺炎支原體核糖體23s全序列分析：利用外引物MN23SDVF、MN23SDVR和巢式引物MN23SF1812、MN23SR2152進(jìn)行擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物采用雙向測(cè)序。測(cè)得序列與NCBI已登錄的MP標(biāo)準(zhǔn)珠MP129 23SrRNA基因相比對(duì)。產(chǎn)物由華大基因科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。采用DNAstar軟件與肺炎支原體M129(GenBank Accession No．X68422)進(jìn)行序列比對(duì)分析。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 記錄患兒的一般臨床資料 性別、年齡、住院天數(shù)、發(fā)熱時(shí)間、呼吸道癥狀持續(xù)時(shí)間、初起選擇抗生素的種類、病程中更換為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的時(shí)間，使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素后發(fā)熱時(shí)間、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的使用時(shí)間等。

1.3.2 記錄相關(guān)輔助檢查結(jié)果 白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞比例、C反應(yīng)蛋白、血沉、肺炎支原體抗體結(jié)果、咽拭子肺炎支原體PCR結(jié)果、肺炎支原體培養(yǎng)結(jié)果及MIC值等，胸部影像學(xué)表現(xiàn)及影像學(xué)指標(biāo)好轉(zhuǎn)時(shí)間。

1.3.3 療效判斷 療效分痊愈，顯效，進(jìn)步，無(wú)效4級(jí)。痊愈:初始治療2周內(nèi)體溫、呼吸道癥狀及體征正常,實(shí)驗(yàn)室檢查血象、CRP均恢復(fù)正常;顯效:體溫呈下降趨勢(shì),但呼吸道癥狀、體征，實(shí)驗(yàn)室檢查均未完全恢復(fù)正常;進(jìn)步:體溫不退,但呼吸道癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查中至少有一項(xiàng)改善;無(wú)效:體溫不降,呼吸道癥狀體征、實(shí)驗(yàn)室檢查無(wú)改善,或一度改善又惡化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布資料采用非參數(shù)檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 120例經(jīng)臨床診斷為MP肺炎的患兒中，血清MP-IgM抗體檢測(cè)均為陽(yáng)性。113例咽拭子肺炎支原體PCR檢測(cè)陽(yáng)性；其余7例PCR檢測(cè)陰性，PCR檢測(cè)陰性者咽分泌物支原體培養(yǎng)陽(yáng)性。咽分泌物支原體培養(yǎng)陽(yáng)性者為101例。98例體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果提示為耐藥支原體肺炎，對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類藥物高度耐藥。體外藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 120例MP肺炎患兒感染樣本的藥敏試驗(yàn)結(jié)果(MIC值，mg/L)

2.2 MP肺炎耐藥組與非耐藥組臨床特點(diǎn)比較 兩組患兒的臨床表現(xiàn)及檢驗(yàn)結(jié)果顯示，耐藥組發(fā)熱時(shí)間、住院時(shí)間及給予大環(huán)內(nèi)酯類藥物(阿奇霉素)后發(fā)熱時(shí)間均較非耐藥組長(zhǎng)(P<0.05)；兩組間年齡、呼吸道癥狀時(shí)間、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞比例、C反應(yīng)蛋白(CRP)、血沉(ESR)、影像所見好轉(zhuǎn)時(shí)間、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(ML)總療程比較均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.3 初選阿奇霉素或紅霉素組和初選頭孢或青霉素類抗生素組臨床特點(diǎn)比較 初選頭孢或青霉素類抗生素組20例，治療中更改為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素藥物的平均時(shí)間為病程第(5.2±1.8) d。兩組比較后發(fā)現(xiàn)在呼吸道癥狀持續(xù)時(shí)間、使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素后發(fā)熱時(shí)間、白細(xì)胞計(jì)數(shù)等指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

Table 2 Clinical features of resistant group and non-resistant group

臨床指標(biāo) 耐藥組(n=98)非耐藥組(n=22)P年齡(歲)8±37±40.518發(fā)熱時(shí)間(d)11±48±50.007呼吸道癥狀時(shí)間(d)18±516±40.085WBC(×109/L)7±48±40.176中性粒細(xì)胞比例0.68±0.740.61±0.830.457CRP(mg/L)11.01±18.2313.0±20.610.972ESR(mm/h)25±1322±140.682胸部影像所見好轉(zhuǎn)時(shí)間(d)14±313±50.661住院時(shí)間(d)12±38±40.001ML總療程10±39±50.438用ML后發(fā)熱時(shí)間(d)8±36±40.042

2.4 耐藥組與非耐藥組患兒預(yù)后比較 耐藥組與非耐藥組之間預(yù)后的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中非耐藥組痊愈患兒比例高于耐藥組(P<0.05)，見表4。

Table 3 Clinical characteristics of children with different antibiotics resistance of mycoplasma pneumonia primaries

臨床指標(biāo)初選抗生素為阿奇霉素或紅霉素(n=78)初選抗生素為青霉素類或頭孢類(n=20)P年齡(歲)8±28±50.237發(fā)熱時(shí)間(d)10±611±60.681呼吸道癥狀時(shí)間(d)19±517±40.046WBC(×109/L)6±411±60.000中性粒細(xì)胞比例0.65±0.750.71±0.810.262CRP(mg/L)10.98±16.2311.51±20.610.074ESR(mm/h)26±1323±140.922胸部影像所見好轉(zhuǎn)時(shí)間(d)14±314±40.939住院時(shí)間(d)13±311±40.159ML總療程10±310±50.249用ML后發(fā)熱時(shí)間(d)9±35±40.009

表4 耐藥組與非耐藥組患兒預(yù)后比較

Table 4 prognosis of resistance group and non-resistant group

預(yù)后耐藥組(n=98)非耐藥組(n=22)P痊愈30(30.61)14(63.64)①0.027顯效39(39.79)6(27.28)進(jìn)步20(20.41)1(4.54)無(wú)效9(9.19)1(4.54)

注：與耐藥組比較，P<0.05

2.5 肺炎支原體核糖體23S rRNA全序列分析 約90%耐藥MP株發(fā)生了2063位A→G(A2063G)的突變，少數(shù)MP耐藥株發(fā)生了 A2064G(約5%)、A2063C、C2617G/A 的突變，而且A2063G/C和 A2064G 的突變能引起 MP 對(duì)紅霉素產(chǎn)生高水平耐藥，并對(duì)其他大環(huán)內(nèi)酯類發(fā)生交叉耐藥。

3 討論

肺炎支原體(MP)是介于細(xì)菌與病毒之間,無(wú)細(xì)胞壁的一類原核細(xì)胞型生物，其已成為兒童社區(qū)獲得性肺炎的常見病原體之一。因?yàn)槿狈?xì)胞壁結(jié)構(gòu),對(duì)β-內(nèi)酞胺類、糖肽類和磺胺類等抗生素固有耐藥[2]。既往認(rèn)為肺炎支原體對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類藥物敏感性高，無(wú)耐藥性產(chǎn)生。2000年Okazaki等[3]首次在兒童患者體內(nèi)分離到對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的MP。隨后國(guó)內(nèi)外相繼報(bào)道了在臨床標(biāo)本中尤其兒童患者中分離得到對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的MP[4-7]。德國(guó)報(bào)道MP的耐藥率為3%[8]；我國(guó)北京地區(qū)報(bào)道兒童MP的耐藥率>80%[9]。本研究中支原體肺炎患兒耐藥率為81.67%(98/120),可見本地區(qū)支原體耐藥現(xiàn)象亦十分嚴(yán)重。

引起微生物對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的主要機(jī)制是:①靶位改變: 基因突變或甲基化。②主動(dòng)外排。③藥物滅活。基因點(diǎn)突變導(dǎo)致的靶點(diǎn)改變是肺炎支原體對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的最重要原因。23S rRNA 結(jié)構(gòu)域V區(qū)和II區(qū)與抗生素直接結(jié)合的堿基點(diǎn)突變可導(dǎo)致抗生素與核糖體親和力下降而引起耐藥[10-15]。既往文獻(xiàn)報(bào)道的基因突變集中在23SrRNA V區(qū)2063或2064位點(diǎn)基因顛換或轉(zhuǎn)換,主要表現(xiàn)為A2063G、A2063C和A2064G發(fā)生點(diǎn)突變,以A2063G最為常見[16-18]。本研究中約90%耐藥MP株發(fā)生了2063位A→G(A2063G)的突變，少數(shù)MP耐藥株發(fā)生了 A2064G(約5%)、A2063C、C2617G/A 的突變，而且A2063G/C和 A2064G 的突變能引起 MP 對(duì)紅霉素產(chǎn)生高水平耐藥，并對(duì)其他大環(huán)內(nèi)酯類發(fā)生交叉耐藥。可見核糖體23S rRNA A2063G核苷酸點(diǎn)突變?nèi)允且鸱窝字гw對(duì)紅霉素耐藥的主要機(jī)制。

本研究顯示耐藥組發(fā)熱時(shí)間和給予大環(huán)內(nèi)酯類藥物(阿奇霉素)后發(fā)熱時(shí)間均較非耐藥組長(zhǎng)，提示耐藥組患兒病情相對(duì)更嚴(yán)重，發(fā)熱時(shí)間更長(zhǎng)。兩組間年齡、呼吸道癥狀時(shí)間、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞比例、C反應(yīng)蛋白、血沉、影像所見好轉(zhuǎn)時(shí)間、大環(huán)內(nèi)酯類藥物總療程等方面比較并無(wú)差異。耐藥組住院時(shí)間明顯延長(zhǎng)，考慮與耐藥組患者病程中發(fā)熱時(shí)間及使用大環(huán)內(nèi)酯類藥物后發(fā)熱時(shí)間均較非耐藥組患兒延長(zhǎng)有關(guān)。

在病程初期，在白細(xì)胞計(jì)數(shù)較正常升高的病例治療上，醫(yī)生往往更易選擇頭孢或青霉素類抗生素，因此大環(huán)內(nèi)酯類藥物的初始給藥時(shí)間較晚。初選頭孢及青霉素類藥物組，比初選大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的患兒用大環(huán)內(nèi)酯類藥物后發(fā)熱時(shí)間較短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示初選頭孢及青霉素類藥物對(duì)耐藥支原體肺炎患兒的發(fā)熱程度影響并不明顯。病程初期使用非有效抗生素(頭孢或青霉素類)者住院時(shí)間無(wú)明顯延長(zhǎng)，提示其對(duì)治療效果的影響不明顯。本研究提示非耐藥組患兒預(yù)后好于耐藥組，而耐藥組治療無(wú)效病例高于耐藥組，但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此部分病例為重癥耐藥支原體肺炎，其研究還有待于進(jìn)一步完善。目前支原體肺炎耐藥率較高，對(duì)于是否可繼續(xù)使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療仍有爭(zhēng)議[19]。目前國(guó)內(nèi)外治療選擇仍以阿奇霉素和紅霉素為主，必要時(shí)予腎上腺皮質(zhì)激素等免疫治療。

在耐藥支原體感染十分嚴(yán)重的現(xiàn)狀下，支原體肺炎治療過(guò)程中應(yīng)盡早使用不同的診斷方法，及時(shí)判斷病情程度，以減輕患兒組織器官的損害，縮短病程，盡量避免肺內(nèi)外并發(fā)癥的發(fā)生[20]。MP快速鑒定培養(yǎng)與直接藥敏試驗(yàn)方法標(biāo)本獲取容易，檢測(cè)技術(shù)操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果可為臨床診療提供科學(xué)依據(jù)。針對(duì)耐藥支原體感染的病原學(xué)和發(fā)病機(jī)制以及有效的治療仍有待于進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

銅川地區(qū)2015年支原體肺炎患兒對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，其耐藥機(jī)制主要與2063位A→G(A2063G)的點(diǎn)突變有關(guān)。非耐藥組患兒預(yù)后好于耐藥組。MP快速鑒定培養(yǎng)與直接藥敏試驗(yàn)方法標(biāo)本獲取容易，檢測(cè)技術(shù)操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果可為臨床診療提供科學(xué)依據(jù)，應(yīng)在臨床推廣應(yīng)用。

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(收稿： 2016-05-16； 修回： 2016-08-08； 編輯： 張文秀)

The infection of mycoplasma pneumoniae, detection and analysis of drug resistance in children

LIU Diaoxia1, ZHANG Xiaozan2, LI Yanqin1

(1.DepartmentofPediatrics,TongchuanMaternalandChildHealthCareCenter,Tongchuan727007,Shanxi,China;2.ClinicalLaboratory,TongchuanMaternalandChildHealthCareCenter,Tongchuan727007,Shanxi,China)

Objective To analyze the infection and drug resistance of mycoplasma pneumoniae in children, explore its clinical characteristics and genotyping feature, and provide a theoretical basis for the selection of antibiotic. Methods 120 children of mycoplasma pneumoniae pneumonia were enrolled. The infection of mycoplasma pneumoniae was explored by detection of mycoplasma pneumoniae antibody and nucleic acid. The MIC value of multiple antimicrobial drugs was tested. The drug-resistant strains was isolated. The children were divided into drug resistance group and non- drug resistance group by drug-resistant results. The clinical features drug resistance group and non- drug resistance group were compared. The gene sequence of 23SrRNA of drug-resistant strains and non- drug resistance group were detected.Results 98 cases were drug-resistant pneumonia according to susceptibility test results in vitro, which were highly resistant to macrolides .The time of fever and hospitalization in drug resistance group were longer than that of non-drug resistance group (P<0.05). The age, duration of symptoms of respiratory tract, white blood cell count (WBC), neutrophil percentage, C-reactive protein (CRP), erythrocyte sedimentation rate (ESR), the image seen better times, period of treatment with macrolides (ML) showed no statistical significance between the two groups. The prognosis was statistically significant (P<0.05) between drug resistance group and non-drug resistance group. The proportion of healed cases in non-drug resistance group was higher than that of the drug resistance group. The time of change the treatment with macrolide antibiotics was (5.2±1.8) d. The duration of respiratory symptoms, time of fever, white blood cell counts and other indicators were statistically significant in groups of different treatment. There were 90% of mutations occurred A2063G in drug-resistant strains and 5% occurred A2064G, A2063C and C2617G/A.Conclusion MP is widely prevalent in children and its resistance to MLs is serious in the region of Tongchuan of the year of 2015. Its principal mechanism of resistance were 2063 A→G (A2063G) of point mutations. Non-drug resistance group of children has a better prognosis than drug resistance groups. Rapid culture identification of MP and drug susceptibility testing meet clinical requires of easy collection and simple handling and provide scientific rationals for clinical diagnosis and treatment.

Mycoplasma pneumoniae； Infection； Children； Mechanism of drug resistance

陜西省科技攻關(guān)課題(CX14A016)

R 735+.2；R 725.6

A

10.3969/j.issn.1672-3511.2016.11.031