姚家奎，印曉靜，錢小麗，成紅霞

(江蘇省蘇北人民醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，江蘇揚州 225001)

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·經(jīng)驗交流·

Elecsys HBsAg COI灰區(qū)標本再分析探討

姚家奎，印曉靜，錢小麗，成紅霞△

(江蘇省蘇北人民醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，江蘇揚州 225001)

目的 探討電化學發(fā)光免疫分析(ECLIA)法乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)cut off指數(shù)(COI)灰區(qū)標本再次進行確證分析的臨床價值。方法 被檢血清標本均來自2014年1月至2015年3月該院就診的門診和住院患者，應用Elecsys HBsAg確證試驗對213例ECLIA法檢出HBsAg COI灰區(qū)標本進行再分析并對受檢標本HBV血清標志物兩對半(以下簡稱乙肝兩對半)模式進行回顧性分析。結(jié)果 213份標本中ECLIA法檢測HBsAg COI結(jié)果為0.80～0.99 31例，經(jīng)Elecsys HBsAg確證試驗陽性2例[6.45%(2/31)]；HBsAg COI結(jié)果為1.0～1.99弱反應性標本93例，經(jīng)Elecsys HBsAg確證試驗陽性92例[98.92%(92/93)]；HBsAg COI結(jié)果為2.0～6.99 89例，經(jīng)Elecsys HBsAg確證試驗均為陽性，陽性率為100.00%(89/89)；213例ECLIA法檢出HBsAg COI灰區(qū)標本經(jīng)Elecsys HBsAg確證試驗陽性183例，檢出6種乙肝兩對半模式，其中HBsAg、HBV e抗體(HBeAb)、HBV核心抗體(HBcAb)陽性模式155例，占大多數(shù)[72.77%(155/213)]；經(jīng)Elecsys HBsAg確證試驗陰性30份標本中檢出7種乙肝兩對半模式，其中HBeAb、HBcAb陽性模式16例，檢出率為7.51%(16/213)。結(jié)論 ECLIA法乙肝兩對半定量檢測HBsAg臨界或較低水平的弱反應性標本、乙型肝炎感染模式不常見的標本時需經(jīng)Elecsys HBsAg確證試驗再分析以防止假陰性或假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。

肝炎病毒， 乙型； 肝炎表面抗原，乙型； 電化學； 免疫測定； 乙型肝炎病毒表面抗原定量試驗； 乙型肝炎病毒表面抗原確證試驗

乙型肝炎病毒(HBV)血清標志物(以下簡稱乙肝兩對半)定量檢測是用來評估人體自身免疫系統(tǒng)對抗HBV能力的簡單、可靠的方法，其能幫助醫(yī)生監(jiān)測和評估患者抗病毒治療的應答情況，早期預測治療是否有效[1]。然而在具體操作過程中由于一些HBV低濃度攜帶者的低抗原量及檢測方法學所限等原因造成了HBV表面抗原(HBsAg)的漏檢和假陽性，不得不引起臨床和檢驗醫(yī)生的關注。近年來隨著檢驗技術的不斷發(fā)展，根據(jù)臨床需要及各自檢測方法優(yōu)勢來選擇經(jīng)濟、適用、結(jié)果可靠的檢驗方法，制定標準規(guī)范操作程序已成為必然。由于電化學發(fā)光免疫分析(ECLIA)法為定量檢測、操作簡單，亦可對乙肝兩對半模式進行確證試驗，且在乙型肝炎患者病情的動態(tài)觀察和藥物療效考核方面具有重要意義，已在臨床逐步推廣應用[2-3]。本研究探討了ECLIA法在乙肝兩對半定量試驗中HBsAg cut off指數(shù)(COI)灰區(qū)標本的主要模式及再次進行確證分析的臨床價值。

1 材料與方法

1.1 標本來源 所有被檢血清標本均來自2014年1月至2015年3月本院就診的門診和住院患者。

1.2 儀器及信息系統(tǒng) 德國Roche cobas 6000全自動生化分析儀、Roche RSA樣品前處理系統(tǒng)、北京智方LIS系統(tǒng)及cabas IT3000 solution軟件系統(tǒng)。

1.3 試劑 Roche cobas 6000全自動生化分析儀(ECLIA法)配套乙肝兩對半定量試劑、定標液1、定標液2、HBsAg確證試劑及HBsAgⅡ質(zhì)控品等均由德國羅氏診斷公司生產(chǎn)，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.4 方法 采集被檢者空腹靜脈血3 mL,經(jīng)Roche RSA樣品前處理系統(tǒng)簽收、離心、去除試管蓋后采用Roche cobas 6000全自動生化析儀分別對相應樣本進行檢測分析并對HBsAg臨界及弱反應性標本進行Elecsys HBsAg確證試驗再分析。為確保受檢血清標本與確認試劑、質(zhì)控試劑反應過程條件一致，確證試驗檢測前將Roche cobas 6000封閉3個檢測池，只保留1個檢測池。

1.5 檢測結(jié)果判定 乙肝兩對半定量檢測采用ECLIA法由Elecsys軟件自動通過比較樣本的反應產(chǎn)物產(chǎn)生的光電信號和定標液得出cut off值進行結(jié)果判定。HBsAg≥1.0 COI為有反應性，<1.0 COI為無反應性。Elecsys HBsAg確證試驗的樣本和陽性Ⅱ質(zhì)控品同時經(jīng)確認試劑、質(zhì)控試劑預處理30 min后經(jīng)Roche Modular cobas 6000全自動生化分析儀檢測COI，在審核檢測的有效性條件下(在確證試劑檢測中Elecsys Preci Control HBsAgⅡ的COI必須小于質(zhì)控試劑檢測的COI 50%)，若質(zhì)控試劑檢測的標本COI為100%，確證試劑檢測的標本COI 為X%，則結(jié)果解釋為X>50%，且質(zhì)控試劑檢測的COI ≥0.9確證試驗結(jié)果為無反應性；X<50%且質(zhì)控試劑檢測的COI≥0.9確證試驗結(jié)果為陽性。

2 結(jié) 果

2.1 ECLIA法與Elecsys HBsAg 確證試驗檢測HBsAg結(jié)果比較 213例ECLIA法檢出HBsAg COI臨界及弱反應性標本再次進行Elecsys HBsAg確證試驗結(jié)果比較見表1。

2.2 Elecsys HBsAg確證試驗陰、陽性標本乙肝兩對半模式分析 213例ECLIA法檢出HBsAg COI灰區(qū)標本經(jīng)Elecsys HBsAg 確證試驗陽性183例，檢出6種乙肝兩對半模式，其中HBsAg、HBV e抗體(HBeAb)、HBV核心抗體(HBcAb)陽性模式155例占大多數(shù)，檢出率為72.77%(155/213)；經(jīng)Elecsys HBsAg 確證試驗陰性30例，檢出7種乙肝兩對半模式，其中HBeAb、HBcAb陽性模式16例，檢出率為7.51%(16/213)。

表1 ECLIA法與Elecsys HBsAg 確證試驗檢測HBsAg結(jié)果比較

3 討 論

ECLIA法是將發(fā)光系統(tǒng)與免疫相結(jié)合以檢測抗原或抗體的方法，是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學發(fā)光免疫之后的新一代標記免疫技術，其具有操作簡便、試劑貯存有效期長、檢測速度快、靈敏度高(可達0.05 ng/mL)、線性范圍寬、應用范圍廣等特點[4]。有研究證實，單克隆捕捉抗體技術的測定方法不能檢測到HBsAg突變的重組株和自然突變株，而多克隆捕捉抗體的檢測技術對HBsAg突變株具有良好的識別能力，為避免HBsAg突變株引起的假陰性，Elecsys HBsAg Ⅱ定量試驗與確證試驗采用的是多克隆抗體。該檢測方法根據(jù)在選擇性壓力(由抗病毒治療或免疫系統(tǒng)本身引起)下，病毒可表達多種不同的HBsAg突變株，而一些HBsAg檢測試劑可能無法檢測到，Roche coche cobas 6000全自動生化分析儀的ECLIA法Elecsys HBsAgⅡ檢測試劑是特別針對檢測這些突變株而研發(fā)的，其檢測的特異性、靈敏度更高，線性范圍更寬[5-6]。本研究213份標本中ECLIA法檢測HBsAg COI結(jié)果為0.80～0.99 31例，經(jīng) Elecsys HBsAg確證試驗陽性2 例，COI值分別為0.924、0.890，占6.45%(2/31)；HBsAg COI結(jié)果為1.0～1.99 93例，經(jīng)Elecsys HBsAg確證試驗陽性92例[98.92%(92/93)]；HBsAg COI結(jié)果2.0～6.99 89例，經(jīng) Elecsys HBsAg確證試驗均為陽性，陽性率為100.00%(89/89)，表明ECLIA法檢出HBsAg COI <2.0標本應經(jīng)Elecsys HBsAgⅡ確證試驗再次分析，由于Roche coche cobas 6000全自動生化分析儀的Elecsys HBsAgⅡ檢測試劑具有上述優(yōu)勢，因而 HBsAg COI>2.0標本可以結(jié)合其他HBV標志物不必再次進行HBsAg確證試驗分析。所以對采用ECLIA法檢測的灰區(qū)樣本再用確診的方法進行確認分析，獲得的結(jié)果對臨床工作中試劑的選擇及乙型肝炎的診治具有指導價值。

近年來ECLIA法在一些醫(yī)院已經(jīng)被用于HBV血清標志物的檢測，是一種靈敏度和可信度較高的分析技術[7-8]。尤其HBsAg COI臨界及弱反應標本已被臨床和檢驗醫(yī)生高度關注，經(jīng)Elecsys HBsAgⅡ確證試驗檢測后結(jié)果將成為臨床醫(yī)生評價病情及療效的重要參考依據(jù)。本研究低濃度HBsAg標本中HBsAg、HBeAb、HBcAb結(jié)果有反應性，該模式標本共155例，檢出率最為多見[72.77%(155/213)]，在臨床絕大多數(shù)情況下，HBsAg和HBcAb同時存在，單獨存在的情況并不多見，本研究所有經(jīng)確證HBsAg低濃度弱反應性標本HBcAb均同時陽性，經(jīng)Elecsys HBsAg 確證試驗陰性標本30例，以模式HBeAb、HBcAb結(jié)果有反應性較多16例，檢出率為7.51%(16/213)。因而日常檢驗過程中由于方法學等因素不能檢測到低濃度HBsAg時若同時檢測HBcAb，結(jié)合HBV-DNA和前S蛋白等檢測作為HBV感染的佐證相關指標，完善各種模式的意義解釋，對于上述人群的流行病學篩查和臨床診斷會有較大幫助，特別是在保證輸血安全和控制醫(yī)院感染方面具有重要價值。另值得關注的是HBsAg與HBsAb同時存在的模式也占一定數(shù)量，共16例[7.51%(16/213)]，有研究表明，二者同時存在的內(nèi)在機制可能是HBV發(fā)生變異，但也說明在極少部分HBsAb陽性人群中仍存在較低水平的HBsAg不易檢出。李金明等[9]和徐克等[10]等研究表明，可能的解釋為其前S、S基因的突變，使得突變型HBsAg和針對野生型HBsAg的抗體同時產(chǎn)生不同亞型特異的HBsAb或新的HBV病毒株感染。因此，作者認為必須執(zhí)行乙肝兩對半檢測標準操作程序，對HBsAg灰區(qū)標本、可疑或乙肝兩對半模式不常見的標本需再次用靈敏度更高的ECLIA等方法復檢，甚至送到有條件的實驗室對檢測結(jié)果再次確證分析以防假陰性或假陽性出現(xiàn)。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.02.064

B

1673-4130(2016)02-0277-02

2015-06-28)

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