保旦鳳，唐松明，王如瀟，蘇錫鈞，蘇鴻雁

(1.大理大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，云南 大理 671003；2.大理大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,云南 大理 671000)

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瀾滄江水生絲孢菌資源調(diào)查*

保旦鳳1，唐松明2，王如瀟2，蘇錫鈞2，蘇鴻雁*

(1.大理大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，云南 大理 671003；2.大理大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,云南 大理 671000)

目的：對(duì)瀾滄江(中排鄉(xiāng)北-云嶺鄉(xiāng)北，海拔1554m―2003m)水生絲孢菌資源及其多樣性進(jìn)行調(diào)查。方法：2015年3月從瀾滄江支流及入江口采集沉水腐木700份，采用保濕培養(yǎng)的方法對(duì)水生真菌進(jìn)行培養(yǎng)，基于形態(tài)學(xué)特征對(duì)水生絲孢菌進(jìn)行鑒定。結(jié)果：分離獲得水生絲孢菌88種，通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定，鑒定出水生絲孢菌36屬58種，30種鑒定到屬，未鑒定到種。結(jié)論：瀾滄江水生絲孢菌資源豐富，物種多樣性較高，其中Sporoschismasaccardoi(1.86%)、Periconiaatra(1.86%)出現(xiàn)頻率相對(duì)較高。海拔對(duì)水生絲孢菌多樣性有影響。

水生絲孢菌；瀾滄江；資源調(diào)查；多樣性

1.前言

淡水真菌(Freshwater fungi)是指整個(gè)生活史或生活史部分階段依賴(lài)于淡水環(huán)境的真菌，是一個(gè)生態(tài)復(fù)合群，具有豐富的多樣性[1]。它包含子囊菌及其無(wú)性型、擔(dān)子菌、壺菌、卵菌、接合菌等[2]。水生真菌在有機(jī)物降解和水生生態(tài)系統(tǒng)營(yíng)養(yǎng)循環(huán)中起著重要作用[3,4]，主要是分解水體中植物殘?bào)w、纖維素和木質(zhì)素含量高的有機(jī)質(zhì)，并被水生動(dòng)物取食進(jìn)入食物鏈[5,6,7]，亦可以分解一些動(dòng)物組織。水生木棲真菌在木材分解過(guò)程中很重要，因?yàn)樗麄儺a(chǎn)生各種木材分解酶從而使木頭形成軟腐洞[4,6,8]。

絲孢類(lèi)真菌(Hyphomycetes)是一類(lèi)菌絲體發(fā)達(dá)，呈絮狀或絨狀，有絲分裂產(chǎn)孢的真菌，是無(wú)性真菌中的重要的類(lèi)群[9]。絲孢真菌菌絲體發(fā)達(dá)，有絲分裂產(chǎn)生分生孢子，生存環(huán)境較為廣泛，特別是凋落的腐枝葉中蘊(yùn)含著大量的絲孢菌物種資源。自從Igold在1942年首次報(bào)道了水生絲孢菌后，引起了世界上的真菌學(xué)家的極大興趣和廣泛研究。我國(guó)水生真菌的研究始于20世紀(jì)80年代。楊發(fā)蓉在研究云南“洱海湖體真菌類(lèi)群分布的研究”中，曾發(fā)現(xiàn)一種水生絲孢菌—?jiǎng)偯︽?，這是我國(guó)水生絲孢菌報(bào)道的首例[10]。直到本世紀(jì)，蔡磊[11]、胡殿明[12]、蘇鴻雁[13]等人對(duì)云南部分地區(qū)淡水真菌進(jìn)行研究，才報(bào)道了大量的子囊菌及其無(wú)性型。到2008年為止，已報(bào)道的水生絲孢菌有300多個(gè)種，分布在100多個(gè)屬內(nèi)[14]。

瀾滄江-湄公河全長(zhǎng)約4900公里，流經(jīng)柬埔寨、越南、老撾、緬甸、泰國(guó)和我國(guó)云南省，上游瀾滄江，發(fā)源于青藏高原的唐古拉山，流出中國(guó)后始稱(chēng)湄公河(Mekong River)。該區(qū)域總面積256.86萬(wàn)平方公里，總?cè)丝诩s3.2億。瀾滄江地處全球34個(gè)生物多樣性熱點(diǎn)地區(qū)，是歐亞大陸生物群落最富集的地區(qū)。而迄今為止，還沒(méi)有學(xué)者對(duì)瀾滄江水生絲孢菌資源進(jìn)行過(guò)全面的調(diào)查。本項(xiàng)目主要對(duì)部分瀾滄江段(中排鄉(xiāng)北-云嶺鄉(xiāng)北，海拔1554m―2003m)水生絲孢菌資源及其多樣性進(jìn)行調(diào)查分析。

2.材料和方法

2.1沉水腐木的采集

2015年3月分別沿瀾滄江(中排鄉(xiāng)北-云嶺鄉(xiāng)北，海拔1554m―2003m)下游往上游隨機(jī)采集腐木，選擇浸泡時(shí)間較長(zhǎng)，腐爛程度良好(以手指可以輕松捏陷、樹(shù)皮脫落)，直徑1-5厘米、長(zhǎng)20-30厘米的腐木各50份。采集好的腐木裝入自封塑料袋中，記錄采樣時(shí)間、地點(diǎn)，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行保濕培養(yǎng)。

2.2培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂18g，蒸餾水1000mL。

MEA培養(yǎng)基:麥芽浸膏30g，大豆蛋白胨3g，瓊脂18g，蒸餾水1000mL。

WA培養(yǎng)基:瓊脂條18g，蒸餾水1000mL。

以上培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌(121℃, 20min)后冷卻至50℃(以不燙手為宜)時(shí)加入終濃度為100μg/mL氨芐青霉素混勻，倒入平板備用。

2.3樣品的觀察

保濕培養(yǎng)一周后，將樣品置于GL-99BI連續(xù)變倍體視鏡下進(jìn)行觀察，在所觀察到的目標(biāo)菌株附近插上大頭針作為標(biāo)記。對(duì)所觀察到的絲孢菌用Nikon-SMZ1000進(jìn)行外部形態(tài)拍照。以無(wú)菌水、甘油等作為浮載劑，對(duì)所觀察到的真菌進(jìn)行制片，在OLYMPUS BX51顯微鏡下進(jìn)行繪圖、拍照、測(cè)量。

2.4水生絲孢菌的單孢分離

在體式鏡下鎖定目標(biāo)菌株，用削尖的無(wú)菌牙簽將分生孢子挑取下來(lái)，轉(zhuǎn)移到WA培養(yǎng)基上，保證每皿至少有7個(gè)分生孢子。室溫培養(yǎng)，24h后進(jìn)行觀察，將萌發(fā)的孢子轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基或MEA培養(yǎng)基上，用保鮮膜封口，室溫培養(yǎng)；同時(shí)挑取萌發(fā)的孢子制片，用OLYMPUS BX51顯微鏡拍照。以上操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。每周定期檢查菌落的生長(zhǎng)情況，若發(fā)現(xiàn)污染及時(shí)純化。

2.5拼圖

使用Photoshop軟件對(duì)菌種的外部形態(tài)和微觀結(jié)構(gòu)圖片進(jìn)行拼圖。

2.6形態(tài)學(xué)鑒定

對(duì)真菌在基質(zhì)上的著生情況、菌絲、孢子梗、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、分生孢子著生情況及分生孢子形態(tài)等特征進(jìn)行描述，根據(jù)形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)，主要參照相關(guān)文獻(xiàn)[15-17]。

3.結(jié)果與討論

3.1瀾滄江水生真菌多樣性

對(duì)采集的700份沉水腐木在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行保濕培養(yǎng)，一周后開(kāi)始不間斷觀察，采用形態(tài)學(xué)分類(lèi)方法進(jìn)行分類(lèi)鑒定，鑒定出水生絲孢菌36屬58種，其中30種鑒定到屬，未鑒定到種。瀾滄江中常見(jiàn)種為Sporoschismasaccardoi、Periconiaatra，檢出率分別為1.86%，1.86%。水生絲孢菌的結(jié)果統(tǒng)計(jì)如表1所示。

3.2瀾滄江水生絲孢菌各海拔內(nèi)的分布情況

由表2可以看出海拔在1500―1600m之間的水生絲孢菌有13屬18種，分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的14.44%和14.4%，1600―1700m間有36屬53種，分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的40%和42.4%，1700―1800m間有27屬37種，分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的30%和29.6%，1800―1900m間有9屬12種分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的10%和9.6%，1900―2000m間有5屬5種，分別占總檢出屬數(shù)和總檢出種數(shù)的5.56%和4%。由該數(shù)據(jù)可以看出1600―1700m之間的水生絲孢菌多樣性最為豐富，1900―2000m之間水生絲孢菌多樣性最低。

表1 瀾滄江水生絲孢菌資源調(diào)查結(jié)果統(tǒng)計(jì)

(注：檢出率指被檢樣本總數(shù)中某物種出現(xiàn)的百分率，檢出率(%)=(某個(gè)物種檢出次數(shù)/樣本總數(shù))×100%。)

表2 瀾滄江水生絲孢菌各海拔內(nèi)的分布情況

3.3討論

影響水生真菌群落及其多樣性的因素有很多，如溫度[18]、植被[19―20]、氣候帶[21―23]、水污染[20]、人為干擾[24]、真菌生長(zhǎng)基質(zhì)[25]等。此次研究選取的為瀾滄江不同海拔的地點(diǎn)，共鑒定出水生絲孢菌36屬58種，30種鑒定到屬，未鑒定到種，其中常見(jiàn)種為Sporoschismasaccardoi、Periconiaatra，檢出率分別為1.86%，1.86%。通過(guò)數(shù)據(jù)分析，海拔為1600―1700m之間的水生絲孢菌的多樣性最為豐富，1900―2000m之間的水生絲孢菌多樣性最低，說(shuō)明不同海拔水生絲孢菌多樣性不同，而且不同海拔的群落結(jié)構(gòu)也不同，這和Sherear[26]2015年的研究結(jié)果一致。

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(責(zé)任編輯 徐成東)

Investigation on the Resources of Freshwater Hyphomycetes from the Lancang River

BAO Danfeng, TANG Songming, WANG Ruxiao, SU Xijun & SU Hongyun

(CollegeofAgricultureandBiologicalSciences,DaliUniversity,Dali, 671003,YunnanProvince;CollegeofAgricultureandBiologySciences,DaliUniversity,Dali, 671000,YunnanProvince)

Objective: To investigate diversity and resourses of hyphomycetes in Lancang River(middle row rural North-North Yunling Township, altitude 1554m-2003m). Method: In March 2015 collected from tributaries of the Lancang River and the estuary submerged rotten wood 700 samples, using the moisturizing incubation method to incubate the freshwater hyphomycetes and identified them under the morphological characters. Results: Isolated hyphomycetes 88 kinds of raw silk cinerea, under the morphological characters, the investigation indicated that there are 36 genera 58 species of hyphomycetes, 30 species not identified . Conclusion: The rich resources of Lancang River Hyphomycetes silk cinerea, highspecies diversity,whichSporoschismasaccardoi,Periconiaatrafrequency of relatively high detection rate of 1.86%, 1.86% respectively. Altitude of raw silk water sp diversity affected

Lancang River; Hyphomycetes; Resourse investigated; Diversity

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：31460015；云南省中青年學(xué)術(shù)技術(shù)帶頭人后備人才培養(yǎng)計(jì)劃資助項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：2012HB-042。

2016 - 06 - 07

保旦鳳(1994―)，女，在讀本科生，研究方向：微生物及疾病。

蘇鴻雁(1967―)，女，教授，研究方向：菌物學(xué)。

Q949.323.2

A

1671 - 7406(2016)09 - 0033 - 06