孫士浩++都玉蓉++祁得勝++林鵬程

摘要：為明確寬葉獨行菜（Lepidium latifolium L.）提取物中促胃腸動力的有效部位，在小鼠腹腔注射硫酸阿托品的方法制造胃腸動力障礙模型，測定胃內(nèi)色素殘留率和小腸推進比，并檢測血漿胃動素（MTL）和血漿胃泌素（GAS）的含量。結(jié)果表明，正丁醇部位對小鼠胃內(nèi)色素殘留率的影響與模型對照組比較有顯著差異，水提取部位、乙酸乙酯部位有極顯著差異；水提取部位對小腸推進比的影響與模型對照組比較有顯著差異，乙酸乙酯部位有極顯著差異；水提取部位、正丁醇部位對小鼠MTL含量影響與模型對照組比較有顯著差異，乙酸乙酯部位有極顯著差異，乙酸乙酯部位對小鼠GAS含量的影響與模型對照組比較有顯著差異。初步判斷乙酸乙酯部位為寬葉獨行菜促胃腸動力的有效部位，其作用機制還有待進一步研究。

關(guān)鍵詞：寬葉獨行菜（Lepidium latifolium L.）；極性部位；胃腸動力；血漿胃動素（MTL）；血漿胃泌素（GAS）

中圖分類號：S567.23+9；R915 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）18-4790-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.039

寬葉獨行菜（Lepidium latifolium L.）屬十字花科多年生草本植物，又稱大辣辣、止痢草，在中國主要產(chǎn)于內(nèi)蒙古、西藏、青海等地，世界各地均有分布，生在村旁、田邊、山坡及鹽化草甸，海拔1 800～ 4 250 m；全草入藥，有清熱燥濕作用，治菌痢、腸炎[1]。試驗用寬葉獨行菜不同極性部位提取物比較其對小鼠胃排空、腸推進的作用，并觀察其對血漿胃動素、胃泌素的影響，旨在為寬葉獨行菜進一步的研究與開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

昆明種小鼠70只，體重（20±2） g，雌雄兼用，試驗動物生產(chǎn)許可證號為SC×K（青）2005-0001，由青海省地方病預(yù)防控制所動物中心提供；寬葉獨行菜采自青海省格爾木市大格勒鄉(xiāng)。

藥品和試劑：藍(lán)色葡聚糖2000（西寧寶信生物科技有限公司）；多潘立酮片（嗎丁啉）（西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，批次：H109100003）；肝素鈉（山東東營愛博生物制品有限公司生產(chǎn)，批號：12100613）；大鼠胃動素（MTL）ELISA檢測試劑盒（96 T）、大鼠胃泌素（GAS）ELISA檢測試劑盒（96 T）（上海雅浦生物科技有限公司）。

儀器：RE-52B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；高速離心機，上海醫(yī)分儀器制造有限公司；752型紫外可見分光光度計，上海菁華科技儀器有限公司；YP15KN型電子天平，上海精密科學(xué)有限公司；離心沉淀機，上海醫(yī)分儀器制造有限公司；酶標(biāo)儀Xmark Microplate Spectrophotometer，上海研域?qū)嶒炇以O(shè)備有限公司；HW-1000超級恒溫水浴鍋，成都泰盟軟件有限公司；高精度微量加樣器（0.5～10 μL、2～20 μL、20～200 μL），大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.2 方法

1.2.1 寬葉獨行菜不同極性部位的制備 將寬葉獨行菜全草陰干并粉碎后，用水提取2次（料液比1∶12，80 ℃，1 h），合并提取液，減壓濃縮后得到黑褐色黏稠的浸膏，此為水提取部位。取水提取部位浸膏溶于適量純水中，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取2次，合并同一部位濾液，減壓濃縮，得到浸膏分別為石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位。

由于寬葉獨行菜的半數(shù)致死量為LD50=500 g/kg[2]，且通過預(yù)試驗的結(jié)果得出1/20LD50即給予20 g小鼠0.5 g/d生藥為最佳給藥劑量，故將所得各部位浸膏配制成1 mL含1.67 g生藥材的溶液，放置4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 動物分組與給藥 將70只小鼠隨機分為7組，每組10只，雌雄各半，分別為空白對照組（生理鹽水）、模型對照組（阿托品）、陽性對照組（阿托品+嗎丁啉）、受試藥物組Ⅰ（阿托品+水提取部位）、受試藥物組Ⅱ（阿托品+石油醚部位）、受試藥物組Ⅲ（阿托品+乙酸乙酯部位）、受試藥物組Ⅳ（阿托品+正丁醇部位）。

小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后稱重并開始灌胃給藥，由試驗動物與人的體表面積比等效劑量換算表[3]進行換算，陽性對照組給嗎丁啉混懸液（0.8 mg/mL），受試藥物組Ⅰ給水提取部位溶液（283 mg/mL），受試藥物組Ⅱ給石油醚部位溶液（7 mg/mL），受試藥物組Ⅲ給乙酸乙酯部位溶液（4.3 mg/mL），受試藥物組Ⅳ給正丁醇部位溶液（5 mg/mL），空白組和模型組給生理鹽水，均按0.3 mL/20 g灌胃，灌胃前將各部位藥物水浴加熱至37 ℃并混勻，每天灌胃1次，連續(xù)5 d后禁食不禁水24 h。于第七天正常灌胃藥物后，對除空白組外的各組小鼠均腹腔注射硫酸阿托品（0.02 mg/20 g），空白組腹腔注射等體積的生理鹽水[4]，20 min后對所有小鼠均灌服0.3 mL藍(lán)色葡聚糖2000淀粉糊狀物，30 min后脫頸處死小鼠。取主動脈血0.5 mL，注入含肝素鈉的離心管中，混勻，4 ℃，3 000 r/min離心30 min，取上清液，置-20 ℃下保存；之后剖開腹腔，結(jié)扎胃賁門和幽門后，迅速從賁門處至回腸末端分離胃腸，取出后放于實驗臺上，剪掉全胃并將所有腸段自然拉直鋪平。用4 mL純水將胃內(nèi)殘留物充分洗于10 mL離心管中，以 4 000 r/min離心20 min，取上清液在波長620 nm處測其吸光度，求其各組平均值；另取3支離心管均放入0.3 mL葡聚糖藍(lán)2 000淀粉糊狀物，加入4 mL純水后相同條件下離心，取上清液測定的吸光度，將3支離心管的吸光度的平均值作為標(biāo)準(zhǔn)值，胃內(nèi)色素殘留率=（各試驗組胃內(nèi)色素殘留物吸光度平均值/標(biāo)準(zhǔn)值）×100%。同時，量取自幽門切跡至藍(lán)色葡聚糖2000淀粉糊狀物到達(dá)處為藍(lán)色葡聚糖2000推進距離，測量自幽門切跡至回盲部的距離為小腸全長小腸推進比=（藍(lán)色葡聚糖2000推進距離/小腸全長）×100%[5]。取待測血漿，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明操作，檢測血漿MLT及GAS含量。結(jié)果均用x±s表示，數(shù)據(jù)用SPSS18.0軟件中的LSD-t檢驗進行處理，以α=0.05為檢驗水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 寬葉獨行菜不同極性部位對胃排空、腸推進的影響

在對小鼠胃內(nèi)色素相對殘留率的比較中，與空白對照組比較，模型組有顯著差異（P<0.05）；與模型對照組比較，石油醚部位無明顯效果，陽性對照、水提取部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位均有顯著差異（P<0.05），其中，陽性對照、水提取部位、乙酸乙酯部位的胃內(nèi)色素殘留率達(dá)到極顯著水平（P<0.01）；與陽性對照組相比，乙酸乙酯部位與水提取部位差異不顯著（P>0.05），正丁醇部位差異顯著（P<0.05），石油醚部位差異極顯著（P<0.01）。

在小腸推進比的比較中，與空白對照組比較，模型組有顯著差異（P<0.05）；與模型組比較，石油醚部位無明顯效果，陽性對照、水提取部位、乙酸乙酯部位均有顯著差異（P<0.05），其中，乙酸乙酯部位達(dá)到極顯著水平（P<0.01）；與陽性對照組相比，乙酸乙酯部位差異不顯著（P>0.05），水提取部位差異顯著（P<0.05），石油醚部位差異極顯著（P<0.01），如表1所示。

2.2 寬葉獨行菜不同極性部位對胃腸激素的影響

在血漿胃動素（MTL）含量的比較中，與空白對照組比較，模型組有顯著差異（P<0.05）；與模型組比較，陽性對照、水提取部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位均有顯著差異（P<0.05），其中，乙酸乙酯部位達(dá)到極顯著水平（P<0.01）；與陽性對照組相比，乙酸乙酯部位差異不顯著（P>0.05），水提取部位和正丁醇部位差異顯著（P<0.05），石油醚部位差異極顯著（P<0.01）。

在血漿胃泌素（GAS）含量的比較中，與空白對照組比較，模型組有顯著差異（P<0.05）；與模型組比較，乙酸乙酯部位有顯著差異（P<0.05）；與陽性對照組相比，乙酸乙酯部位有顯著差異（P<0.05），其余各部位組有極顯著差異（P<0.01），如表2所示。

3 討論

近年來，人們的飲食結(jié)構(gòu)及生活規(guī)律發(fā)生了顯著的改變，致使胃腸動力障礙性疾病成為消化系統(tǒng)中發(fā)病率最高的疾病之一，嚴(yán)重影響人們的身體健康和生活質(zhì)量。目前就胃腸動力障礙性疾病的發(fā)病機制沒有統(tǒng)一的認(rèn)識，盡管在部分領(lǐng)域有一定的研究進展，但不能說明胃腸動力障礙性疾病確切的發(fā)病機制[6]。

機體的胃排空與腸推進率是反映胃腸運動綜合功能的一項重要指標(biāo)，也是最為直觀和有效的研究方法[7]；MTL被公認(rèn)為啟動胃腸收縮活動的腦腸肽，在消化間期呈周期性釋放，通過作用于腸道神經(jīng)系統(tǒng)中的胃動素神經(jīng)元，觸發(fā)胃腸道消化間期移行性復(fù)合運動（Migrating motor complex，MMC）Ⅲ相的發(fā)生，引起胃大幅度的收縮和小腸節(jié)律性的蠕動[8]；GAS主要由胃竇部G細(xì)胞分泌，有松弛幽門括約肌、促進胃腸運動的作用[9]；功能性消化不良（FD）患者血漿MTL濃度明顯低于正常人、血漿GAS水平變化明顯，一般認(rèn)為胃腸激素水平的變化可能是FD型胃腸運動功能障礙的原因[10]。

阿托品是一種M膽堿受體阻斷劑，其通過抑制乙酰膽堿的釋放降低胃腸道平滑肌的興奮性，從而降低平滑肌蠕動的幅度和頻率[11]。本研究采用腹腔注射阿托品造胃腸動力障礙模型，并以小鼠胃排空與腸推進率、血漿MTL、GAS水平為考察指標(biāo)，旨在篩選寬葉獨行菜提取物中促胃腸動力作用的有效部位。試驗結(jié)果表明，模型組在胃排空、腸推進及MTL、GAS方面與空白組比較均有顯著差異，說明阿托品致胃腸動力障礙模型建立成功。其提取物中水提取部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能使小鼠胃排空加快，且水提取部位和乙酸乙酯部位效果最為顯著，在小腸推進速率方面，乙酸乙酯部位可顯著增強小鼠小腸推進率，故推測乙酸乙酯部位促胃腸運動的作用機理可能是通過對抗阿托品對M膽堿受體的阻斷，增加胃腸道乙酰膽堿分泌來實現(xiàn)的，其確切作用機制需進一步研究證實；小鼠血漿胃動素（MTL）和胃泌素（GAS）的水平，初步確定了乙酸乙酯部位在胃腸激素方面具有良好的改善作用，其對胃腸動力的促進作用可能與其可提高MTL水平有關(guān)。關(guān)于寬葉獨行菜的國內(nèi)外最新文獻(xiàn)中，大多研究其化學(xué)成分和抗寒、抗鹽等特性[12，13]，對該屬植物在藥用方面的文獻(xiàn)也僅限于中藥典籍記載和少量研究報道，其促進胃腸運動及治療胃腸動力障礙性疾病方面的研究還未見報道，因此，本研究結(jié)果為能充分利用這一資源，開發(fā)促胃腸動力中藥新藥奠定了良好的前期基礎(chǔ)，其藥效成分和藥理機制還需進一步研究和探討。

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