孫潤蛟　金仙玉　劉桂香　王文建　劉言厚　高言國

人附睪分泌蛋白4在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義*

孫潤蛟①金仙玉②劉桂香①王文建③劉言厚①高言國④

目的：通過檢測人附睪分泌蛋白4（HE4）在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平，觀察HE4與不同臨床及病理特征的相關(guān)性，探討其在子宮內(nèi)膜癌診斷、治療及預(yù)后中的臨床意義。方法：應(yīng)用即用型免疫組織化學(xué)染色兩步法對32例經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為子宮內(nèi)膜癌的石蠟標(biāo)本進(jìn)行HE4檢測。分析HE4表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌FIGO分期、病理類型、組織學(xué)分級、肌層侵犯深度、腫瘤的大小和年齡的關(guān)系等各組間的差異，分析其與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果：（1）HE4陽性顆粒主要定位在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)上，在32例子宮內(nèi)膜癌組織中的HE4的陽性表達(dá)率較高，為87.5%。（2）HE4在組織學(xué)分級為高分化組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率及強(qiáng)度均高于中低分化組（P<0.05）。（3）HE4蛋白在晚期子宮內(nèi)膜癌組織中陽性表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度均高于早期組（P<0.05）。（4）HE4蛋白在子宮內(nèi)膜癌的陽性表達(dá)與年齡、病理分型、肌層侵犯深度及腫瘤大小均無關(guān)（P>0.05）；但在HE4強(qiáng)陽性表達(dá)程度方面，深肌層浸潤者強(qiáng)陽性表達(dá)（61.5%）多于無深肌層浸潤者（36.8%），其直徑≥2 cm的腫瘤強(qiáng)陽性表達(dá)（61.1%）高于直徑<2 cm的腫瘤（28.6%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：HE4基因的高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的侵襲、進(jìn)展等方面關(guān)系密切，可以作為腫瘤侵襲進(jìn)展的標(biāo)志以及評估子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)。

人附睪分泌蛋白4； 子宮內(nèi)膜癌； 免疫組化法； 預(yù)后

First-author’s address：The Central Hospital of Zhuanghe，Zhuanghe 116400，China

眾所周知，子宮內(nèi)膜癌是原發(fā)于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，是女性生殖道最常見的惡性腫瘤之一，占女性全身惡性腫瘤的7%?？砂l(fā)生于任何年齡，平均發(fā)病年齡為60歲，其中50歲以上女性發(fā)病居多。近些年由于生存年齡的增加、外源性雌激素的廣泛使用及內(nèi)分泌疾病的增加，以及人們保健意識的增強(qiáng)，在世界范圍內(nèi)發(fā)病率有上升趨勢，同時(shí)平均發(fā)病年齡也有低齡化的趨勢。治療方式總的原則是以手術(shù)為主，術(shù)后依據(jù)手術(shù)分期以及高危因素決定是否進(jìn)一步輔以放化療或內(nèi)分泌治療等。早期發(fā)現(xiàn)，治愈率高，預(yù)后良好；但晚期及復(fù)發(fā)性子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后不良，死亡率高。

眾多研究表明，子宮內(nèi)膜癌是一個(gè)復(fù)雜的過程，它的病因機(jī)制目前尚未完全闡明，分子遺傳學(xué)研究支持不同類型的子宮內(nèi)膜癌在發(fā)生發(fā)展過程中有不同的遺傳學(xué)改變這一假說：Ⅰ型出現(xiàn)DAN錯(cuò)配修復(fù)基因，PTEN，K-ras基因的變化，Ⅱ型則經(jīng)常出現(xiàn)P53和HER-2基因突變和擴(kuò)增[1]。所以，免疫組化在子宮內(nèi)膜癌的診斷中具有愈來愈重要的作用，如判斷預(yù)后及影響因素、指導(dǎo)術(shù)后內(nèi)分泌治療或化療等。

人附睪分泌蛋白4（HE4）作為WAP四硫化核心域2（WFDC2），是人類血清中分泌的小分子糖蛋白。作為血清學(xué)指標(biāo)，經(jīng)多位學(xué)者證實(shí)，它對女性卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌及宮頸癌均有診斷意義?？梢詥为?dú)或結(jié)合CA125成為檢測子宮內(nèi)膜癌的有效生物指標(biāo)。一項(xiàng)新的研究發(fā)現(xiàn)：HE4作為子宮內(nèi)膜癌的腫瘤標(biāo)志物，它的敏感性和特異性在診斷預(yù)后和疾病的監(jiān)測中，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最敏感最準(zhǔn)確的子宮內(nèi)膜癌標(biāo)志物[2]。很多證據(jù)表明子宮內(nèi)膜癌組織中HE4 mRNA和蛋白表達(dá)顯著增加[3-7]。而研究中也證實(shí)HE4在密切關(guān)聯(lián)的階段組織中的表達(dá)與血清中HE4的表達(dá)一致，血清中HE4水平能代表子宮內(nèi)膜癌組織中HE4的表達(dá)水平[8-9]，推測這與腫瘤組織局部分泌HE4增加及負(fù)荷加重有關(guān)。但目前大多數(shù)研究集中在血清學(xué)檢測的開發(fā)和改進(jìn)及HE4與盆腔良性疾病的鑒別診斷中。

本研究通過免疫組化檢測HE4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)。并分析HE4表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌FIGO分期，病理類型，組織學(xué)分級，肌層侵犯深度，腫瘤的大小和年齡的關(guān)系，探討其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 收集大連市中心醫(yī)院2011年1月1日-2014年2月18日行子宮切除后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為子宮內(nèi)膜癌的標(biāo)本蠟塊共32例。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）子宮內(nèi)膜癌術(shù)前行激素治療者；（2）術(shù)前行化療或放療；（3）同時(shí)合并其他惡性腫瘤者。32例子宮內(nèi)膜癌，年齡42～80歲，中位年齡56歲；根據(jù)世界衛(wèi)生組織提出的年齡劃分法，青、中年組（<60歲）18例，老年組（≥60歲）14例；組織學(xué)分級高分化組病例8例，中-低分化組病例24例；按照FIGO分期（2009）早期（Ⅰ～Ⅱ期）25例，晚期（Ⅲ～Ⅳ期）7例；子宮內(nèi)膜腺癌23例，特殊類型子宮內(nèi)膜癌9例，其中包括子宮內(nèi)膜漿液性腺癌4例，漿乳伴透明細(xì)胞癌1例，鱗腺癌2例，腺癌伴部分透明細(xì)胞癌2例；肌層侵犯深度<1/2者19例，≥1/2者13例；腫瘤大小<2 cm者14例，≥2 cm者18例。

1.2主要試劑與方法

1.2.1主要試劑 HE4鼠抗人單克隆抗體、免疫組化二步法試劑盒，防脫片劑APES、DAB試劑等分別于北京中山金橋生物科技有限公司購買。

1.2.2免疫組織化學(xué) 采用免疫組化兩步法檢測HE4蛋白的表達(dá)。嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。石蠟包埋組織以3～4 μm連續(xù)切片石蠟包埋組織；常規(guī)脫蠟和水化；孵育；高壓抗原修復(fù)；滴加1滴或50 μL的I抗（鼠抗人附睪蛋白4單克隆抗體），在室溫下孵育1 h；PBS緩沖液沖洗；滴加通用型IgG抗體-Fab段-HRP多聚體，室溫孵育10～15 min。PBS液沖洗后滴加2滴或100 μL新鮮配制的DAB顯色劑；自來水沖洗干凈，過蒸餾水。蘇木素復(fù)染2 min。蒸餾水沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。以PBS代替I抗作陰性對照，上皮性漿液性卵巢惡性腫瘤陽性切片作HE4免疫組化染色的陽性對照。

1.3判定標(biāo)準(zhǔn) 光學(xué)顯微鏡400倍下每張切片隨機(jī)選取10個(gè)視野的癌細(xì)胞，根據(jù)染色的陽性細(xì)胞百分比分為四級：<10%、10%～24%、25%～49%、50%，分別評為0、1、2、3分。根據(jù)陽性細(xì)胞染色深淺程度，將不顯色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別評為0、1、2、3分，目前多采用積分綜合計(jì)量，兩者得分相乘作為該切片的最終結(jié)果：<3分為陰性，>4分為陽性，>6分為強(qiáng)陽性。病理切片分別由3位高年資病理醫(yī)師輪流讀片評定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對HE4在不同子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)差異進(jìn)行相關(guān)性分析，計(jì)量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1HE4在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá) HE4陽性顆粒主要定位在細(xì)胞膜及細(xì)胞漿上；著色呈棕黃色或棕褐色；視野內(nèi)陽性細(xì)胞呈點(diǎn)、片狀分布，見圖1～5。在32例癌組織中的HE4陽性13例（陽性表達(dá)率為40.6%），強(qiáng)陽性15例（陽性表達(dá)率為46.9%），總陽性表達(dá)率為87.5%。

圖1　HE4在ⅠB1期子宮內(nèi)膜鱗腺癌中呈陰性表達(dá)（×400）

圖2　HE4在ⅠB2期子宮內(nèi)膜腺癌組織中呈陰性表達(dá)（×400）

圖3　HE4在ⅢA3期子宮內(nèi)膜漿液性乳頭樣腺癌組織中呈陽性表達(dá)（×400）

圖4　HE4在ⅢA3期子宮內(nèi)膜漿液性乳頭狀腺癌伴部分透明細(xì)胞癌中呈強(qiáng)陽性表達(dá)（×400）

圖5　HE4在ⅡB2-3期子宮內(nèi)膜腺癌中呈強(qiáng)陽性表達(dá)（×400）

2.2HE4在不同臨床病理特征的子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)

2.2.1子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與組織學(xué)分級的關(guān)系 HE4在組織學(xué)分級分別在高、中-低分化組的子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率為62.5%、95.8%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=8.253，P=0.004）。HE4在分化程度好的高分化中多呈弱陽性表達(dá)或陰性表達(dá)，隨著組織學(xué)分級增加，表達(dá)強(qiáng)度也顯著增加。HE4在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)強(qiáng)度和組織學(xué)分級為正相關(guān)關(guān)系（r=0.477，P=0.018）。見表1。

2.2.2子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與臨床分期的關(guān)系 標(biāo)本按照FIGO 2009手術(shù)-病理分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，因Ⅱ期病例少，僅3例，沒有Ⅳ期病例，將早期（Ⅰ～Ⅱ期）和晚期（Ⅲ～Ⅳ期）子宮內(nèi)膜癌組織HE4水平進(jìn)行比較分析，總陽性表達(dá)率分別為84.0%、100%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=7.515，P=0.009）。而隨著分期的進(jìn)展，組織中HE4蛋白的表達(dá)程度比早期增強(qiáng)，提示HE4的表達(dá)程度與臨床分期呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.238，P=0.026）。見表2。

表1　子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與組織學(xué)分級的關(guān)系　例（%）

表2　子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與臨床分期的關(guān)系 例（%）

2.2.3子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與深肌層浸潤的關(guān)系 HE4在有深肌層浸潤的子宮內(nèi)膜癌組織中與無深肌層浸潤者總陽性表達(dá)率分別為84.6%、89.5%，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=0.441，P=0.802），提示HE4的表達(dá)程度與深肌層浸潤無關(guān)系（r=0.117，P=0.067）。但在表達(dá)程度上，HE4在深肌層浸潤者強(qiáng)表達(dá)（61.5%）多于無深肌層浸潤者（36.8%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

表3　子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與深肌層浸潤的關(guān)系 例（%）

2.2.4子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與腫瘤直徑大小的關(guān)系 HE4在腫瘤直徑大小≥2 cm者陽性表達(dá)率（94.4%）高于腫瘤直徑<2 cm者（78.6%），兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=3.66，P=0.16），提示HE4的表達(dá)程度與腫瘤直徑大小無關(guān)系（r=0.125，P=0.13）。但在兩組強(qiáng)表達(dá)比較中，HE4在腫瘤直徑大小≥2 cm者（61.1%）高于腫瘤大小<2 cm者（28.6%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

表4　子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與腫瘤直徑大小的關(guān)系 例（%）

2.2.5子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與年齡的關(guān)系 HE4在<60歲和≥60歲的子宮內(nèi)膜癌組織中，總陽性率分別為83.3%、92.9%，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=3.817，P=0.371），提示HE4的表達(dá)程度與年齡無關(guān)系（r=0.311，P=0.16），見表5。

表5　子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與年齡的關(guān)系　例（%）

2.2.6子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與組織病理類型的關(guān)系 32例研究的樣本中，子宮內(nèi)膜腺癌23例，特殊類型9例，其中包括子宮內(nèi)膜漿液性腺癌4例，漿乳伴透明細(xì)胞癌1例，腺鱗癌2例，腺癌伴部分透明細(xì)胞癌2例。HE4在腺癌及特殊類型子宮內(nèi)膜癌組織中總陽性率分別為87.0%、88.9%，兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=0.384，P=0.825），提示HE4的表達(dá)程度與組織病理類型無關(guān)系（r=0.099，P=0.36），見表6。

表6　子宮內(nèi)膜癌組織中HE4表達(dá)與的關(guān)系　　例（%）

3　討論

HE4基因又名WFDC2（WAP四二硫化物核心域2），是乳清酸蛋白（WAP）結(jié)構(gòu)域家族蛋白中的一員，位于20q12-q1312，全長約12 kb，有5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子組成，位點(diǎn)包含14個(gè)編碼WAP同源蛋白的基因。分子結(jié)構(gòu)中包含特征性WAP結(jié)構(gòu)域。Chhikara等[10]研究證實(shí)，HE4是一種新的跨類蛋白酶抑制劑。分析同屬于4-DSC家族中具有WAP結(jié)構(gòu)的蛋白酶抑制劑如SLPI（分泌型白細(xì)胞蛋白酶抑制因子），推測HE4可能會有助于抵抗蛋白水解性質(zhì)的微生物毒力因子、參與免疫防御，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。

有研究認(rèn)為子宮內(nèi)膜癌中頻繁基因擴(kuò)增的熱點(diǎn)是染色體20q、HE4存在區(qū)和WAP，提供一個(gè)潛在的HE4表達(dá)增加的機(jī)制[11-12]。Micci等[12]表明，20q的獲得是一個(gè)子宮內(nèi)膜癌中的常見異常。許多癌基因通過基因擴(kuò)增來實(shí)現(xiàn)高水平的表達(dá)。人類中HE4、SLPI（分泌型白細(xì)胞蛋白酶抑制因子）和其他幾個(gè)在20q12-13的WAP成員在人體某個(gè)區(qū)域經(jīng)常放大各種癌癥[12-13]。這些結(jié)果表明，體細(xì)胞遺傳物質(zhì)的獲得可能是一種機(jī)制，通過這種機(jī)制HE4在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高水平表達(dá)。

在郭冰沁等[14]的研究中采用小鼠異種移植模型測量體內(nèi)癌細(xì)胞擴(kuò)散中發(fā)現(xiàn)HE4超表達(dá)顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖、細(xì)胞入侵能力、克隆性生長和子宮內(nèi)膜癌異種移植中的腫瘤生長等惡性表型；同時(shí)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，HE4超表達(dá)促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌異種移植在SCID鼠中的增長，這證明HE4超表達(dá)直接影響子宮內(nèi)膜癌腫瘤的進(jìn)展。因此，該研究認(rèn)為HE4不是癌細(xì)胞的副產(chǎn)品，也不是惡性腫瘤的替代標(biāo)志，它可能是子宮內(nèi)膜癌發(fā)展的致瘤或腫瘤促進(jìn)因素[15]。

房青等[16]在卵巢癌的研究中也發(fā)現(xiàn)，HE4-siRNA能有效地特異性下調(diào)卵巢癌細(xì)胞內(nèi)HE4mRNA和蛋白表達(dá)，能顯著抑制侵襲率，但他的研究結(jié)果提示HE4能同時(shí)抑制細(xì)胞的增殖活力下降約40%，提示HE4有可能成為卵巢癌轉(zhuǎn)移防止的潛在靶點(diǎn)[16]?，F(xiàn)在已經(jīng)有將PHE4-652作為啟動(dòng)子應(yīng)用于卵巢癌的靶向性基因治療的研究[17]。但目前還沒有將HE4應(yīng)用于子宮內(nèi)膜癌治療方面的報(bào)道或研究。

HE4在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)，1991年Kirchhoff對HE4蛋白組織定位，結(jié)果顯示正常組織HE4主要分布在生殖系統(tǒng)中的上皮細(xì)胞如曲精細(xì)管、附睪、輸精管、輸卵管上皮細(xì)胞和子宮內(nèi)膜。除了卵巢漿液性癌中高表達(dá)外，其他的惡性腫瘤如子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌也中度表達(dá)，而胃腸道和泌尿道腫瘤則表達(dá)較低。Drapkin等[18]及Galgano等[19]在子宮內(nèi)膜癌組織及細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)HE4 mRNA和HE4蛋白的明顯高表達(dá)，文獻(xiàn)[3]研究認(rèn)為HE4具備成為子宮內(nèi)膜癌的腫瘤標(biāo)記物的候選基因。本組應(yīng)用免疫組化研究子宮內(nèi)膜癌組織中HE4的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HE4陽性顆粒主要定位在細(xì)胞膜及細(xì)胞漿上；著色呈棕黃色或棕褐色；視野內(nèi)陽性細(xì)胞呈點(diǎn)、片狀分布。32例子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)率均較高，總陽性表達(dá)率為87.5%，與文獻(xiàn)[19]報(bào)道的90%基本一致，這也證實(shí)HE4可以作為子宮內(nèi)膜癌的高敏感性的腫瘤標(biāo)記物。

HE4表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理因素的關(guān)系，目前各家學(xué)者對HE4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)研究大致相同，認(rèn)為血清HE4水平與手術(shù)病理分期、淋巴轉(zhuǎn)移、肌層浸潤、宮頸轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，并在術(shù)前預(yù)測、評估及術(shù)后監(jiān)測等方面具有良好的價(jià)值。報(bào)道結(jié)果不一致的是在HE4在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)水平的相關(guān)因素中，大多數(shù)認(rèn)為與年齡、分化程度無關(guān)；但少數(shù)研究認(rèn)為，HE4的表達(dá)程度與年齡及分化程度有關(guān)。楊彩虹等[4]用免疫組化方法的研究中發(fā)現(xiàn)：HE4的表達(dá)水平在子宮內(nèi)膜癌組織中的增加與手術(shù)-病理分期為正相關(guān)關(guān)系，和患者的年齡，組織學(xué)分級和病理類型是不相關(guān)的。而Bignotti等[20]用實(shí)時(shí)定量PCR及免疫組化方法檢測HE4基因mRNA和組織中HE4蛋白的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附法測定血清HE4蛋白的表達(dá)，檢測結(jié)果在子宮內(nèi)膜癌組織中，HE4 mRNA表達(dá)和HE4蛋白表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜組及子宮內(nèi)膜良性病變組，且血清HE4水平與高齡、FIGO分期、絕經(jīng)狀態(tài)、病理分級、肌層浸潤深度、腹水陽性、淋巴結(jié)陽性等呈正相關(guān)。

在筆者的研究發(fā)現(xiàn)中，隨著組織學(xué)分級、臨床分期增加HE4表達(dá)陽性率增加，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HE4與組織學(xué)分級和臨床分期呈正相關(guān)。HE4在分化程度較好的高-中分化多呈弱陽性或陰性表達(dá)，隨著組織學(xué)分級的增加，它的表達(dá)程度也顯著增強(qiáng)；晚期病例組中HE4表達(dá)的明顯強(qiáng)于早期病例組。本研究中深肌層浸潤和原發(fā)腫瘤大小在HE4的總表達(dá)率方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。但在表達(dá)程度方面，深肌層浸潤的癌組織的HE4的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于浸潤深度小于1/2層。而腫瘤直徑≥2 cm的表達(dá)也明顯高于腫瘤直徑小者，提示腫瘤越大，肌層侵犯越深，HE4的表達(dá)越強(qiáng)。子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后危險(xiǎn)因素有：非子宮內(nèi)膜樣癌或低分化腺癌、深肌層浸潤、脈管間隙受累、腫瘤體積大、宮頸轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和子宮外轉(zhuǎn)移等[21]。研究中發(fā)現(xiàn)HE4高表達(dá)與組織FIGO分期、分化程度、及深肌層浸潤及癌灶大小有關(guān)，這表明隨著病情的發(fā)展和惡性程度的增高，HE4在子宮內(nèi)膜癌組織中明顯過度表達(dá)，提示HE4的高表達(dá)參與了子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)展，同時(shí)HE4與子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后密切相關(guān)，HE4可以作為侵襲進(jìn)展的標(biāo)志以及決定預(yù)后的重要指標(biāo)。在本研究中HE4血清水平與晚期子宮內(nèi)膜癌以及子宮肌層的深部入侵和原發(fā)腫瘤直徑密切相關(guān)，血清HE4水平的增加和較差的預(yù)后因素相關(guān)。

有研究顯示：子宮內(nèi)膜受到激素水平的嚴(yán)格控制，或其受體的變化影響，而這也可能導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的高HE4水平[22]。應(yīng)用組織微陣列和實(shí)時(shí)PCR研究證實(shí)子宮內(nèi)膜腺癌和漿液性類型的子宮內(nèi)膜癌中的HE4高水平表達(dá)，筆者的研究結(jié)果與既往一致，HE4的表達(dá)不論是在雌孕激素受體表達(dá)陽性的子宮內(nèi)膜腺癌或惡性程度高的特殊類型的子宮內(nèi)膜癌中都有較高表達(dá)率，其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這與Galgano等[19]應(yīng)用寡核苷酸芯片mRNA雜交和組織芯片免疫組化法檢測結(jié)果相同：即16例子宮內(nèi)膜癌組織中90%的HE4為陽性，并且與組織病理類型無關(guān)。

文獻(xiàn)[23-25]報(bào)道血清HE4水平和年齡有關(guān)，蔡斌等[24]檢測健康婦女血清HE4水平，分析913例不同年齡層次中，血清HE4水平在<60歲組和≥60歲組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。但在<60歲各年齡組血清HE4水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。根據(jù)ROC曲線，老年組曲線下面積最小，提示HE4診斷青中年卵巢癌的能力優(yōu)于老年卵巢癌。國外也有報(bào)道指出在1591例受試人群中年齡是影響血清HE4濃度的重要因素。本研究中HE4在老年組子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達(dá)率略高于中青年組，可能與多數(shù)老年組患者細(xì)胞分化程度差和肌層浸潤發(fā)生率高有關(guān)，但不同年齡組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示HE4在組織中的表達(dá)與年齡無關(guān)。這與楊彩虹等[4]的研究結(jié)果一致。分析血清中分泌的HE4的水平增高可能是老年人腎小球?yàn)V過率低的原因。但是，本研究的研究對象只討論惡性子宮內(nèi)膜組織中HE4表達(dá)水平與年齡的關(guān)系，由于病例資料收集的局限性及試驗(yàn)方法的單一，以后可能需要擴(kuò)大樣本并輔以血清學(xué)的診斷方法聯(lián)合試驗(yàn)以進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，HE4基因的高表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌的侵襲、進(jìn)展等方面關(guān)系密切。但目前除了將血清學(xué)HE4用于臨床診斷及監(jiān)測外，從分子機(jī)制水平探索HE4在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制有更大的意義，從而為子宮內(nèi)膜癌治療的尋找新思路。

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Expression and Clinical Significance of Human Epididymis Secretory Protein 4 in Endometrial Carcinoma/

SUN Run-jiao，JIN Xian-yu，LIU Gui-xiang，et al.//
Medical Innovation of China，2016，13（30）：001-007

Objective：Through the detection of human epididymis secretory protein 4（HE4） expression in endometrial carcinoma and correlation study of HE4 and different clinical and pathological features，explore the diagnosis of endometrial cancer，the clinical significance of the treatment and prognosis.Method：The paraffin embedded specimens of 32 cases of endometrial carcinoma were confirmed by pathological examination，they were detected by using the two step method of immunohistochemical staining for HE4.The relations of the expression of HE4 in endometrial carcinoma and FIGO staging，pathological type，histological grade，myometrial invasion，tumor size and age differences between groups were analyzed，and its relationship with clinicopathological features of endometrial carcinoma was analyzed.Result：（1）HE4 positive particles were mainly localized in the cell membrane and cytoplasm，and the positive expression rate of HE4 in 32 cases of endometrial carcinoma was higher，which was 87.5%.（2）The positive expression rate and intensity of HE4 in the endometrial carcinoma tissues of the high differentiation group were higher than those in the low and middle differentiation group（P<0.05）.（3）The positive expression rate and the expression intensity of HE4 protein in advanced endometrial carcinoma were higher than those in the early stage（P<0.05）.（4）The positive expression of HE4 protein in endometrial carcinoma was not related to the age，pathological type， depth of invasion and tumor size（P>0.05），but in the HE4 positive expression level，deep myometrial invasion strong positive expression（61.5%） than no deep myometrial invasion（36.8%），the diameter of the tumor was greater than 2 cm strong positive expression（61.1%）is higher than the diameter <2 cm tumor（28.6%），the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion：The high expression of HE4 gene is closely related with the invasion and progression of endometrial carcinoma，it can be used as a marker for the progression of tumor invasion and an important index of evaluating the prognosis of endometrial carcinoma.

Human epididymis secretory protein 4； Endometrial carcinoma； Immunohistochemical method； Prognosis

遼寧省大連市醫(yī)學(xué)研究科研課題（WSJ/KJC-01-JL-01）

①遼寧省莊河市中心醫(yī)院 遼寧 莊河 116400

②遼寧省大連市中心醫(yī)院

③遼寧省莊河市婦幼保健醫(yī)院

④大連大學(xué)附屬新華醫(yī)院

高言國

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.30.001

（2016-06-22） （本文編輯：郎威）