邱位木 陳小麗 吳德喜 李寶蘭

福建省三明市農(nóng)業(yè)局福建三明365001

三明市某規(guī)?；i場(chǎng)幾種疫病的檢測(cè)情況與分析

邱位木 陳小麗 吳德喜 李寶蘭

福建省三明市農(nóng)業(yè)局福建三明365001

通過(guò)對(duì)三明市某大型豬場(chǎng)進(jìn)行豬瘟、普通藍(lán)耳病、高致病性藍(lán)耳病、偽狂犬病的病原學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)，以更好地了解這些疫病在豬場(chǎng)的流行情況，為豬場(chǎng)這幾種疫病的防控和凈化奠定基礎(chǔ)。本次調(diào)查分別檢測(cè)45份后備母豬血清、92份生產(chǎn)母豬血清、13份生產(chǎn)公豬血清，共計(jì)150份血清，150份扁桃體樣品。通過(guò)ELISA方法分別檢測(cè)了豬瘟、普通藍(lán)耳病、偽狂犬病gE和偽狂犬病gB。熒光定量PCR方法檢測(cè)了豬瘟、高致病性藍(lán)耳病。結(jié)果豬瘟和高致病性藍(lán)耳病病原學(xué)陽(yáng)性率分別為8%和5.3%。一個(gè)月后對(duì)病原學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性豬采樣復(fù)查，結(jié)果豬瘟陽(yáng)性率4.6%，高致病性藍(lán)耳病陽(yáng)性率2.6%。豬瘟免疫抗體合格率93.3%，普通藍(lán)耳病免疫抗體合格率96%，偽狂犬病gB免疫抗體合格率100%，偽狂犬病gE感染抗體2%。生產(chǎn)母豬胎次越多，豬瘟和普通藍(lán)耳病的免疫抗體水平越高。

ELISA熒光定量PCR豬瘟普通豬藍(lán)耳病高致病性豬藍(lán)耳病偽狂犬病

隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，養(yǎng)殖基數(shù)越來(lái)越大，散養(yǎng)和規(guī)模養(yǎng)殖并存，給疫病防控造成很大的難度。尤其是近年來(lái)規(guī)?；i場(chǎng)出現(xiàn)了多種疫病混合感染，病毒的變異、臨床的非典型化等更是加劇了豬的繁殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)疾病，給養(yǎng)豬生產(chǎn)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。目前我國(guó)的動(dòng)物疫病防控主要還是通過(guò)疫苗免疫，雖然能有效控制一些重大動(dòng)物疫病，但并不能消滅或者根除動(dòng)物疫病[2]。因此，凈化是消滅或根除動(dòng)物疫病的一種重要方式。在一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)或者區(qū)域通過(guò)檢疫、淘汰陽(yáng)性動(dòng)物、培育健康動(dòng)物并與生物安全隔離區(qū)建設(shè)相結(jié)合的方式，達(dá)到凈化疫病的目的[3]。種用動(dòng)物是養(yǎng)殖的源頭，一旦種用動(dòng)物攜帶病原，就會(huì)通過(guò)引種大面積傳播病毒。所以，凈化工作的重中之重就是種用動(dòng)物的凈化。

三明市農(nóng)業(yè)局動(dòng)物疫控中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室對(duì)某規(guī)模豬場(chǎng)做了幾個(gè)病種的檢測(cè)，初步了解某規(guī)模種豬場(chǎng)豬瘟、普通藍(lán)耳病、高致病性藍(lán)耳病、偽狂犬病的疫苗免疫效果、感染抗體存在情況和病毒核酸存在情況，為該場(chǎng)今后的防疫和凈化工作提供科學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器設(shè)備酶標(biāo)儀（瑞士SUNRISE），移液器eppendorf（0.1～2.5 μL、10～100 μL、100～1000 μL），冰箱（海爾）；恒溫培養(yǎng)箱（廣東韶關(guān)科力試驗(yàn)儀器公司DNP-9162A）；生物安全柜（美國(guó)Labconco），高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma），組織研磨儀、熒光定量PCR儀（德國(guó)凱杰）等。

1.1.2 試劑盒豬瘟、普通藍(lán)耳病、偽狂犬病gE、偽狂犬病gB抗體檢測(cè)試劑盒均為美國(guó)IDEXX ELISA試劑盒。豬瘟、高致病性藍(lán)耳病、普通藍(lán)耳病病原檢測(cè)試劑盒均為深圳匹基熒光定量PCR試劑盒。

IDEXX試劑盒置4℃冰箱保存，匹基試劑盒置冷凍冰箱保存。

1.2 方法

1.2.1 血清樣品制備通過(guò)耳緣靜脈分別隨機(jī)采集生產(chǎn)母豬、后備母豬、生產(chǎn)公豬的全血5 mL，其中后備母豬45頭、生產(chǎn)母豬92頭、生產(chǎn)公豬13頭，共150份豬全血。靜置2 h以上，待血液凝固析出血清，即可離心出血清備用。

1.2.2 免疫情況與疫苗類型該規(guī)模場(chǎng)采取自繁自養(yǎng)的養(yǎng)殖方式，養(yǎng)殖場(chǎng)設(shè)施設(shè)備齊全，防疫管理規(guī)范，有合適本場(chǎng)的免疫程序。豬瘟疫苗是從普萊柯生物工程股份有限公司自購(gòu)的細(xì)胞源苗，豬藍(lán)耳病疫苗是從美國(guó)勃林格自購(gòu)的經(jīng)典豬藍(lán)耳病活疫苗，豬偽狂犬病疫苗是從美國(guó)勃林格自購(gòu)的gE基因缺失疫苗。

1.2.3 試驗(yàn)方法血清抗體均采用間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，病原均采用熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)操作與結(jié)果判定嚴(yán)格按照試劑盒的使用說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬瘟檢測(cè)結(jié)果豬瘟檢測(cè)結(jié)果顯示（見表1），各類種豬豬瘟平均免疫抗體合格率為93.3%，其中公豬的合格率為92.3%，后備母豬為93.3%，生產(chǎn)母豬為93.4%，均達(dá)到較高水平。豬瘟病原熒光定量PCR第一次采樣檢測(cè)陽(yáng)性率為8%，一個(gè)月后對(duì)病原檢測(cè)陽(yáng)性豬重新采樣復(fù)查，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率降低至4.6%。

2.2 藍(lán)耳病檢測(cè)結(jié)果豬普通藍(lán)耳病免疫抗體檢測(cè)結(jié)果顯示（見表2），各類種豬普通藍(lán)耳病平均免疫抗體合格率為96%，其中公豬的合格率為100%，生產(chǎn)母豬為95.6%，后備母豬為95.5%，均達(dá)到較高水平。高致病性藍(lán)耳病病原熒光定量PCR第一次采樣檢測(cè)陽(yáng)性率5.3%，一個(gè)月后對(duì)病原檢測(cè)陽(yáng)性豬重新采樣復(fù)查，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率下降到2.6%。

2.3 偽狂犬病檢測(cè)結(jié)果豬偽狂犬病檢測(cè)結(jié)果顯示（見表3），各類種豬偽狂犬病gB免疫抗體合格率均為100%。各類種豬偽狂犬病gE平均感染抗體2%，其中公豬感染率為0、生產(chǎn)母豬感染率為2.2%、后備母豬的感染率為2.2%。

表1 豬瘟檢測(cè)結(jié)果

表2 藍(lán)耳病檢測(cè)結(jié)果

表3 偽狂犬病檢測(cè)結(jié)果

2.4 母豬胎次與幾種疫病抗體的關(guān)系從表4可見，4胎以上母豬的免疫抗體合格率都是100%，1～3胎母豬的免疫抗體水平，隨著胎次的增加抗體水平也越來(lái)越高，1胎母豬的豬瘟和普通藍(lán)耳病免疫抗體水平都是75%，合格率偏低，2胎母豬的豬瘟和普通藍(lán)耳病免疫抗體水平達(dá)到83%和91.7%，合格率達(dá)到一個(gè)相對(duì)理想的水平，3胎母豬的豬瘟和普通藍(lán)耳病免疫抗體水平達(dá)到93.7%和96.8%，合格率已經(jīng)達(dá)到一個(gè)較高的水平。母豬的生產(chǎn)胎次對(duì)免疫抗體有著相關(guān)的影響，母豬生產(chǎn)胎次越多，豬瘟和

普通藍(lán)耳病的免疫抗體也就越高。

表4 母豬胎次與幾種疫病抗體的關(guān)系

3 討論

從以上檢測(cè)數(shù)據(jù)分析，該豬場(chǎng)豬瘟、普通藍(lán)耳病、偽狂犬病gB免疫抗體水平都達(dá)到90%以上，說(shuō)明疫苗的免疫效果好，豬群對(duì)這幾種病有著比較強(qiáng)的防御力。偽狂犬病gE感染抗體為2%，表明該豬場(chǎng)存在偽狂犬病野毒感染但是感染率不高，要對(duì)該豬場(chǎng)進(jìn)行偽狂犬病凈化可行性高且難度不大。豬瘟和高致病性藍(lán)耳病的病原熒光定量PCR檢測(cè)，第一次采樣檢測(cè)結(jié)果和一個(gè)月后第二次采樣復(fù)查結(jié)果不一致，可能是因?yàn)樨i瘟與高致病性藍(lán)耳病疫苗均為活疫苗，第一次采樣距疫苗注射時(shí)間不到10 d，有部分是疫苗毒核酸被檢出。第二次采樣是在一個(gè)月后，再次對(duì)樣品進(jìn)行病原檢測(cè)，過(guò)濾掉部分疫苗毒陽(yáng)性數(shù)，從第二次檢測(cè)結(jié)果看，豬瘟病毒核酸陽(yáng)性率為4.6%、高致病性藍(lán)耳病病毒核酸陽(yáng)性率為2.6%，豬瘟和高致病性藍(lán)耳病存在野毒感染情況，但從全省農(nóng)業(yè)部上報(bào)系統(tǒng)的歷年統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)來(lái)看，該豬場(chǎng)的豬瘟和高致病性藍(lán)耳病的病原陽(yáng)性率均低于全省平均陽(yáng)性率，豬場(chǎng)應(yīng)該及時(shí)淘汰感染豬只，及時(shí)消滅隱性的感染源。

動(dòng)物疫病凈化狹義上講就是在一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)，通過(guò)檢測(cè)的手段對(duì)一系列動(dòng)物疫病進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)帶病或疑似帶病動(dòng)物及時(shí)進(jìn)行淘汰[4]。三明市近五年的凈化工作跟農(nóng)業(yè)部和省農(nóng)業(yè)廳對(duì)接，就是要從原種場(chǎng)、大型規(guī)模場(chǎng)開始逐步擴(kuò)大到所有養(yǎng)殖場(chǎng)，消滅或根除動(dòng)物疫病，從而帶動(dòng)養(yǎng)殖場(chǎng)提升管理水平、改善生物安全環(huán)境、提高動(dòng)物疫病防控能力，增加養(yǎng)殖場(chǎng)及其產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)力，有力促進(jìn)產(chǎn)品質(zhì)量安全、公共衛(wèi)生安全和養(yǎng)殖業(yè)安全，為三明市畜牧業(yè)健康發(fā)展、農(nóng)民生產(chǎn)增效保駕護(hù)航。

[1]管亮,華耀,施雷,等.種豬群豬圓環(huán)病毒病的凈化技術(shù)研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015(7)：61-66.

[2]劉源.共譜動(dòng)物疫病新篇章[J].中國(guó)畜牧業(yè),2015(18)：18-19.

[3]姚明霞,惲建偉.小型規(guī)模豬場(chǎng)疫病防控要點(diǎn)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘,2011(5)：130.

[4]陳國(guó)順.小型商品豬場(chǎng)的疫病防治[J].福建畜牧獸醫(yī), 2011,33(3)：56-57.

The monitor and analysis of the swine diseases in the large scale swine farm in Sanming city

Qiu Weimu Chen Xiaoli Wu Dexi Li Baolan
(Agricultural Bureau of Sanming City,Fujian 365001)

In order to know well about the epidemic status of the swine diseases in the large scale swine farm and give the fundament for the prevention and purification of these swine diseases,the certain tissue and the serum of the swine were detected by using the ELISA and the fluorescence ration PCR,the study referred to the swine fever,porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS), high pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome and pseudorabies.The samples that were used for tests separately from the 45 replacement gilt serums,92 sow serums,13 boar serums and the 150 tonsils.The swine fever,porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)and pseudorabies were studied by using ELISA,the swine fever and high pathogenic PRRS were studied by using fluorescence ration PCR.The result showed∶the pathogen positive rate of the swine fever and the high pathogenic PRRS is separately 8%and 5.3%,the positive swine were detected again one month later,the pathogen positive rate of the swine fever and the high pathogenic PRRS is separately 4.6%and 2.6%.The percent of pass about the swine fever,the PRRS,and pseudorabies gB immune antibody was separately 93.3%,96%,and 100%,the infection antibody of the pseudorabies gE was 2%.The more parities the sows have,the higher level of the immune antibody about the swine fever and the PRRS was.

ELISA Fluorescence ration PCR Swine fever Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)High pathogenic PRRS Pseudorabies

A

1003-4331（2016）06-0014-03