殷玉瑾　張聰張　巫凡　王臣

摘要：本研究擬以新城疫疫苗聯(lián)合人工合成的BHP免疫雞。通過人工合成法氏囊活性六肽，將其作為佐劑添加到新城疫弱毒疫苗中免疫雛雞。本次實驗表明，新城疫疫苗和法氏囊活性六肽（BHP）聯(lián)合使用免疫后，法氏囊指數(shù)與PBS組和疫苗紐相比，差異極顯著（P<0.01）；新城疫疫苗和法氏囊活性六肽聯(lián)合使用免疫后，雞的抗體效價與PBS對照組和新城疫疫苗組相比，差異顯著（P<0.05）。本研究為進一步研制新型免疫佐劑提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：法氏囊；BHP；脾臟指數(shù)；法氏囊指數(shù)

佐劑是一種特殊的物質(zhì)，當在動物體內(nèi)注入這種特殊的物質(zhì)就能改變動物機體的免疫反應(yīng)（細胞免疫和體液免疫反應(yīng)）的水平和/或類型，能增強抗原的免疫原性但沒有抗原性。又稱免疫佐劑。當前我們可以利用的疫苗種類繁多，但很多疫苗免疫原型弱，誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)程度低，不能對雞群產(chǎn)生良好的免疫保護作用，因此需要研發(fā)合適的佐劑，來增加疫苗對雞群的免疫保護作用。BHP是通過反相高壓液相色譜柱層析，質(zhì)譜和氨基酸分析等技術(shù)從法氏囊組織液中分離到一種新型的小肽，其氨基酸排列順序為：丙氨酸-甘氨酸-半胱氨酸-半胱氨酸-天冬酰胺-甘氨酸（Ala-Gly-Cys-Cys-Asn-Gly）。BHP的摩爾質(zhì)量為523.152Da，等電點為5.74，電荷為-0.15。本實驗中，將BHP添加到新城疫疫苗中研究其對新城疫疫苗的免疫增強作用，從而將BHP作為免疫佐劑在臨床上的應(yīng)用提供依據(jù)并且為進一步研究奠定基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1.試驗材料

105只雛雞，購于河南省洛陽市峪口禽業(yè)有限公司；新城疫弱毒苗，遼寧益康生物制品有限公司；新城標準強毒F48E9，由本實驗室保存；BHP由上海科肽生物科技有限公司合成。

2.動物的分組及免疫

將105只雛雞平均分成三組，即PBS對照組、新城疫（ND）疫苗對照組、新城疫（ND）疫苗+六肽（BHP）組，每組35只。在0d時首免，首次免疫兩周后進行二免，所有的雞在第21 d進行攻毒實驗。

3.雛雞法氏囊指數(shù)的測定

首免后14 d和21 d，分別從三組中隨機抽取5只，處死并收集其法氏囊，同時記錄每只雞的體重，及其相應(yīng)的法氏囊的重量，計算法氏囊指數(shù)。

4.HI抗體效價的測定

首免后21d，從三組中，分別隨機抽取5只雞，進行心臟采血。離心5min，離心結(jié)束后收集血清：做好標記，在冰箱中保存。然后進行微量血凝試驗（HA）和微量血凝抑制試驗（HI）。

二、結(jié)果與分析

1.法氏囊活性六肽（BHP）對雛雞法氏囊器官發(fā)育的影響

法氏囊活性六肽與雞新城疫疫苗聯(lián)合使用，能夠促進法氏囊的生長發(fā)育，對法氏囊的生長發(fā)育影響較大（如圖1）。

2.法氏囊活性六肽（BHP）對HI抗體效價的影響

試驗中分別測定PBS組、疫苗組、疫苗+肽組三組雞共15只雞的血清，各組雞的抗體滴度（如圖2）。結(jié)果表明：新城疫苗與法氏囊活性六肽（BHP）聯(lián)合使用，能夠顯著提高雞的體液免疫水平，提高疫苗的Ⅲ抗體效價，增強雞群抗感染的能力。

三、討論

許多佐劑都可以添加到疫苗中使用，但是部分佐劑具有副作用，如能引起機體的局部反應(yīng)或全身不良反應(yīng)，甚至對機體產(chǎn)生毒害和損傷作用，在獸醫(yī)臨床中廣泛使用的是油性佐劑，因為它具有無副作用和其它不良反應(yīng)，因此，研制新的和最佳的輔助佐劑已成為許多研究者研究的焦點，在許多出版物中已經(jīng)有很多研究者著重對小分子肽進行研究，在本研究中就對新型免疫增強劑BHP進行了初步的研究。本研究表明，法氏囊活性六肽和新城疫疫苗聯(lián)合使用不能促進雞脾臟器官的發(fā)育，但能夠促進法氏囊的生長發(fā)育，對法氏囊的生長發(fā)育影響較大。新城疫苗與法氏囊活性六肽（BHP）聯(lián)合使用，能夠顯著提高雞的體液免疫水平，提高疫苗的HI抗體效價，增強雞群抗感染的能力。