閆婉婉　張巫凡　張聰　王臣

摘要：新城疫是由新城疫病毒引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病，給我國的養(yǎng)雞業(yè)帶來了巨大損失。為研制具有良好免疫效果的免疫肽，本實(shí)驗(yàn)通過人工合成法氏囊活性肽BPP-Ⅱ，將其作為佐劑添加到新城疫疫苗中免疫雛雞，通過對(duì)體液免疫指標(biāo)的檢測來評(píng)價(jià)其對(duì)新城疫疫苗免疫效果的影響。結(jié)果表明：BPP-Ⅱ不僅對(duì)新城疫疫苗有免疫增強(qiáng)作用，而且對(duì)法氏囊器官的發(fā)育有促進(jìn)作用。

關(guān)鍵詞：法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ；新城疫疫苗；法氏囊指數(shù)；抗體滴度

新城疫（newcastle disease，ND）具有很高的發(fā)病率和死亡率，是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種主要傳染病。給養(yǎng)禽業(yè)帶來非常巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究發(fā)現(xiàn)，法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ可以促進(jìn)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖、提高機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫的水平、還可以提高機(jī)體的抗過氧化應(yīng)激能力，并且具有廣泛應(yīng)用前景。本研究通過人工合成法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ，將其作為免疫添加劑配合疫苗使用，通過檢測免疫指標(biāo)水平的變化評(píng)價(jià)BPP-Ⅱ?qū)π鲁且咭呙缑庖咝Ч挠绊懀瑥亩鵀锽PP-Ⅱ作為免疫佐劑在臨床上的應(yīng)用提供依據(jù)并且為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料

1日齡健康的來航雞購于洛陽峪口禽業(yè)有限公司。新城疫弱毒疫苗購于遼寧益康生物制品有限公司。新城疫病毒毒株F48E9，由本實(shí)驗(yàn)室保存。

2.法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ合成

法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ，由上海科肽生物科技有限公司合成，純度達(dá)到95%以上。

3.動(dòng)物分組及免疫

將105只小雞隨機(jī)分成3組，每組35只。9日齡首免，14d后進(jìn)行二免。采用注射免疫，空白對(duì)照組免疫PBS；疫苗對(duì)照組每只雞免疫1頭份量的新城疫弱毒苗；疫苗加肽組，每只雞除了免疫1頭份量的新城疫疫苗外，還免疫10ug的法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ。

4.雛雞脾臟、法氏囊指數(shù)的測定

首免后14d、21d第二次采集脾臟和法氏囊。常規(guī)方法測定脾臟、法氏囊指數(shù)。

5.雛雞HI抗體效價(jià)的測定

將雛雞在首免后21 d分離得到的血清進(jìn)行HI試驗(yàn)，測定雛雞HI抗體效價(jià)。

6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件，不同組間比較采用單因素方差分析。

二、結(jié)果與分析

1.法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ?qū)﹄u的脾臟器官發(fā)育的影響

經(jīng)SPSS分析，疫苗+肽組的脾臟指數(shù)與空白對(duì)照和疫苗對(duì)照組相比，無顯著性差異（P>0.05）。由此可見，法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ?qū)﹄u的脾臟的生長無明顯促進(jìn)作用。

2.法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ?qū)﹄u的法氏囊器官發(fā)育的影響

經(jīng)SPSS進(jìn)行分析，疫苗+肽組法氏囊指數(shù)顯著高于空白對(duì)照組和疫苗對(duì)照組（P<0.05），如表1。由此可見，法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ?qū)﹄u的法氏囊的生長有一定的促進(jìn)作用，也即對(duì)雞的免疫器官有一定的促進(jìn)作用。

3.法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ?qū)贵w效價(jià)的影響

兩次免疫后發(fā)現(xiàn)，只用疫苗的對(duì)照組，平均抗體效價(jià)達(dá)到5.3，而法氏囊活性五肽配合疫苗組，平均抗體效價(jià)達(dá)到6.2。由此可見，法氏囊活性五肽對(duì)雞新城疫疫苗免疫雞產(chǎn)生抗體有一定促進(jìn)作用。

三、討論

法氏囊活性肽是從法氏囊中提取到的一種活性因子，法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ結(jié)構(gòu)簡單，其氨基酸序列為：Met-Thr-Leu-Thr-Gly。分子量小，無免疫原性，無化學(xué)毒性，制備很簡單，可以從雞或其它禽類的BF中提取，也可以用化學(xué)的方法合成，化學(xué)合成的成本也很低，可以大量的制備。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ作為佐劑能顯著提高雞新城疫弱毒疫苗的體液免疫應(yīng)答，這為法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ作為免疫佐劑配合弱毒疫苗使用提供了參考依據(jù)。