施東輝 劉國鋒 黃利榮 王林毛 宋 曙

(南通大學(xué)第四附屬醫(yī)院 鹽城市第一人民醫(yī)院胸心外科，江蘇 鹽城 224001)

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JWA rs7038功能性變異與鱗狀細(xì)胞食管癌發(fā)病的相關(guān)性

施東輝 劉國鋒 黃利榮 王林毛 宋 曙1

(南通大學(xué)第四附屬醫(yī)院 鹽城市第一人民醫(yī)院胸心外科，江蘇 鹽城 224001)

目的 探討環(huán)境應(yīng)答基因JWA基因多態(tài)性對食管鱗癌易感性的影響。方法 采用1∶1配對病例對照研究，應(yīng)用條件LOGISTIC回歸模型，探討JWA 基因rs7038功能性變異對食管鱗癌易感性的影響。結(jié)果 三種不同遺傳模型下JWA基因SNP位rs7038與食管鱗癌發(fā)生均無關(guān)聯(lián)。未發(fā)現(xiàn)rs7038與吸煙飲酒間未存在交互作用。結(jié)論 雖然未發(fā)現(xiàn)JWA基因rs7038功能性遺傳變異與食管鱗癌的相關(guān)性，但是不排除該單核苷酸多肽性(SNP)位點(diǎn)可能與其他SNP位點(diǎn)或環(huán)境因素聯(lián)合作用共同影響腫瘤發(fā)生的可能。

JWA基因；單核苷酸多態(tài)性；食管鱗狀細(xì)胞癌

環(huán)境應(yīng)答基因，也稱為環(huán)境易感基因，是人體對不利環(huán)境刺激產(chǎn)生特定反應(yīng)的基因，其多態(tài)性可造成人群遺傳易感性的差異。目前國際上普遍認(rèn)同的環(huán)境應(yīng)答基因包括DNA修復(fù)基因、代謝酶基因、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因等。JWA基因是周建偉〔1〕發(fā)現(xiàn)的新環(huán)境應(yīng)答基因，外界環(huán)境的刺激通過影響JWA基因表達(dá)，繼而參與細(xì)胞的分化和凋亡過程。湯唯艷等〔2，3〕報(bào)道在中國江蘇人群中JWA基因啟動(dòng)子-76G/C突變會增加人群中患消化道腫瘤的危險(xiǎn)性，尤其是在男性吸煙患者當(dāng)中風(fēng)險(xiǎn)更大。朱慧〔4〕也報(bào)道了JWA-76G/C和454C/A突變會增加罹患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)，該結(jié)論與Li等〔5〕研究結(jié)果一致。本課題對JWA基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)是否與食管鱗癌發(fā)生有關(guān)進(jìn)行探索。

1 資料與方法

1.1 一般資料 福建醫(yī)科大學(xué)附屬漳州市醫(yī)院經(jīng)食管癌組織病理診斷確診為食管鱗癌的新發(fā)病例295例作為病例組。按1∶1頻數(shù)匹配的方式選擇與病例同性別、年齡相差≤3歲、同居住地，且來自醫(yī)院同時(shí)期的健康體檢者295例作為對照組。兩組在性別、民族方面均衡可比(P>0.05)，而在婚姻狀況，文化程度，人均收入，職業(yè)方面差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

1.2 調(diào)查方法 采用統(tǒng)一編制的調(diào)查表，由經(jīng)過培訓(xùn)考核合格的調(diào)查員采用面對面問卷及由調(diào)查員填寫的方式來收集調(diào)查表資料。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 經(jīng)患者及其家屬知情同意后，靜脈采集食管鱗癌患者外周血樣本，經(jīng)過乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝處理，-80℃冰箱保存。下載對應(yīng)中國人JWA基因的SNP數(shù)據(jù)，運(yùn)用Haploview軟件的tagger程序挑選標(biāo)簽SNPs(tagSNPs)。采用北京百泰克公司的DNAzol試劑提取全血DNA；對全血提取的DNA用MALDI-TOF-MS質(zhì)譜檢測SNPs。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行Logistic回歸模型分析和協(xié)方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 JWA基因5個(gè)SNP位點(diǎn)分型結(jié)果 SNP位點(diǎn)rs7038三種分型兩組間分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。SNP位點(diǎn)rs6803501、rs11542221、rs11542218、rs1802400均未發(fā)現(xiàn)存在多態(tài)位點(diǎn)。

表1 兩組JWA基因SNP位點(diǎn)分型結(jié)果〔n(%),n=295〕

2.2 JWA基因SNP位點(diǎn)rs7038與食管鱗癌的關(guān)聯(lián)性 對照組中基因型實(shí)際頻率與基因型理論頻率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.261，P=0.133)，說明該人群中JWA 基因rs7038基因型頻率符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，具有人群代表性。將吸煙、飲酒、飲茶，喜食燙食、硬食、食用粗糧，食用新鮮蔬菜，食用新鮮水果，腫瘤家族史及rs7038變量擬合多因素條件Logistic 回歸方程，分析3種不同遺傳模型下JWA基因SNP位rs7038與食管鱗癌的關(guān)系，結(jié)果顯示，3種不同遺傳模型下JWA基因SNP位rs7038與食管鱗癌發(fā)生無相關(guān)性。見表2。

2.3 JWA基因rs7038與環(huán)境交互作用 JWA基因作為新的環(huán)境應(yīng)答基因，對其rs7038多態(tài)性與吸煙、飲酒的交互作用進(jìn)行協(xié)方差分析，結(jié)果提示rs7038與吸煙、飲酒間無交互作用。見表3、表4。

表2 3種遺傳模型下SNP位點(diǎn)rs7038與食管鱗癌的關(guān)系

1)經(jīng)性別、年齡、民族、婚姻、文化程度、收入、職業(yè)調(diào)整，下表同

表3 吸煙與rs7038的交互作用

3 討 論

JWA基因是從人原代氣管、支氣管上皮細(xì)胞中分離克隆得到的新細(xì)胞骨架樣基因，在其啟動(dòng)子序列含有佛波酯(TPA)反應(yīng)元件、熱休克反應(yīng)元件、Hemin反應(yīng)元件、核轉(zhuǎn)錄因子(NF)κB反應(yīng)元件和維甲酸反應(yīng)元件半位點(diǎn)〔6〕。曹海霞等〔7〕發(fā)現(xiàn)，在全反式維甲酸、三氧化二砷和TPA等誘導(dǎo)分化劑處理后的NB4細(xì)胞中JWA蛋白表達(dá)均上調(diào)，同時(shí)經(jīng)JWA反義核酸處理后的經(jīng)TPA誘導(dǎo)的NB4細(xì)胞中JWA基因表達(dá)和細(xì)胞分化凋亡能力均受到抑制，提示誘導(dǎo)分化劑可作用于JWA基因啟動(dòng)子區(qū)域的順式元件調(diào)節(jié)JWA基因表達(dá)，從而影響細(xì)胞的分化和凋亡。

當(dāng)暴露于不利外界環(huán)境時(shí)，機(jī)體細(xì)胞水平會發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，誘導(dǎo)合成熱休克蛋白(Hsp)抵抗不利環(huán)境的刺激。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)分化劑及熱應(yīng)激狀態(tài)下，JWA和Hsp70蛋白表達(dá)上調(diào)，并且兩種蛋白變化趨勢一致〔8〕。王南平等〔9〕同樣發(fā)現(xiàn)在氧化應(yīng)激作用下，JWA蛋白和Hsp27同步增加。Zhu等〔10〕的研究結(jié)果也證實(shí)了JWA參與機(jī)體對外界不利環(huán)境刺激的調(diào)控。那么，JWA基因是通過何種機(jī)制參與細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)呢？有研究認(rèn)為JWA可能與Hsp70蛋白相似，參與細(xì)胞損傷修復(fù)〔11〕。在苯并芘誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷修復(fù)過程中，與正常HeLa細(xì)胞對比，JWA蛋白表達(dá)缺陷細(xì)胞的DNA修復(fù)速率較慢，推測，JWA可能參與細(xì)胞損傷后修復(fù)〔12〕。JWA基因的作為環(huán)境應(yīng)答基因，其序列的變異有可能影響機(jī)體對環(huán)境刺激的應(yīng)答。另有研究發(fā)現(xiàn)JWA基因與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)聯(lián)〔13〕，也有研究發(fā)現(xiàn)術(shù)后生存情況較差的食管癌患者，食管癌組織中JWA蛋白表達(dá)下調(diào)〔14〕。由此可見，關(guān)于JWA基因rs7038多態(tài)性與腫瘤的關(guān)系尚存在爭議。王卓等〔15〕對有關(guān)JWA基因的SNP位點(diǎn)與食管癌的易感性進(jìn)行研究，結(jié)果報(bào)道在JWA基因723T/G(rs7038)多態(tài)性會增加罹患食管癌的危險(xiǎn)性。然而，本研究中尚未發(fā)現(xiàn)JWA基因rs7038多態(tài)性與漳州地區(qū)食管鱗癌發(fā)生有關(guān)，同樣，在基因-環(huán)境交互作用中也未發(fā)現(xiàn)rs7038與吸煙飲酒間存在交互作用。在朱慧〔4〕的研究中也未發(fā)現(xiàn)JWA基因723T/G(rs7038)突變與宮頸癌發(fā)病有關(guān)。同樣，在結(jié)直腸癌的研究中未發(fā)現(xiàn)723T/G(rs7088)突變與腫瘤的發(fā)病有關(guān)，也沒有發(fā)現(xiàn)吸煙飲酒與JWA基因多態(tài)性的交互作用〔16〕。

1 周建偉.JWA基因通過NFI結(jié)合位點(diǎn)特異性應(yīng)答氧化應(yīng)激所致的DNA損傷〔J〕.毒理學(xué)雜志,2005;19(S1):181-3.

2 湯唯艷,宋 雪,朱立偉,等.JWA基因多態(tài)性與紫杉類藥物對晚期胃癌化療療效相關(guān)性的研究〔J〕.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2012；16(23):12-4.

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16 楊 桓.主要乙醇代謝酶編碼基因及JWA基因單核苷酸多態(tài)性與結(jié)直腸癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究〔D〕.重慶：第三軍醫(yī)大學(xué)，2009.

〔2015-02-28修回〕

(編輯 苑云杰)

江蘇省科技項(xiàng)目(No.BK2012670)

施東輝(1968-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事食管腫瘤、肺部腫瘤研究。

R735.1

A

1005-9202(2016)22-5610-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.052

1 病理科