張瑋 陳羅泉 葉治國 王青青

●論 著

miR-99a對乳腺癌細胞侵襲和遷移的負向調控機制研究

張瑋 陳羅泉 葉治國 王青青

目的 探討miR-99a對乳腺癌細胞侵襲及遷移的影響，并初步分析其影響乳腺癌細胞侵襲及遷移的可能分子機制。方法 利用熒光實時定量PCR檢測乳腺癌細胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表達。運用脂質體介導的轉染方法分別將miR-99a模擬物（miR-99a mimics）、miR-99a抑制物（miR-99a inhibitors）以及相應對照miRNA轉染MDA-MB-231和MCF-7細胞，通過Transwell侵襲實驗檢測細胞的侵襲力；采用Transwell遷移實驗及劃痕實驗檢測細胞的遷移能力；利用生物信息學方法預測miR-99a的靶基因，并對靶基因進行驗證。結果 （1）高轉移潛能的MDA-MB-231細胞中miR-99a表達明顯低于低轉移潛能的MCF-7細胞，劃痕實驗中轉染miR-99a mimics的與轉染control mimics的MDA-MB-231細胞比較遷移能力顯著減弱（P＜0.05），而MCF-7細胞轉染miR-99a inhibitors后遷移能力明顯增強（P＜0.01）。（2）Transwell的侵襲及遷移實驗顯示，轉染miR-99a mimics后MDA-MB-231細胞的侵襲和遷移能力明顯減弱（P＜0.01）；MCF-7細胞轉染miR-99a inhibitors后遷移能力增強（P＜0.01），而侵襲能力基本不變（P＞0.05）。（3）生物信息學方法預測微管相關蛋白（MTMR3）是miR-99a的靶點，實時定量PCR和3'UTR熒光素酶報告基因實驗驗證了該靶點。（4）干擾了MTMR3后MDA-MB-231細胞的遷移和侵襲能力明顯減弱。結論 （1）miR-99a對乳腺癌細胞的侵襲及遷移發(fā)揮負向調控作用。（2）miR-99a可能通過靶向于MTMR3發(fā)揮其對乳腺癌細胞遷移和侵襲的調控作用。

乳腺癌 miR-99a 侵襲 遷移 MTMR3

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的癌癥之一，也是引起女性癌癥患者死亡的第二大癌癥（僅次于肺癌）[1]。腫瘤轉移是引起乳腺癌患者死亡的主要原因。對乳腺癌細胞轉移調控機制的深入了解可為研究抗癌策略提供新的思路。miRNA是長約22個核苷酸的非編碼RNA，它通過與靶基因的3′端非翻譯區(qū)（3′UTR）結合來抑制靶基因mRNA的翻譯或降解靶基因的mRNA，進而調節(jié)靶基因的表達[2-4]。已有大量文獻報道，多種miRNA在腫瘤的侵襲和遷移過程中發(fā)揮重要的調控作用[5-7]。miR-99a是miR-99家族中的一員，目前有研究表明miR-99a能顯著抑制肺癌和口腔癌等腫瘤細胞的侵襲和遷移[8-14]，但其是否也參與調控乳腺癌細胞的侵襲和遷移文獻報道少見。因此，本研究通過轉染miR-99a模擬物（miR-99a mimics）提高乳腺癌細胞中miR-99a的活性，轉染miR-99a抑制物（miR-99a inhibitors）抑制乳腺癌細胞中miR-99a的活性，以探討miR-99a對乳腺癌細胞侵襲及遷移能力的影響，并利用生物信息學方法預測miR-99a的靶基因并對其進行驗證，初步分析miR-99a影響乳腺癌細胞侵襲及遷移能力的可能機制，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 材料和儀器 人乳腺癌細胞系MCF-7（低轉移潛能）和MDA-MB-231（高轉移潛能）（美國ATCC公司），人胚腎細胞系HEK-293（中科院上海細胞所），RPMI-1640細胞培養(yǎng)基、FBS（美國Hyclone公司），OPTI-MEM細胞培養(yǎng)基（美國 Gibco公司），Invitrogen LipofectamineTM2000轉染試劑（美國 Invitrogen公司），Transwell侵襲小室（美國Corning公司），基質膠（美國 BD公司），miR-99a mimics及control mimics、微管相關蛋白（MTMR3）siRNA（上海吉瑪公司），DAPI染料（瑞士羅氏公司），PCR引物序列（生物工程上海股份有限公司），瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒、質粒中量制備試劑盒（美國AxyGen公司），實時定量PCR試劑盒、限制性內切酶、T4 DNA連接酶（大連寶生物工程公司），對照質粒pRL-TK、Dual-LuciferaseR報告基因檢測系統(tǒng)、熒光發(fā)光測定儀（美國Promega公司），微量移液器、低溫臺式高速離心機（德國Eppendorf公司），二氧化碳恒溫細胞培養(yǎng)箱（美國Thermo公司），倒置顯微鏡（日本Olympus公司），顯微圖象采集系統(tǒng)（日本尼康公司），PCR儀、CFX-96實時定量PCR系統(tǒng)（美國BioRad公司）。

1.2 細胞培養(yǎng)和接種 MCF-7和MDA-MB-231細胞用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基置于37℃恒溫、5%二氧化碳的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。轉染前1d將培養(yǎng)好的MDA-MB-231細胞鋪于6 cm培養(yǎng)皿中，使其匯合度在60%～70%，置于37℃恒溫、5%二氧化碳的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3 轉染 miR-99a mimics及對照（control mimics），miR-99a inhibitors及對照（control inhibitors），MTMR3 siRNA及對照（control siRNA）干粉離心后配制成終濃度為20μmol/L的工作液。鋪板24h內進行轉染，按照Invitrogen LipofectamineTM2000說明書進行轉染。轉染后6 h將培養(yǎng)液更換成正常的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)以用于后續(xù)實驗。

1.4 miR-99a和MTMR3表達水平的檢測 按照Takara公司實時定量PCR試劑盒的說明提取RNA，并將抽提的RNA進行逆轉錄，逆轉錄產物用于實時熒光定量PCR，分析miR-99a和MTMR3的表達，分別以U6和-actin作為內參，相關引物序列如下。miR-99a逆轉錄引物：5′-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCACAAGA-3′；miR-99a上游引物：5′-GCAACCCGTAGATCCGAT-3′；miR-99a下游引物：5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′；U6上游引物：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′；U6下游引物（同時作為U6逆轉錄引物）：5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′；MTMR3上游引物：5′-CCCAATGGGGGAGACCTTTC-3′；MTMR3下游引物：5′-CAGCCTCCTCCTTTAGCTCG-3′；-actin上游引物：5′-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3′；-actin下游引物：5′-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3′。實驗重復3次。

1.5 劃痕實驗和Transwell侵襲及遷移實驗

1.5.1 劃痕實驗 細胞轉染24h后，待細胞豐度達到90%時，用無血清DMEM培養(yǎng)基饑餓12h，然后每個平皿用20μl的小槍頭劃一條劃痕，在顯微鏡下取劃痕處幾個不同視野拍照（0h），37℃恒溫、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)并每隔24h拍照，然后分析圖片中不同視野劃痕的寬度。實驗重復3次。

1.5.2 Transwell侵襲及遷移實驗 細胞轉染24h后，用胰蛋白酶消化細胞，細胞計數5×104鋪于24孔Transwell小室，每孔鋪200μl細胞，然后在板孔中加入600μl完全培養(yǎng)基，小室中補加 200μl無血清培養(yǎng)基。其中侵襲實驗在小室接種細胞前一晚將Matrigel（基質膠）無血清DMEM-H培養(yǎng)基稀釋成濃度為1∶7，每個侵襲小室加60μl，而遷移實驗不加基質膠。37℃恒溫、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，侵襲實驗36h后（遷移實驗24h后）取出小室用DAPI染色，置于顯微鏡下觀察并拍照，隨機選取8個低倍視野（×100）進行細胞計數，并計算平均值。實驗重復3次。

1.6 miR-99a靶基因預測 采用TargetScan、PicTar4和miRanda 3個數據庫進行miR-99a檢索，預測其靶基因。

1.6.1 靶基因載體的構建與鑒定 從TargetScan網站上獲取MTMR3 mRNA 3′UTR與miR-99a結合的序列，設計目標引物序列（MTMR3），在5′端添加SpeⅠ和HindⅢ酶切位點，以便后續(xù)連接之用。具體引物序列如下（下劃線為酶切位點SpeⅠ和HindⅢ）：MTMR3上游引物：5′-GGACTAGTGGGAAGGTTGGAGAAGAG-3′；MTMR3下游引物：5′-CCCAAGCTTGAGTCGGAAGGCTATCTG-3′。兩條寡核苷酸退火，作為與pMIR-REPORT TM luciferase質粒（pMIR-Luc，為帶熒光素酶基因的載體）連接的插入片段，空載體PMIR-Luc雙酶切后，與插入片段連接過夜。將重組質粒PMIR-Luc-MTMR3轉化至感受態(tài)大腸桿菌DH5α進行擴增，挑選陽性單菌落過夜搖菌，提取質粒進行酶切鑒定后，由Invitrogen公司測序正確后使用。

案例1：學生到學校生物園觀察植物，回到教室后遭到了教師的質問：為什么要到那兒去？教師的本意是讓學生明白，我們身邊到處都有可供觀察的植物，但是他的質問已構成了對學生自主行為的一種干預，這或許是教師權威主義的瞬間行為。

1.6.2 質粒轉染與雙熒光素酶活性檢測 轉染前24h將2×105/ml的人胚腎細胞系HEK-293接種于96孔板，每孔加100μl無抗1640培養(yǎng)基，當細胞生長密度至培養(yǎng)板底部的75%～80%時開始轉染。轉染分4組（pMIR-empty+control mimics組、pMIR-empty+miR-99a mimics組、pMIR-MTMR3+control mimics組、pMIR-MTMR3+miR-99a mimics組），各組中均轉入對照質粒pRL-TK。按每孔量25μl opti-MEM培養(yǎng)基稀釋0.5μl LipofectmineTM2000脂質體，輕柔混合，室溫靜置5min；按每孔用量25μl opti-MEM培養(yǎng)基稀釋0.2μg報告基因載體、0.01 μg pMIR-TK和0.375μl寡核苷酸，輕柔混合；將兩者混合，室溫孵育20min。每組設3個復孔，分別將50μl質粒DNA-寡核苷酸-轉染試劑混合物加至96孔板中，稍微震蕩混勻，4h更換1640培養(yǎng)基，37℃ 細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。按照 Dual-LuciferaseR報告基因檢測試劑盒說明書進行操作，在熒光發(fā)光儀上檢測得到各組螢火蟲熒光素酶活性值（F）和海腎熒光素酶活性值（R），以R為內參，取F/R為相對活性值進行數據統(tǒng)計。實驗重復3次。

1.7 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計量資料以表示，兩組間比較采用t檢驗。

2 結果

2.1 MDA-MB-231、MCF-7細胞遷移能力及miR-99a表達水平的比較 見表1。

表1 MDA-MB-231、MCF-7細胞遷移能力及miR-99a表達水平的比較

由表1可見，MDA-MB-231細胞的劃痕實驗傷口愈合率顯著高于MCF-7細胞，而miR-99a表達水平顯著低于MCF-7細胞。

2.2 轉染miR-99a mimics后MDA-MB-231細胞遷移及侵襲能力的變化 見表2。

表2 轉染miR-99a mimics后MDA-MB-231細胞遷移及侵襲能力的變化

由表2可見，轉染miR-99a mimics后MDA-MB-231細胞的劃痕實驗傷口愈合率、侵襲及遷移實驗中侵出小室的細胞數均顯著低于轉染control mimics后的MDA-MB-231細胞。劃痕、侵襲和遷移實驗結果的代表性照片見圖1（插頁）。

2.3 轉染miR-99a inhibitors后MCF-7細胞遷移能力的變化 見表3。

表3 轉染miR-99a inhibitors后MCF-7細胞遷移能力的變化

由表3可見，轉染miR-99a inhibitors后的MCF-7細胞劃痕實驗傷口愈合率、遷移實驗中侵出小室的細胞數均顯著高于轉染control mimics后的MCF-7細胞，因侵襲實驗中MCF-7細胞幾乎沒有侵襲能力，即使轉染miR-99a inhibitors后侵襲能力有輕微上升，但無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），故本研究未顯示結果。

同時，轉染miR-99a mimics后的MDA-MB-231細胞的MTMR3表達水平明顯低于轉染control mimics后的MDA-MB-231細胞（P＜0.01），見圖2c。為驗證MTMR3對MDA-MB-231細胞的侵襲和遷移的調控作用，利用MTMR3的siRNA敲減其在MDA-MB-231中的表達，再進行Transwell的侵襲和遷移實驗，見圖2d、 2e，轉染MTMR3 siRNA后的MDA-MB-231的侵襲和遷移能力顯著低于轉染control siRNA后的MDA-MB-231細胞（均P＜0.01）。

圖2 MTMR3靶基因預測

3 討論

近年來，乳腺癌的診斷和治療取得了一定的進展，但是乳腺癌患者依然存在著轉移、復發(fā)、預后不良以及死亡的風險，有一半以上的乳腺癌患者在接受化療或者激素藥物治療以后仍會出現腫瘤轉移性疾病，所以如何抑制乳腺癌轉移是降低乳腺癌患者病死率的關鍵。miRNA是一種進化上相對保守的非編碼RNA，它通過與靶基因的3′UTR結合來抑制靶基因mRNA的翻譯或者降解靶基因mRNA進而調控靶基因的表達。它在細胞生長和發(fā)育的過程中起著重要的調節(jié)作用，參與生命過程中一系列的重要進程，包括發(fā)育、造血、器官形成、細胞分化、增殖、凋亡，甚至腫瘤發(fā)生[15]。已有大量文獻報道多種miRNA在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展的不同過程中起到關鍵的調控作用，包括表皮細胞和間充質細胞轉化，腫瘤細胞的干性以及腫瘤的侵襲和轉移[16-17]。

研究表明，miR-99a在包括前列腺癌、肝癌、子宮內膜癌、腎癌、肺癌、食管癌和口腔癌等多種惡性腫瘤中表達顯著下調，miR-99a可能發(fā)揮抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展的功能。其中Cui等[11]發(fā)現miR-99a能夠引起腎癌細胞的G1期細胞周期阻滯，Chen等[12]報道m(xù)iR-99a下調可促進非小細胞肺癌細胞A549和H1299細胞的增殖、侵襲和遷移，但對其機制沒有深入研究。Sun等[13]發(fā)現miR-99a可以促進食管癌細胞的凋亡。

MCF-7和MDA-MB-231是常用的乳腺癌細胞系，MCF-7為低/無轉移潛能細胞系，而MDA-MB-231具高轉移潛能。本研究比較MDA-MB-231和MCF-7細胞中miR-99a的表達，發(fā)現MDA-MB-231細胞中miR-99a的表達顯著低于MCF-7細胞。為了明確miR-99a對乳腺癌細胞侵襲和遷移的調控作用，本研究將miR-99a mimics轉染至高轉移性的人乳腺癌細胞MDA-MB-231中，觀察其在MDA-MB-231細胞中的作用，結果發(fā)現通過轉染miR-99a mimics來過表達miR-99a能夠顯著抑制MDA-MB-231細胞的侵襲及遷移能力。MCF-7細胞中miR-99a的表達水平顯著高于MDA-MB-231細胞，將miR-99a inhibitors轉染MCF-7細胞，抑制miR-99a在MCF-7細胞中的活性。劃痕實驗結果顯示，轉染 miR-99a inhibitors后的MCF-7細胞劃痕愈合速度顯著高于轉染control mimics后的MCF-7細胞。同時Transwell遷移實驗結果顯示轉染miR-99a inhibitors后的MCF-7細胞侵出小室的細胞數顯著增多，說明敲減miR-99a后，無轉移潛能的MCF-7細胞遷移能力增強。但體外Transwell的侵襲實驗中MCF-7細胞幾乎沒有侵襲能力，即使轉染miR-99a inhibitor后其侵襲能力有輕微上升，但沒有統(tǒng)計學差異，說明單獨miR-99a的降低并不足以使其獲得侵襲能力，可能miR-99a在調控細胞遷移過程中發(fā)揮更重要的作用。MDA-MB-231和MCF7兩株乳腺癌細胞本身就存在著很多基因和蛋白表達的不同，包括前者為ER-PR-，后者則為ER+PR-[18]，這些復雜的因素共同決定著腫瘤細胞的侵襲和轉移，以及對治療的敏感性，而在體內，腫瘤生長的微環(huán)境更是通過各個層次對其轉移發(fā)揮著重要的調控作用[19]，因此還需要更深入細致的實驗來進一步揭示miRNA在其中發(fā)揮的調控作用。

本研究采用TargetScan、PicTar4和miRanda 3個數據庫進行miR-99a靶基因的預測，發(fā)現MTMR3可能是與細胞侵襲、遷移相關的蛋白，是miR-99a的可能靶基因。最近有報道MTMR3可以通過活化Rac-1促進腫瘤細胞的遷移和侵襲[20]。本研究亦發(fā)現過表達miR-99a后能夠在mRNA水平上明顯抑制MTMR3的表達。接著本研究又通過miR-99a mimics與MTMR3-3′UTR報告基因質粒共轉染后熒光素酶相對活性檢測實驗，發(fā)現pMIR-MTMR3+miR-99a mimics組的熒光素酶相對活性減弱，表明MTMR3確實是miR-99a的靶基因。Kuo等[14]的研究發(fā)現miR-99a能夠在口腔癌細胞中通過靶向MTMR3來抑制腫瘤細胞的侵襲和遷移，但是miR-99a是否也是通過靶向于MTMR3來調控乳腺癌細胞MDA-MB-231的侵襲和遷移能力？本研究用siRNA敲低MTMR3在MDA-MB-231中的表達后，MDA-MB-231的侵襲和遷移能力顯著減弱。

綜上所述，本研究通過劃痕實驗和Transwell實驗，初步證實了miR-99a能夠抑制乳腺癌細胞的侵襲和遷移，同時通過生物信息學方法預測MTMR3是miR-99a的靶點，并通過實時定量PCR和報告基因實驗驗證了靶點，表明miR-99a可能通過靶向于MTMR3發(fā)揮對乳腺癌細胞遷移和侵襲的負向調控作用。上述結果為揭示乳腺癌轉移的機制以及研發(fā)抑制轉移的策略提供了新的思路，但是miR-99a是否確實通過靶向于MTMR3來調控乳腺癌的轉移能力，還需要在動物體內進一步的驗證。

[1] DeSantis C,Ma J,Bryan L,et al.Breast cancer statistics,2013[J]. CACancer J Clin,2014,64(1):52-62.

[2] Bartel D P.MicroRNAs:genomics,biogenesis,mechanism,and function[J].Cell,2004,116(2):281-297.

[3] BartelD P.MicroRNAs:target recognition and regulatory functions [J].Cell,2009,136(2):215-233.

[4] Huang Y,Shen X J,Zou Q,et al.Biological functions of microRNAs:a review[J].J PhysiolBiochem,2011,67(1):129-139.

[5] Tavazoie S F,Alarcn C,Oskarsson T,et al.Endogenous human microRNAs that suppress breast cancer metastasis[J].Nature, 2008,451(7175):147-152.

[6] Gregory P A,Bert A G,Paterson E L,et al.The miR-200 family and miR-205 regulate epithelialtomesenchymaltransition by targeting ZEB1 and SIP1[J].Nat CellBiol,2008,10(5):593-601.

[7] Valastyan S,Reinhardt F,Benaich N,et al.A pleiotropically acting microRNA,miR-31,inhibits breastcancermetastasis[J].Cell,2009, 137(6):1032-1046.

[8] Sun D D,Lee YS,Malhotra A,et al.miR-99 family of MicroRNAs suppresses the expression of prostate-specific antigen and prostate cancer cellproliferation[J].CancerRes,2011,71(4):1313-1324.

[9] LiD,Liu X,Lin L,et al.MicroRNA-99a inhibits hepatocellular carcinoma growth and correlates with prognosis of patients with hepatocellular carcinoma[J].J Biol Chem,2011,286(42):36677-36685.

[10] Torres A,Torres K,Pesci A,et al.Deregulation of miR-100, miR-99a and miR-199b in tissues and plasma coexists with increased expression of mTOR kinase in endometrioid endometrialcarcinoma[J].BMC Cancer,2012,12:369.

[11] Cui L,Zhou H,Zhao H,et al.MicroRNA-99a induces G1-phase cellcycle arrest and suppresses tumorigenicity in renalcellcarcinoma[J].BMC Cancer,2012,12:546.

[12] Chen C J,Zhao Z Y,Liu Y,et al.microRNA-99a is downregulated and promotes proliferation,migration and invasion in nonsmallcelllung cancer A549 and H1299 cells[J].OncolLett,2015, 9(3):1128-1134.

[13] Sun J,Chen Z,Tan X,et al.MicroRNA-99a/100 promotes apoptosis by targeting mTOR in human esophageal squamous cell carcinoma[J].Med Oncol,2013,30(1):411.

[14] Kuo Y Z,Tai Y H,Lo H I,et al.MiR-99a exerts anti-metastasis through inhibiting myotubularin-related protein 3 expression in oralcancer[J].OralDis,2014,20(3):e65-75.

[15] He L,Hannon G J.MicroRNAs:small RNAs with a big role in gene regulation[J].Nat Rev Genet,2004,5(7):522-531.

[16] Bockhorn J,Dalton R,Nwachukwu C,et al.MicroRNA-30c inhibits human breast tumour chemotherapy resistance by regulating TWF1 and IL-11[J].Nat.Commun,2013,4:1393.

[17] Shimono Y,Zabala M,Cho R W,et al.Downregulation of miRNA-200c links breast cancer stem cells with normal stem cells [J].Cell,2009,1138(3):592-603.

[18] Holliday D L,Speirs V.Choosing the right cellline for breast cancer research[J].Breast Cancer Res,2011,13(4):215.

[19] Joyce J A,Fearon D T.T cell exclusion,immune privilege,and the tumor microenvironment[J].Science,2015,348(6230):74-80.

[20] Oppelt A,Haugsten E M,Zech T,et al.PIKfyve,MTMR3 and their product PtdIns5P regulate cancer cell migration and invasion through activation ofRac1[J].Biochem J,2014,461(3):383-90.

Inhibitory effects of miR-99a on invasion and migration of human breast cancer cells

ZHANG Wei,CHEN Luoquan,YE Zhiguo,et al.Department of Oncology,Hangzhou First People's Hospital,Hangzhou 310006,China

Objective To investigate the effect ofmiR-99a on invasion and migration potentialofhuman breast cancer cells and its possible mechanism. Methods The expression level of miR-99a was detected in human breast cancer cell lines MDA-MB-231 and MCF-7 by qRT-PCR.Human breast cancer MDA-MB-231 cells were transfected with miR-99a mimics and controlmimics by Lipofectamine.Cellinvasion potentialwas evaluated by Transwellinvasion assay;cellmigration was detected by Transwellmigration assay and wound healing assay．The possible targetgenes ofmiR-99a were forecasted by bioinformatics tools and the reliability of these genes was analyzed. Results Remarkable inhibition of cell migration was detected in MDA-MB-231 cells transfected with miR-99a mimics by wound healing and Transwellmigration assay,compared to cells transfected with control mimics.MCF-7 cells transfected with miR-99a inhibitors showed increased migration,compared to cells transfected with control inhibitors.Transfection of miR-99a mimics into MDA-MB-231 cells led to a significant decrease in cell invasion as detected by Transwell invasion assay.Myotubularin related protein 3 (MTMR3)was forecasted by bioinformatics tools as a target of miR-99a, which was verified by RT-qPCR and 3'UTR luciferase reporter assays.Knock down of MTMR3 in MDA-MB-231cells inhibited cell migration and invasion.Conclusion miR-99a negatively may regulate the invasion and migration potentialofhuman breast cancer cells through targeting MTMR3．

Breast cancermiR-99a Invasion Migration MTMR3

2015-08-17）

（本文編輯：李媚）

國家自然科學基金資助項目（81373115）

310006 杭州市第一人民醫(yī)院，杭州市腫瘤醫(yī)院（張瑋）；浙江大學免疫學研究所（陳羅泉、葉治國、王青青）

王青青，E-mail：wqq@zju.edu.cn