周林，郭尚，蕭晉川，趙照林，郭宵飛，劉曉鋼，南曉潔，李艷婷，江山，張秋虎

(山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，太原 030031)

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雙孢蘑菇菌種質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程

周林，郭尚，蕭晉川，趙照林，郭宵飛，劉曉鋼，南曉潔，李艷婷，江山，張秋虎

(山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，太原 030031)

食用菌菌種是食用菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)，起著非常重要的巨大的作用。雙孢蘑菇菌種作為食用菌生產(chǎn)資料進(jìn)入商業(yè)活動(dòng)中，具有商品的屬性。介紹了雙孢蘑菇菌種商品質(zhì)量的檢驗(yàn)內(nèi)容和要求，分析了菌種質(zhì)量檢驗(yàn)中的重點(diǎn)操作規(guī)范，提出了雙孢蘑菇菌種商品質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程，作為山西省地方標(biāo)準(zhǔn)推薦，供山西的廣大雙孢蘑菇生產(chǎn)者和菌種生產(chǎn)者以及關(guān)聯(lián)業(yè)務(wù)人員參考應(yīng)用。

雙孢蘑菇；菌種商品；質(zhì)量檢驗(yàn)

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)實(shí)力的大發(fā)展，工農(nóng)業(yè)產(chǎn)量產(chǎn)值在世界中占有越來(lái)越重要的位置，我國(guó)的食用菌產(chǎn)業(yè)不斷擴(kuò)大，生產(chǎn)總量達(dá)到3千萬(wàn)噸左右，在世界食用菌生產(chǎn)量中占據(jù)第一位[1]。食用菌生產(chǎn)量的增長(zhǎng)，菌種是至關(guān)重要的。作為生產(chǎn)資料的菌種進(jìn)入商業(yè)活動(dòng)中具有商品的屬性，就有商品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和相應(yīng)的檢驗(yàn)規(guī)則。

雙孢蘑菇(Aagaricusbisporus)是主要的食用菌產(chǎn)品之一，微生物分類(lèi)屬于擔(dān)子菌亞門(mén)(Basidiomycotina)、傘菌目(Agaricales)、蘑菇科(Agaricaceae)、蘑菇屬(Agaricus)的草腐菌，在全國(guó)乃至世界上都是占有重要地位的，對(duì)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重大的影響。雙孢蘑菇的菌種作為生產(chǎn)資料是其雙孢蘑菇生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，是生產(chǎn)量和產(chǎn)品質(zhì)量的第一關(guān)鍵。菌種的生產(chǎn)技術(shù)要求和規(guī)范以及菌種的商品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)，直接影響食用菌的生產(chǎn)和產(chǎn)品質(zhì)量。為了實(shí)現(xiàn)雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)的技術(shù)規(guī)范化，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化，推進(jìn)我國(guó)特別是山西食用菌產(chǎn)業(yè)走向現(xiàn)代化，維護(hù)菌種生產(chǎn)者、經(jīng)營(yíng)者和使用者的合法權(quán)益，根據(jù)我國(guó)國(guó)家機(jī)關(guān)，質(zhì)量管理部門(mén)的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范，我們系統(tǒng)地，精準(zhǔn)地將雙孢蘑菇的菌種生產(chǎn)技術(shù)與質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)總結(jié)出來(lái)，供廣大雙孢蘑菇企業(yè)，栽培農(nóng)戶(hù)者，菌種生產(chǎn)者以及管理者參考應(yīng)用。本文系統(tǒng)地介紹雙孢蘑菇菌種的質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

1 我國(guó)雙孢蘑菇及其菌種生產(chǎn)與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)介紹

我國(guó)各級(jí)政府以及食用菌管理部門(mén)都非常重視食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和產(chǎn)品質(zhì)量，制定了很多相關(guān)的法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)，技術(shù)規(guī)范等，監(jiān)查管理有關(guān)食用菌產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)、流通、加工、銷(xiāo)售各個(gè)環(huán)節(jié)[2]。雙孢蘑菇也有很多相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)以及各省的地方標(biāo)準(zhǔn)和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[3]。我們?cè)谥贫ū炯夹g(shù)規(guī)范時(shí)也參照了很多國(guó)家有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和雙孢蘑菇的有關(guān)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，如《中華人民共和國(guó)種子法》；《食用菌菌種管理辦法》；《GB/T 12728-2006食用菌術(shù)語(yǔ)》；《GB/T 23190-2008雙孢蘑菇》；《NY/T 528-2010食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》；《NY/T 1846-2010食用菌菌種檢驗(yàn)規(guī)程》；《NY/T 1731-2009食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范》；《GB/T 19171 雙孢蘑菇菌種》；《GB/T 7096 食用菌衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》；《GB191-1990 包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)準(zhǔn)》；《GB4789.28食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》；《NY/T1097-2006食用菌菌種真實(shí)性鑒定 酯酶同工酶電泳法》；《GB9688 食品包裝用聚丙烯成型品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》；《DB23 T8 58-2005 雙孢蘑菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》；《DB31 T2 42-2000 食用菌菌種 雙孢蘑菇》等等。在本文中引用的有關(guān)上述標(biāo)準(zhǔn)中的條文，凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤內(nèi)容)或改訂版，均不適用本規(guī)程。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本規(guī)程。

2 菌種商品生產(chǎn)的工藝流程

菌種生產(chǎn)所包含的內(nèi)容一般是菌種生產(chǎn)制作涉及到的，生產(chǎn)條件，設(shè)備，人員，技術(shù)，操作，質(zhì)量檢驗(yàn)，入庫(kù)，運(yùn)輸，儲(chǔ)藏等全過(guò)程。

菌種商品生產(chǎn)的工藝流程包括，生產(chǎn)場(chǎng)地選擇——環(huán)境水源整備——廠區(qū)布局與廠房設(shè)置——設(shè)備與設(shè)施——生產(chǎn)原料儲(chǔ)備——衛(wèi)生檢驗(yàn)與消毒——培養(yǎng)基制成——分裝——滅菌——冷卻——接種——培養(yǎng)(檢驗(yàn))——成品——檢驗(yàn)合格——入庫(kù)管理

3 菌種生產(chǎn)場(chǎng)(機(jī)關(guān)，企業(yè))的責(zé)任與義務(wù)

菌種場(chǎng)生產(chǎn)食用菌菌種，并作為商品，食用菌的生產(chǎn)資料銷(xiāo)售販賣(mài)，必須經(jīng)過(guò)國(guó)家有關(guān)管理部門(mén)審批合格，持有生產(chǎn)，銷(xiāo)售食用菌菌種的資質(zhì)證明[4]。

生產(chǎn)或出售菌種的企業(yè)或科研單位，對(duì)所生產(chǎn)的菌種以及出售的菌種商品的質(zhì)量負(fù)有責(zé)任，并有義務(wù)將所生產(chǎn)的菌種商品的使用方法和注意事項(xiàng)向菌種使用者說(shuō)明。

4 菌種產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)要求

4.1 菌種質(zhì)量檢驗(yàn)(包括母種，原種，栽培種)要符合GB/T19171[5]， NY/T 528-2010[6]， NY/T 1846-2010[7]。

4.2 菌種生產(chǎn)單位要配有專(zhuān)職的質(zhì)量管理人員和質(zhì)量檢測(cè)人員，這些人員應(yīng)該經(jīng)過(guò)特殊的專(zhuān)業(yè)訓(xùn)練，具有一定的專(zhuān)業(yè)資質(zhì)、專(zhuān)業(yè)經(jīng)歷和檢測(cè)技能[4]。

4.3 菌種質(zhì)量檢驗(yàn)采取生產(chǎn)單位常規(guī)自檢和國(guó)家質(zhì)量管理部門(mén)監(jiān)查檢測(cè)相結(jié)合的方式。生產(chǎn)單位制定質(zhì)量管理規(guī)則，設(shè)立專(zhuān)職檢驗(yàn)人員，按期進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，并對(duì)全部生產(chǎn)中的質(zhì)量管理工作統(tǒng)一行使管理職責(zé)。菌種生產(chǎn)單位應(yīng)與國(guó)家專(zhuān)管農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量和食用菌產(chǎn)品質(zhì)量的有關(guān)單位積極配合，主動(dòng)接受質(zhì)量管理和檢測(cè)。

4.4 菌種質(zhì)量檢驗(yàn)的抽樣

4.4.1 質(zhì)量檢驗(yàn)的抽樣應(yīng)具有代表性，按產(chǎn)品的批次進(jìn)行。母種批次是指同一品種，接種時(shí)間，培養(yǎng)方法，培養(yǎng)條件的產(chǎn)品；原種，栽培種批次是指同一種源，制作方法，培養(yǎng)方法，培養(yǎng)條件的產(chǎn)品。

4.4.2 抽樣方法采取隨機(jī)抽取法，按批隨機(jī)抽取被檢樣品。母種按品種、培養(yǎng)條件、接種時(shí)間分批編號(hào)，原種、栽培種按菌種來(lái)源、制種方法和接種時(shí)間分批編號(hào)。

4.4.3 母種、原種、栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的10%，5%，1%。但每批抽樣數(shù)量不得少于10支、瓶(袋)；超過(guò)100支、瓶(袋)的，可進(jìn)行兩級(jí)抽樣(參照GB/T19171[5])。

4.5 菌種質(zhì)量檢驗(yàn)項(xiàng)目和檢驗(yàn)方法(如表1所示)

表1 菌種質(zhì)量檢驗(yàn)項(xiàng)目和檢驗(yàn)方法

表1續(xù)

4.5.1 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。表1中的菌絲培養(yǎng)過(guò)程中的雜菌檢驗(yàn)采用培養(yǎng)物鏡檢，用放大倍數(shù)不低于10×40的光學(xué)顯微鏡對(duì)培養(yǎng)物的水封片進(jìn)行觀察(參照NY/T1846-2010[7])，每一檢樣應(yīng)觀察不少于30個(gè)視野。

4.5.2 細(xì)菌檢驗(yàn)。取少量疑有細(xì)菌污染的培養(yǎng)物，按無(wú)菌操作接入GB4789.28[8]中4.8規(guī)定的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液中，25～28℃振蕩培養(yǎng)1～2天，觀察培養(yǎng)液是否混濁。培養(yǎng)液混濁，為有細(xì)菌污染；培養(yǎng)液澄清，為無(wú)細(xì)菌污染。

4.5.3 霉菌檢驗(yàn)。取少量疑有霉菌污染的培養(yǎng)物，按無(wú)菌操作接入PDA中，25～28℃培養(yǎng)3～4天，觀察到雙孢菇以外的菌落，檢查是否有綠色，黑，紅，黃，灰等顏色的異常，或有異味出現(xiàn)，可認(rèn)為有霉菌污染。必要時(shí)可以做水封片檢驗(yàn)(參照NY/T1846-2010[7])。

4.5.4 菌絲生長(zhǎng)速度測(cè)定(參照NY/T1846-2010[7]4.5執(zhí)行)。

母種：用直徑90mm的培養(yǎng)皿滅菌后，在無(wú)菌條件下倒入使用的(如PDA等)培養(yǎng)基20mL，制成平板，接種平板5個(gè)，25℃±1℃下培養(yǎng)，48h后觀察是否有污染發(fā)生，之后再培養(yǎng)7～10天，觀察并記錄菌絲每日生長(zhǎng)量以及長(zhǎng)滿(mǎn)平板天數(shù)。

原種和栽培種：使用培養(yǎng)基(培養(yǎng)基參照NY/T528-2010[6])如下任選1種。

腐熟麥桿或稻桿(干)77%，腐熟牛糞粉(干)20%,石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量62%±1%,pH7.5。

腐熟棉籽殼(干)97%，石膏粉1%,碳酸鈣2%,含水量55%±1%, pH7.5。

谷粒(小麥，谷子，玉米，高粱)98%，石膏粉2%,含水量50%±1%, pH7.5。

滅菌后接種，在25℃左右下培養(yǎng)，3日后進(jìn)行首次觀察，以后每周觀察1次，菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)之前1周要每日觀察，記錄菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)滿(mǎn)瓶或袋的天數(shù)。

4.5.5 菌種遺傳性鑒定(參照酯酶同工酶(Est)鑒定 NY/T1097-2006[9])。

取菌齡為15～20天的試管母種,刮取菌絲,按1∶3∶0.5的比例混合菌絲(g)、0.1mol/L磷酸緩沖液(mL)和石英砂(g),研磨成勻漿,臺(tái)式離心機(jī)10000r/min離心5min,取上清液,按5∶1∶1的比例混合上清液、40%蔗糖和0.01%溴酚藍(lán)溶液作為電泳樣品, 4℃下冷藏備用。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳。用pH8.9Tris-HCl緩沖液配制9%分離膠,用pH8.3Tris-甘氨酸作電極緩沖液。點(diǎn)樣75μL, 3℃下120V電泳20min后穩(wěn)壓200V,4h。用固藍(lán)RR鹽60mg, 0.1mol/L磷酸緩沖液(pH6.0) 80mLα-萘乙酯38mg和β-萘乙酯38mg溶于3mL丙酮配制的染色液染色,顯現(xiàn)酶譜,再根據(jù)特征帶分型。

4.5.6 品種栽培特性試驗(yàn)。將被檢母種制成原種。栽培試驗(yàn)要根據(jù)供試種類(lèi)選擇適當(dāng)培養(yǎng)基，接種后分3組(每組3m2)進(jìn)行常規(guī)管理，同時(shí)將該母種的出發(fā)菌株設(shè)為對(duì)照，亦做同樣處理。根據(jù)表2所列項(xiàng)目，做好栽培記錄，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)結(jié)果。對(duì)比二者的檢驗(yàn)結(jié)果，以時(shí)間計(jì)的檢驗(yàn)項(xiàng)目中，被檢母種的任何一項(xiàng)時(shí)間較對(duì)照菌株推遲5天以上(含5天)者，為不合格；產(chǎn)量性狀差異顯著低于對(duì)照菌株者，為不合格；菇體外觀形態(tài)與對(duì)照明顯不同或畸形者，為不合格。

表2 母種栽培特性檢驗(yàn)項(xiàng)目

4.5.7 各種菌種產(chǎn)品經(jīng)過(guò)上述質(zhì)量檢驗(yàn)，確認(rèn)其遺傳類(lèi)型與對(duì)照相同，再經(jīng)出菇試驗(yàn)確定產(chǎn)量及品質(zhì)等栽培農(nóng)藝性狀合格，方可用于擴(kuò)大繁殖或出售。

5 菌種商品的標(biāo)簽，標(biāo)志，包裝檢驗(yàn)

5.1 菌種商品標(biāo)簽、標(biāo)志、包裝

作為商品的菌種產(chǎn)品，要逐一檢查后，貼上商品標(biāo)簽。每支、瓶(袋)菌種都要貼有清晰的標(biāo)簽、標(biāo)志，進(jìn)行良好的包裝。

5.2 菌種商品的標(biāo)簽，標(biāo)志，包裝檢驗(yàn)

按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn). GB191-1990 包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)準(zhǔn)》中的規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)。

6 菌種檢驗(yàn)合格的判定與檢驗(yàn)檔案

6.1 根據(jù)按以上檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)的結(jié)果判斷菌種商品是否合格。凡是全部符合質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的，判定為合格菌種商品，其中任何一項(xiàng)不符合質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的，判定為不合格菌種商品，不合格菌種商品不得出售。

6.2 菌種商品質(zhì)量檢驗(yàn)記錄建立檔案，并保存至少2年以上。

7 菌種商品質(zhì)量保證書(shū)及使用說(shuō)明書(shū)

7.1 凡是菌種商品，包括商業(yè)銷(xiāo)售、研究試驗(yàn)轉(zhuǎn)讓、生產(chǎn)示范推廣等使用的菌種，其生產(chǎn)單位都要具有菌種產(chǎn)品質(zhì)量保證書(shū)，以示菌種質(zhì)量合格，并對(duì)產(chǎn)品承擔(dān)義務(wù)和責(zé)任，做到對(duì)使用者負(fù)責(zé)，對(duì)社會(huì)負(fù)責(zé)。

7.2 菌種商品應(yīng)具備菌種使用說(shuō)明書(shū)，以幫助使用者更好地生產(chǎn)，獲得更好的效益。

[1]張俊飚，李波. 對(duì)我國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展的現(xiàn)狀與政策思考[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(社會(huì)科學(xué)版)，2012(5)：13-21.

[2]李賀，許修宏，王相剛. 我國(guó)食用菌技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)狀、問(wèn)題及對(duì)策研究[J]. 中國(guó)食用菌， 2015(3)：1-6.

[3]鄭素月，黃晨陽(yáng)，張金霞. 我國(guó)食用菌質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化體系建設(shè)及實(shí)施概況[J].浙江食用菌，2009,17(3)：6-9.

[4]中國(guó)農(nóng)業(yè)部. 食用菌菌種管理辦法(農(nóng)業(yè)部令2015年第1號(hào)修訂) http://www.moa.gov.cn，20150506_4581023.htm，2015-05-06 11:07

[5]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì). GB/T 19171-2003 雙孢蘑菇菌種[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2003.

[6]中國(guó)農(nóng)業(yè)部. NY/T 528-2010 食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程[S]. 北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社， 2010.

[7]中國(guó)農(nóng)業(yè)部. NY/T 1846-2010 食用菌菌種檢驗(yàn)規(guī)程[S]. 2010.

[8]中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì). GB4789.28 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求[S].北京:中國(guó)質(zhì)檢出版社，2014.

[9]中國(guó)農(nóng)業(yè)部. NY/T 1097-2006 食用菌菌種真實(shí)性鑒定 酯酶同工酶電泳法[S].2006.

[10]中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì). GB/191-2008 包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志[S].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社， 2008.

Commodity Quality Inspection Items and Methods ofAgaricusbisporusSpawn

Zhou Lin, Guo Shang, Xiao Jinchuan, Zhao ZhaoLin,Guo Xiaofei, Liu Xiaogang，Nan Xiaojie, Li Yanting, Jiang Shan, Zhang Qiuhu

(Shanxi Provincial Academy of Agricultural Sciences,Institute of Edible Fungi, Taiyuan 030031)

The spawn is very important for development of edible fungus industry.Agaricusbisporusspawn as edible fungus production data to enter the commercial activity, has the attribute of commodity. This paper introduces the inspection contents and requirements ofAgaricusbisporusspawn quality. The rules for the inspection of product quality ofAgaricusbisporusspawn were put forward，and offers reference for the large number ofAgaricusbisporusproducer and the related service personnel.

Agaricusbisporus; Spawn commodity；Quality standard

房春果(1969-)，男，工程師，從事林業(yè)生產(chǎn)與林業(yè)科研工作，E-mail：346857294@qq.com。

2016-07-06

山西省煤基重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(FT2014-03);山西省農(nóng)科院博士基金 (YBSJJ1616)資助

S646.1+1

B

作者簡(jiǎn)介：周林(1958-)，男，博士，主要從事食用菌資源及菌根食用菌共生機(jī)理研究，食用菌生產(chǎn)技術(shù)與產(chǎn)品質(zhì)量保證體系研究，E-mail：nkysyj301@126.com。

DOI.:11.13268/j.cnki.fbsic.2016.06.015