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(1.湖南醫(yī)藥學院檢驗醫(yī)學院，湖南 懷化 418000；2.懷化市第一人民醫(yī)院檢驗科)

·臨床醫(yī)學·

兒童急性下呼吸道感染非典型病原體病原學分析

周秀萍1*，楊長順2，林梅1

(1.湖南醫(yī)藥學院檢驗醫(yī)學院，湖南 懷化 418000；2.懷化市第一人民醫(yī)院檢驗科)

目的調查分析兒童急性下呼吸道感染非典型病原體的流行情況，為臨床合理用藥提供病原學依據。方法采集1 759例急性下呼吸道感染患兒的血清標本，采用間接免疫熒光法進行呼吸道九聯(lián)檢的檢測，得出病原體分布情況，并對其結果進行分析。結果在1 759例兒童急性下呼吸道感染患者中，總陽性率為38.7%，其中檢出率最高的是肺炎支原體，占19.6%，其次為嗜肺軍團菌12.3%，呼吸道合胞病毒4.1%，未檢出Q熱立克次體和肺炎衣原體。共發(fā)現(xiàn)混合感染患者47例，混合感染率達6.9%。結論本地區(qū)兒童急性下呼吸道感染的非典型病原體以肺炎支原體和嗜肺軍團菌較常見，亦存在其他病原體感染，不同地區(qū)的病原菌分布存在著一定的差異，在臨床用藥中應根據病原體的不同選擇用藥。

兒童； 急性下呼吸道感染； 呼吸道九聯(lián)檢； 非典型病原體

急性下呼吸道感染是兒科門診及住院患者中的常見病及多發(fā)病，其感染病原體的種類多，臨床表現(xiàn)錯綜復雜，并且由于兒童免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，更易引起多種嚴重并發(fā)癥，如呼吸衰竭、心肌炎、心力衰竭等，甚至危及到患者的生命。本研究擬對本地區(qū)呼吸道九聯(lián)檢的檢測結果進行分析，了解本地區(qū)兒童急性下呼吸道感染非典型病原體的分布與流行情況，為臨床治療及合理用藥提供可靠的病原學依據。

1 資料與方法

1.1一般資料病例來源為2015年1月～2015年12月期間，在懷化市第一人民醫(yī)院兒科門診就診及住院的0～7歲下呼吸道感染患兒1 759例?？崭钩槿§o脈血，分離血清，當天完成呼吸道九聯(lián)檢各項目(嗜肺軍團菌，肺炎支原體，Q熱立克次體，肺炎衣原體，腺病毒，呼吸道合胞病毒，甲型流感病毒，乙型流感病毒，副流感病毒)的檢測。

1.2試劑和儀器九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢測試劑盒(間接免疫熒光法indirectimmuno fluorescence assay，IFA)，購自鄭州安圖生物工程股份有限公司。該檢測是基于待測樣本中的IgM抗體與吸附在載玻片上相應抗原所發(fā)生的反應。樣本中若存在特異性抗體則與抗原結合不被洗脫，而其他未與抗原結合的抗體在洗滌步驟中被除去。下一步驟中抗原-抗體復合物與熒光素標記的抗人球蛋白結合，再用水洗去未結合的標記抗體，最后用熒光顯微鏡觀察結果。儀器為BX-51奧林巴斯熒光顯微鏡。

1.3方法在30 μL 1∶1稀釋的血清中加入150 μL吸附劑，混勻，3 000 rpm離心15 min；在載玻片的每孔中加15 μL稀釋劑處理后的血清，在另一張載玻片的每孔中加入15 μL不稀釋的陽性對照和陰性對照；濕盒內37 ℃溫育90 min；PBS沖洗后浸泡其中，水平搖床上搖動10 min，再用蒸餾水蘸洗；晾干，每孔加入15 μL FITC標記物，濕盒內37 ℃溫育30 min；重復上述洗滌步驟，加封閉介質，蓋上蓋玻片，鏡檢。

1.4結果判斷腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒及副流感病毒的整個包被孔中有1%～15%細胞的細胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光(在副流感病毒和呼吸道和胞病毒中能同時觀察到著色的合胞)；軍團菌、衣原體或立克次體中所有的菌體呈現(xiàn)蘋果綠色熒光；支原體出現(xiàn)細胞外圍蘋果綠色熒光。見圖1。

2 結 果

2.1九種病原體檢測結果在1 759例急性下呼吸道感染患兒中，非典型病原體總的陽性率為38.7%(684/1759)，其中肺炎支原體的檢出率最高為19.6%，共檢出345例，占到了陽性病例的一半(345/684)，其次為嗜肺軍團菌，檢出率為12.3%，呼吸道合胞病毒的檢出率為4.1%，未檢出Q熱立克次體和肺炎衣原體，見表1。

2.2混合感染結果共發(fā)現(xiàn)混合感染患者47例，混合感染率6.9%，以肺炎支原體合并腺病毒、肺炎支原體合并呼吸道合胞病毒最為常見。

3 討 論

近年來，隨著各種抗生素的廣泛應用，細菌如肺炎鏈球菌等引起的兒童呼吸道感染的感染率有所下降，但研究表明其他非典型病原體的感染率呈上升趨勢[1-2]。明確病原體對呼吸道感染的診斷和治療具有重要的意義，長期以來檢測呼吸道感染病原體的“金標準”是分離培養(yǎng)出病原體。由于多數患兒在入院前均已用藥，故分離培養(yǎng)陽性率低，同時由于實驗條件的限制，細胞培養(yǎng)在許多基層醫(yī)院沒有辦法開展。一般情況下當病原體感染人體1～2周后，血清中特異IgM抗體會急劇升高，3～4周左右達到高峰。因此，檢測血清中特異IgM抗體可作為急性感染的診斷指標[3]。

表1呼吸道九聯(lián)檢結果圖

病原體陽性數陽性率嗜肺軍團菌21612.3%肺炎支原體34519.6%Q熱立克次體00.0%肺炎衣原體00.0%腺病毒181.0%呼吸道合胞病毒724.1%甲型流感病毒70.4%乙型流感病毒90.5%副流感病毒130.7%總陽性率68438.7%

本組1 759例下呼吸道感染患兒中，共有684例檢出病原體特異性IgM抗體，陽性率達38.7%,低于長春[4]，北京[5]地區(qū)。其中肺炎支原體的檢出率最高，占19.6%(345/1759)，可見引起本地區(qū)下呼吸道感染的病原體仍以支原體為主。排在第二位的病原體為嗜肺軍團菌占12.3%(216/1759)，分析原因可能是隨著生活水平的提高，空調已經成為日常家用電器，由于很多家庭對于空調的清洗及消毒沒有引起足夠的重視，導致軍團菌在空調設備冷卻水中檢出率較高，如長沙市公共場所集中空調通風系統(tǒng)檢出率18%，冷卻水的檢出率24.3%，冷凝水檢出率5.5%[6]。冬季由于天氣寒冷，很多家長不愿意帶小孩出門，長時間呆在空調房里，故嗜肺軍團菌的感染率較其他季節(jié)明顯升高。軍團菌肺炎的臨床癥狀復雜且不具有特異性，臨床醫(yī)生在診療時不易判斷，此時進行血清病原學檢測就顯得尤為重要。排在第三位的是呼吸道合胞病毒，該病毒是嬰幼兒毛細支氣管炎最常見的病原體。本地區(qū)未檢出Q熱立克次體和肺炎衣原體。我國占地面積廣，幅員遼闊，兒童急性下呼吸道感染的病原體的分布在不同地區(qū)存在著明顯差別，研究顯示，瀘州地區(qū)以呼吸道合胞病毒感染為主[7],濮陽地區(qū)[8]以肺炎支原體感染為主。因此各地區(qū)均需對本地區(qū)病原體的流行情況進行調查統(tǒng)計，以指導臨床。

通過檢測共發(fā)現(xiàn)混合感染者47例，混合感染的病原體中以肺炎支原體合并腺病毒、肺炎支原體合并呼吸道合胞病毒最為常見。肺炎支原體的高混合感染率提示，該病原體的感染可促進其他病原體的感染，但具體機制尚有待進一步研究。

本研究中呼吸道常見九種病原體特異IgM抗體的檢測的方法為間接免疫熒光法(IFA)，該技術將抗原抗體反應的高特異性和熒光素標記的高敏感性結合起來，能夠快速而準確地檢測多種病原體，可作為兒童呼吸道感染病因診斷的重要試驗手段。該法操作簡便，不需要特殊的儀器，各級醫(yī)院均可開展，且不受是否用過抗生素的干擾，具有良好的應用前景，為防治本地區(qū)兒童下呼吸道急性感染提供了重要的病原學依據。

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AnalysisofAtypicalPathogensinChildrenwithAcuteLowerRespiratoryTractInfections

ZHOU Xiuping，YANG Changshun，LIN Mei

(CollegeofLaboratoryMedicine,HunanMedicineUniversity，Huaihua,Hunan418000,China)

ObjectiveTo analyse the distribution of atypical pathogens in children with acute lower respiratory tract infections and give guidance of therapy based on our study.MethodNine tests of respiratory tract of 1 759 patients which serum was collected were examined by indirectimmuno fluorescence assay.The distribution of pathogens was analysed.

ResultsIn 1 759 patients,the total positive rate of pathogens was 38.7%,and Mycoplasma pneumonia was the most common pathogen of infection(19.6%),followed by Legionella pneumophila(12.3%),Respiratory syncytial virus(4.1%).We didn’t detect Richettsia query and Chlamydia pneumoniae.Mixed infections were found in 47 cases,with the positive rate of 6.9%.ConclusionThe common atypical pathogens of acute lower respiratory tract infections are Mycoplasma pneumonia and Legionella pneumophila.Species difference exits in different ages.Treatments should be given based on pathogens.

children; acute lower respiratory tract infections; nine tests of respiratory tract; atypical pathogens

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.03.021

2015-12-25；

2016-03-30

*通訊作者，E-mail：changshunyang@sohu.com.

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蔣湘蓮)