蘇惠婷 李 冰 曹 炬 張莉萍

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)室，重慶400016)

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CXCL13、IL-31在原發(fā)性肝癌患者血清中的表達(dá)及臨床意義①

蘇惠婷 李 冰 曹 炬 張莉萍

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)室，重慶400016)

目的：檢測原發(fā)性肝癌(Primary hepatic carcinoma,PHC)患者血清CXCL13、IL-31的表達(dá)情況，探討其對原發(fā)性肝癌診斷治療和預(yù)后評估的臨床價值。方法：收集78例PHC患者和36例健康體檢者血清標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測CXCL13、IL-31的表達(dá)水平，統(tǒng)計軟件分析與臨床病理特征和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系，Spearman相關(guān)分析檢驗(yàn)與肝功能預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性，ROC曲線分析CXCL13、IL-31、AFP對PHC的診斷價值。 結(jié)果：PHC患者血清CXCL13表達(dá)明顯高于對照組(P<0.001)，與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān)(P<0.05)，與Child-pugh評分(Child pugh score)呈正相關(guān)；CXCL13聯(lián)合AFP的ROC曲線下面積為0.938 (P<0.05)，靈敏度和特異性分別為82.8%、100%，較兩種指標(biāo)單獨(dú)診斷時明顯增高。然而，PHC患者血清IL-31的表達(dá)與對照組無顯著差異，與臨床各項(xiàng)指標(biāo)均不相關(guān)。 結(jié)論：CXCL13在PHC患者血清中高表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān)，并未發(fā)現(xiàn)IL-31在PHC患者血清中存在表達(dá)增高的現(xiàn)象。因此，CXCL13可作為原發(fā)性肝癌診斷治療及預(yù)后評估的血清學(xué)標(biāo)志物。

原發(fā)性肝癌；CXCL13；IL-31；ROC曲線

原發(fā)性肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，具有發(fā)病隱匿、轉(zhuǎn)移率高、易復(fù)發(fā)、治愈率低等臨床特點(diǎn)，其死亡率高居惡性腫瘤第三位，嚴(yán)重影響到人們的生活質(zhì)量和生命健康[1]?，F(xiàn)階段，原發(fā)性肝癌的臨床診斷多以甲胎蛋白(AFP)為基礎(chǔ)的血清學(xué)檢測結(jié)合影像學(xué)檢查為主，其治療方案的選擇和臨床預(yù)后的評估多參考美國癌癥委員會制定的TNM(Tumor /Node/Metastasis)分期標(biāo)準(zhǔn)。然而，相關(guān)報道證實(shí)AFP診斷原發(fā)性肝癌的敏感度較低，約20%～40%的患者呈陰性結(jié)果，臨床漏診率較高[2]，并且TNM分期對臨床預(yù)后評估的準(zhǔn)確性仍飽受爭議[3]。因此，尋找敏感度高、特異性強(qiáng)的血清學(xué)標(biāo)志物對于原發(fā)性肝癌的臨床診斷和預(yù)后評估顯得尤為重要。

趨化因子屬于細(xì)胞因子超家族，可通過與細(xì)胞表面同源性G蛋白耦聯(lián)受體結(jié)合，參與腫瘤細(xì)胞的黏附、增殖、抗凋亡及血管生成等多種病理生理過程。近年來研究表明，趨化因子CXCL13參與了乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移[4-6]。另外，相關(guān)報道也證實(shí)白細(xì)胞介素31(IL-31)在濾泡性淋巴瘤患者中高表達(dá)，并且表達(dá)水平與腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)[7]。 因此，我們預(yù)測CXCL13、IL-31有望成為腫瘤診斷治療的新指標(biāo)，值得注意的是，目前國內(nèi)尚無CXCL13、IL-31與原發(fā)性肝癌的相關(guān)研究。

本文通過檢測原發(fā)性肝癌患者和健康體檢者血清中CXCL13、IL-31的表達(dá)水平，比較分析其與臨床病理特征和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的關(guān)系，探討其對原發(fā)性肝癌診斷和預(yù)后評估的臨床意義，為腫瘤治療靶點(diǎn)選擇提供有效的理論依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2015年1月至2015年12月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院78例原發(fā)性肝癌患者作為研究對象，其中男性67例，女性11例，年齡22～78歲，平均年齡(56.69±12.40)歲。原發(fā)性肝癌患者入選標(biāo)準(zhǔn)：①參照中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會修訂的肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；②術(shù)前未經(jīng)過任何的抗癌治療，如放療、化療或介入栓塞治療等；③排除存在自身免疫性疾病以及合并其他系統(tǒng)腫瘤的患者。

選取36例我院同期體檢的健康人群作為對照組，其中男性30例，女性6例，年齡23～76歲，平均年齡(54.86±10.34)歲。實(shí)驗(yàn)組和對照組在年齡、性別上無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.721；P=0.443)。本研究經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)且患者已簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集患者手術(shù)前血液3 ml，4℃條件下300 r/min離心10 min，將血清標(biāo)本置于-80℃保存，避免反復(fù)凍融?；颊吲R床病例資料來源于我院電子病例系統(tǒng)，統(tǒng)計項(xiàng)目包括性別、年齡、基礎(chǔ)疾病、并發(fā)癥、腫瘤直徑及數(shù)目、轉(zhuǎn)移情況、臨床TNM分期等，其中并發(fā)癥包括腹水、自發(fā)性腹膜炎、肝癌破裂出血以及肝性腦病等項(xiàng)目，臨床TNM分期參照國際抗癌協(xié)會惡性腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)?；颊邔?shí)驗(yàn)室相關(guān)指標(biāo)來自我院檢驗(yàn)科網(wǎng)絡(luò)管理系統(tǒng)，包括血液常規(guī)、生化指標(biāo)、凝血項(xiàng)目、腫瘤標(biāo)志物和病毒感染指標(biāo)等。根據(jù)上述相關(guān)指標(biāo)，計算原發(fā)性肝癌患者Child-pugh評分(Child pugh score)和終末期肝病模型(Model for end-stage liver disease，MELD)評分。

1.2.2 血清CXCL13、IL-31水平檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測實(shí)驗(yàn)組與對照組血清CXCL13、IL-31表達(dá)水平，檢測試劑盒購于R&D公司，具體操作按說明書進(jìn)行。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度與光密度(OD)值，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行曲線擬合，得到擬合效果最佳的標(biāo)準(zhǔn)曲線及標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，從而計算出血清標(biāo)本中CXCL13和IL-31的濃度。CXCL13、IL-31的最低檢測限分別為3.97 pg/ml和1.0 pg/ml。

1.2.3 ROC曲線分析 根據(jù)血清標(biāo)本CXCL13、IL-31和AFP的表達(dá)水平繪制應(yīng)用受試者工作特征(Receiver operating characteristics,ROC)曲線，進(jìn)而分析CXCL13、AFP、IL-31等指標(biāo)對原發(fā)性肝癌的診斷價值。ROC曲線下面積(AUC)>0.7，則該指標(biāo)可用于臨床診斷，AUC越接近1，診斷價值越大。根據(jù)最大約登指數(shù)(Youden index,靈敏度+特異性-1)確定最佳截斷值，得出相應(yīng)的靈敏度和特異性。采用Logistic回歸分析形成CXCL13聯(lián)合AFP的變量參數(shù)，同樣采用ROC曲線分析該聯(lián)合變量的診斷價值。最后采用Z檢驗(yàn)比較CXCL13、AFP以及CXCL13聯(lián)合AFP等指標(biāo)對原發(fā)性肝癌的診斷價值。

2 結(jié)果

2.1 患者基本信息 患者基本信息包括性別、年齡、并發(fā)癥、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)以及預(yù)后評估指標(biāo)等項(xiàng)目。78例PHC患者的平均年齡為57歲，其中男性67例，女性11例。從實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)來看，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的平均值分別為79.95 U/L和 101.60 U/L， AFP表達(dá)水平波動范圍大，最高檢測值可達(dá)7×106ng/ml以上。從Child-pugh評分來看，原發(fā)性肝癌患者中肝功能A級(5～6分)33例，B級(7～9分)27例，C級(≥10分) 18例。從TNM分期來看，Ⅰ～Ⅱ期34例，Ⅲ～Ⅳ期44例。從相關(guān)并發(fā)癥來看，腹水所占比例最高(32.05%)，肝性腦病及肝癌破裂出血所占比例較低。見表1。

2.2 CXCL13、IL-31在實(shí)驗(yàn)組和對照組的表達(dá)情況 ELISA方法檢測實(shí)驗(yàn)組和對照組血清CXCL13、IL-31的表達(dá)水平，其結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組和對照組血清CXCL13的表達(dá)量分別為(190.7±140.7)pg/ml和(123.4±140.8)pg/ml，IL-31表達(dá)量分別為(25.2±98.6)pg/ml和(26.0±41.5)pg/ml。將兩組數(shù)據(jù)經(jīng)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較后發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌組血清CXCL13水平明顯高于對照組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)；然而IL-31水平與對照組相比并無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.558)。見圖1。

2.3 CXCL13、IL-31的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系 采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)分析原發(fā)性肝癌患者血清CXCL13、IL-31的表達(dá)水平與各項(xiàng)臨床病理特征的關(guān)系。CXCL13表達(dá)水平顯示，腫瘤直徑>5 cm明顯高于直徑≤5 cm (229.54 pg/ml vs 165.53 pg/ml；P=0.041)；患者合并腫瘤轉(zhuǎn)移的表達(dá)量明顯高于無轉(zhuǎn)移(231.31 pg/ml vs 170.41 pg/ml；P=0.044)；晚期肝癌(Ⅲ～Ⅳ期)明顯高于早期肝癌(Ⅰ～Ⅱ期) (242.42 pg/ml vs 148.85 pg/ml,P=0.004)；并發(fā)癥中合并腹水明顯高于無腹水 (263.51 pg/ml vs 172.45 pg/ml,P=0.037)，而與肝硬化、門靜脈高壓和食管靜脈曲張不相關(guān)(P>0.05)。值得注意的是，血清IL-31表達(dá)水平在所有分組中均無統(tǒng)計學(xué)差異。見表2。

表1 原發(fā)性肝癌組與對照組基本資料

Tab.1 Baseline characteristics of PHC patients and Health controls

ParameterPHCpatientsHealthcontrolsPatients，n7836Male[n(%)]67(8590)30(8333)Age(y)5669±12405486±1034HematologyHb(g/L)12342±236013964±1066Leukocytes(109/L)684±321664±147Thrombocytes(109/L)15005±803620233±5689BiochemistryAST(U/L)10160±128342269±763ALT(U/L)7995±86312578±849GGT(U/L)23363±266933006±969ALP(U/L)18069±151156047±2878Albumin(g/L)3783±6604464±621Totalbilirubin(μm/L)2740±5247946±345Creatinine(μm/L)7601±26777836±1920INR116±022127±017AFP(ng/ml)10556286±852430-Prognosisscore-Child?Pughscore740±220-MELD6183±733-Liver?relatedcomplications-Ascites[n(%)]25(3205)-Spontaneousbacterialperitonitis[n(%)]2(256)-Hepaticencephalopathy[n(%)]1(128)-Esophagealgastric?fundusvariceal[n(%)]13(1667)-Ruptureandbleedingoflivercancer[n(%)]1(128)-

Note：-.Not available.

2.4 CXCL13、IL-31表達(dá)水平與臨床實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系 將實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)中的連續(xù)變量(如AST和ALT)按照均值分為兩組，分類變量(如乙肝表面抗原HBsAg、乙肝DNA定量HBV-DNA)按分類特征分為兩組，并采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)分析CXCL13、IL-31與PHC患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系。PHC患者血清CXCL13的表達(dá)水平與血紅蛋白(HB)、血清白蛋白(ALB)、膽堿酯酶(CHE)及國際標(biāo)準(zhǔn)化比值(INR)相關(guān)(P<0.001；P=0.001；P=0.005和P=0.042)，與患者ALT、AST水平等無明顯相關(guān)性(P>0.05)。從病毒感染指標(biāo)來看，CXCL13表達(dá)水平與原發(fā)性肝癌患者血清HBsAg狀態(tài)無關(guān)，與HBV-DNA載量也無相關(guān)性(P=0.441)。從腫瘤標(biāo)志物來看，PHC患者血清CXCL13的表達(dá)水平與AFP無明顯相關(guān)。另外，PHC患者血清IL-31表達(dá)水平與所有實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)均不相關(guān)。見表3。

表2 CXCL13、IL-31的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

Tab.2 Relation of CXCL13,IL-31 expression with clinicopathological parameters of patients with PHC

ParametersnCXCL13(pg/ml)x±sPIL?31(pg/ml)x±sPAge(y)≤655418341±1285800711388±46900756>652424265±139493623±13592SexMale6719438±1252704302284±91090298Female1124580±17923803±377TNMstageⅠ-Ⅱ3414885±87310004775±6190413Ⅲ-Ⅳ4424242±149613080±11189Tumorsize≤5cm3416553±105390041817±6400724>5cm4422954±147613048±11195NooftumorsSingle3517155±101890133795±6120848Multiple43226133±152103118±11319MetastasisPresence4023131±1555000443330±117190173Absence3817041±9956755±584LivercirrhosisPresence4521507±1497803043115±110590143Absence3318332±10835658±229AscitesPresence2526351±1766200372061±68670973Absence5317245±97322083±9163PortalhypertensionPresence1726515±1912501102910±83340648Absence6118394±108711842±8536Esophagealgastric?fundusvaricealPresence1328891±192090079973±11710609Absence6518418±113222296±9239

2.5 CXCL13、IL-31與預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性分析 為探討CXCL13、IL-31在原發(fā)性肝癌患者肝功能預(yù)后評估的臨床應(yīng)用價值，我們采用Spearman相關(guān)分析檢驗(yàn)78例原發(fā)性肝癌患者血清中CXCL13、IL-31表達(dá)水平與肝功能預(yù)后評估指標(biāo)的相關(guān)性。研究結(jié)果顯示：①從反映肝細(xì)胞損傷的指標(biāo)來看，CXCL13水平與ALT(r=0.071；P=0.534)、AST(r=0.108;P=0.348)水平不相關(guān)；②從反應(yīng)肝臟合成功能的指標(biāo)來看，CXCL13水平與CHE(r=-0.320;P=0.004) 、ALB (r=-0.339；P=0.002)呈負(fù)相關(guān)；③從綜合評估肝功能預(yù)后指標(biāo)來看，CXCL13水平與Child-pugh評分呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系(r=0.398;P<0.001)，與MELD 評分(r=0.134;P=0.243)不相關(guān)。另外,PHC患者血清中IL-31表達(dá)水平與各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)均不相關(guān)(數(shù)據(jù)未顯示)。見圖2。

2.6 ROC曲線評估 ROC曲線是目前公認(rèn)的診斷性試驗(yàn)綜合評價方法， ROC曲線下面積越大，診斷價值和準(zhǔn)確性越高。為探討CXCL13、IL-31對原發(fā)性肝癌的診斷價值，本研究以1-特異性(1-specificity) 為橫坐標(biāo)，敏感度(Sensitivity) 為縱坐標(biāo)，應(yīng)用統(tǒng)計軟件對CXCL13、AFP、IL-31數(shù)據(jù)繪制ROC曲線，計算曲線下面積。CXCL13 ROC曲線下面積為0.824,根據(jù)最大約登指數(shù)確定最佳截斷值為125.14 pg/ml,敏感度和特異性為58.6%、100%。AFP對應(yīng)曲線下面積為0.882，最佳截斷值為120.47 ng/ml，敏感度和特異性分別為60.3%和100%。此外，IL-31所對應(yīng)ROC曲線下面積為0.258，對原發(fā)性肝癌不具有診斷價值。采用Z檢驗(yàn)比較CXCL13和AFP的ROC曲線下面積發(fā)現(xiàn)，AFP對于原發(fā)性肝癌的診斷效能稍優(yōu)于CXCL13(Z=4.24;P<0.001)。運(yùn)用SPSS統(tǒng)計軟件的Logistic二元回歸分析和ROC曲線確定CXCL13聯(lián)合AFP的診斷價值，該聯(lián)合指標(biāo)的ROC曲線下面積為0.938，大于CXCL13和AFP單獨(dú)預(yù)測，其約登指數(shù)最大時對應(yīng)的敏感度和特異性為82.8%、100%，較兩指標(biāo)單獨(dú)診斷時明顯增高。 見圖3。

圖1 CXCL13、IL-31在原發(fā)性肝癌患者與正常人血清中的表達(dá)情況Fig.1 Expression of CXCL13,IL-31 in serum of PHC patients and health controlsNote: HC.Health controls;PHC.Primary hepatic carcinomas;the dots represent the research objects,dashes represent ±s.

表3 CXCL13、IL-31的表達(dá)與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系

Tab.3 Relation of CXCL13,IL-31 expression with labora-tory indicators of patients with PHC

ParametersCXCL13(pg/ml)x±sPIL?31(pg/ml)x±sPHemoglobin(g/L)≤Median26120±15010<000133±117200593>Median13895±7572755±576WBC(109/L)≤Median19683±1465105181523±50890775>Median20855±115492870±11776PLT(109/L)≤Median22615±1520401152976±108340558>Median16447±9086709±293Creatinine(μm/L)≤Median19508±1364705882069±96190993>Median21213±131482086±6295Albumin(g/L)≤Median25661±139540001347±123500639>Median15452±11027880±855ALT(U/L)≤Median20638±1415808612685±101230656>Median19097±11717705±279AST(U/L)≤Median18455±1201901412149±93390467>Median23391±154021936±6613ALP(U/L)≤Median19005±126810302805±7830083>Median22122±145464221±13700CHE(U/L)≤Median24406±1495700052979±111930852>Median14674±8501906±937Totalbilirubin(μm/L)≤Median19557±1310403211831±82780983>Median23196±149653294±9529INR≤Median17066±982000422245±96240369>Median25121±167021805±6274PT(sec)≤Median18898±1296403222310±99420968>Median21891±139801756±5977HBsAgPositive20708±1393504042338±91720523Negative17170±9871631±093HBV?DNAPositive20879±1392304411994±88370890Negative18221±119502296±7497AFP(ng/ml)≤Median20413±1354503772127±86160469>Median13931±7853794±330

圖2 原發(fā)性肝癌患者血清中CXCL13水平與肝功能預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性Fig.2 Correlation between CXCL13 and laboratory indicators in PHC

圖3 原發(fā)性肝癌組和正常對照組相比的ROC曲線Fig.3 ROC curve when PHC group compared with healthy control group

3 討論

近年來研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的生物學(xué)行為不僅取決于腫瘤本身，腫瘤微環(huán)境對其演變和轉(zhuǎn)歸也起著至關(guān)重要的作用[8]。腫瘤微環(huán)境可以通過多種方式影響腫瘤的發(fā)展，該過程與細(xì)胞因子密切相關(guān)，其中白細(xì)胞介素和趨化因子的作用尤為突出。白細(xì)胞介素如IL-1β、IL-6等已被證實(shí)可通過激活NF-kB和STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及下游的信號分子導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[9，10]；趨化因子則可以募集免疫細(xì)胞至腫瘤組織區(qū)域，進(jìn)而分泌生長因子、血管生成因子和金屬蛋白酶等相關(guān)物質(zhì)，這些物質(zhì)促進(jìn)了腫瘤的生長、血管生成及侵襲轉(zhuǎn)移等過程[11]。趨化因子CXCL13又稱B細(xì)胞趨化因子，由次級淋巴組織、淋巴結(jié)和血清濾泡中的樹突狀細(xì)胞分泌，通過與受體CXCR5結(jié)合引導(dǎo)成熟B細(xì)胞的游走和歸巢[12]，大量研究表明，CXCL13在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，且與患者預(yù)后不良相關(guān)，目前CXCL13被認(rèn)為是潛在的腫瘤標(biāo)志物[4-6]。另外，IL-31作為IL-6家族主要成員，參與多種細(xì)胞的生長、分化和功能調(diào)節(jié)，體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)IL-31可以促進(jìn)濾泡淋巴瘤細(xì)胞的增殖，然而關(guān)于IL-31在其他腫瘤中表達(dá)的相關(guān)研究尚少。眾所周知，原發(fā)性肝癌是我國常見惡性腫瘤之一，乙型肝炎病毒感染是其最主要的危險因素，最近研究發(fā)現(xiàn)一些細(xì)胞因子與受體相互作用能介導(dǎo)PHC的致癌過程，并且這些細(xì)胞因子的表達(dá)水平與PHC的發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。然而，目前尚無關(guān)于CXCL13、IL-31在原發(fā)性肝癌發(fā)生及侵襲轉(zhuǎn)移過程中作用的相關(guān)臨床研究。為此，我們通過分析CXCL13、IL-31在PHC患者和健康人血清中的表達(dá)水平來初步探討與原發(fā)性肝S癌發(fā)生發(fā)展與臨床預(yù)后的關(guān)系。

研究發(fā)現(xiàn)，慢性炎癥可以引起原癌基因的突變，造成基因組的不穩(wěn)定性并促進(jìn)血管生成，最終導(dǎo)致腫瘤的形成、浸潤和轉(zhuǎn)移[13]。Wang等[14]通過微陣列分析技術(shù)檢測肺癌組織中84種細(xì)胞因子表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)一系列炎癥相關(guān)因子水平明顯升高，其中以CXCL13升高最為顯著；體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)，CXCL13可誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生分泌型焦磷酸蛋白，后者通過反式激活β-鈣黏蛋白引起細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，CXCL13及其受體CXCR5的缺失可以顯著降低多環(huán)芳香烴引發(fā)肺癌的概率。Qi[15]和Zhu等[16]發(fā)現(xiàn)CXCL13在結(jié)腸癌組織中高表達(dá)，并采用體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了CXCL13主要通過激活PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路引起腫瘤的發(fā)生，與CXCL13作用于肺癌的通路并不一致，說明在不同的疾病背景下，CXC13致癌的機(jī)制可能并不相同。而我們的研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌作為與炎癥相關(guān)的最常見腫瘤之一，肝癌患者血清CXCL13表達(dá)水平明顯高于對照組(P<0.001)，并且肝癌體積>5 cm的患者CXCL13表達(dá)水平，與肝癌體積≤5 cm的患者相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.035)，說明CXCL13在原發(fā)性肝癌細(xì)胞的增殖和發(fā)展過程發(fā)揮重要作用，但其相關(guān)作用機(jī)制尚不明確。

本研究還發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌患者血清CXCL13表達(dá)水平與腫瘤轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān)，這提示CXCL13在腫瘤細(xì)胞的浸潤、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮作用。國外最新文獻(xiàn)報道[17]，CXCL13可刺激乳腺癌細(xì)胞過表達(dá)人核因子κ-B受體活化因子配基(RANKL)，從而激活非受體酪氨酸蛋白激酶Src蛋白通路介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，這也進(jìn)一步說明，CXCL13可作為評估原發(fā)性肝癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移的新指標(biāo)，但是CXCL13作用于原發(fā)性肝癌的相關(guān)機(jī)制需進(jìn)一步探索。

原發(fā)性肝癌患者的肝臟儲備功能差，加之免疫力低下、基礎(chǔ)疾病重，通常因術(shù)后發(fā)生肝功能衰竭導(dǎo)致死亡，嚴(yán)重影響患者預(yù)后生存。因此，對原發(fā)性肝癌患者的肝功能評估顯得尤為重要。為此，我們進(jìn)一步分析了實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與CXCL13、IL-31表達(dá)的相關(guān)性，其分析結(jié)果顯示，肝癌患者血清中CXCL13表達(dá)水平與AST、AST等無關(guān)；與血清白蛋白、膽堿酯酶等呈負(fù)相關(guān)，與綜合評估患者肝功能預(yù)后的Child-pugh評分呈正相關(guān)，這提示CXCL13可作為評估原發(fā)性肝癌患者肝功能預(yù)后的血清學(xué)指標(biāo)。此外，肝癌患者血清中CXCL13表達(dá)水平和患者血清HBsAg攜帶狀態(tài)、HBV-DNA無相關(guān)性，說明原發(fā)性肝癌患者血清中CXCL13表達(dá)水平可能與病毒感染無關(guān)。

為探討CXCL13、AFP診斷原發(fā)性肝癌的臨床應(yīng)用價值，我們分別對CXCL13和AFP進(jìn)行了相關(guān)檢測及分析，其敏感度均較低(58.6%、60.3%)，但是運(yùn)用二者聯(lián)合檢測時，ROC曲線下面積顯著增加，檢測敏感度明顯提高，從而可以增加原發(fā)性肝癌的診斷效率。因此，采用CXCL13作為原發(fā)性肝癌血清標(biāo)志物與AFP聯(lián)合檢測運(yùn)用于臨床診斷，可進(jìn)一步提高PHC診斷的陽性率,尤其對AFP表達(dá)陰性的患者具有重要意義。我們研究還發(fā)現(xiàn)，根據(jù)肝癌患者和健康對照組兩組CXCL13數(shù)據(jù)繪制ROC曲線得出最佳截斷值為125.14 pg/ml，此時對照組全為陰性結(jié)果，誤診率為0%，因此與健康人相比，CXCL13診斷原發(fā)性肝癌的特異性為100%。但臨床上原發(fā)性肝癌的診斷往往需要與乙肝、肝硬化等多種肝臟疾病鑒別，CXCL13要真正應(yīng)用于臨床還需大樣本、多中心、多分組(乙肝、肝硬化等)數(shù)據(jù)對實(shí)驗(yàn)加以完善，最終得出臨床原發(fā)性肝癌診斷的CXCL13最佳截斷值。此外，本研究中AFP的最佳截斷值為120.47 ng/ml，與臨床常用的400 ng/ml存在差異,可能與研究的不同地域、種族以及病例數(shù)量有關(guān)[18]。

IL-31屬于細(xì)胞因子IL-6家族，主要由CD4+Th2細(xì)胞產(chǎn)生，參與多種細(xì)胞的生長、分化和功能調(diào)節(jié)，在炎性反應(yīng)時表達(dá)水平明顯增高。值得注意的是，本研究并未發(fā)現(xiàn)IL-31表達(dá)水平在原發(fā)性肝癌患者和健康人血清中存在顯著差異，與腫瘤大小、轉(zhuǎn)移、TNM分期等臨床各項(xiàng)指標(biāo)也無相關(guān)性。相關(guān)文獻(xiàn)報道，IL-31通過與受體結(jié)合可激活Janus激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子家族(JAK-STAT)、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3-激酶/Akt(PI3K/Akt)等信號通路，其中PI3K/Akt通路介導(dǎo)多種惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生[19-21]，但是IL-31是否參與原發(fā)性肝癌的病理變化過程尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，本研究通過檢測原發(fā)性肝癌患者血清中的CXC13、IL-31水平，探討其在原發(fā)性肝癌中診斷及預(yù)后評估的臨床應(yīng)用價值。研究結(jié)果顯示CXCL13在原發(fā)性肝癌患者血清中高表達(dá)，其表達(dá)水平與腫瘤的大小、轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān)；但是IL-31在原發(fā)性肝癌患者血清中未見升高，其表達(dá)水平與臨床病理特征也無明顯相關(guān)性。因此，我們預(yù)測CXCL13可作為原發(fā)性肝癌診斷和預(yù)后評估的血清學(xué)標(biāo)志物，并有望成為治療和預(yù)防原發(fā)性肝癌的新型生物學(xué)靶點(diǎn)。

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[收稿2016-02-01 修回2016-03-09]

(編輯 許四平)

Expression and significance of CXCL13 and IL-31 in serum of patients with primary hepatic carcinoma

SU Hui-Ting,LI Bing,CAO Ju,ZHANG Li-Ping.

The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China

Objective:To investigate the expression of CXCL13,IL-31 in serum of patients with primary hepatic carcinoma (PHC) and analyze their clinical significance.Methods: ELISA was used to analyze the expression of CXCL13 and IL-31 in serum samples from 78 PHC patients and 36 healthy controls.The correlations of CXCL13,IL-31 expression with several clinicopathological indicators and laboratory indicators were statistically analyzed.The correlation coefficient was calculated by using the spearman correlation.Receiver-operating-characteristic (ROC) curves were used to determine the cutoff points yielding the highest specificity and sensitivity,and discriminative ability was evaluated by the area under the ROC curve.Results: Compared with the healthy controls,the level of CXCL13 were significantly higher in the serum of PHC patients (P<0.001).The expression of CXCL13 in the serum of PHC patients was relative with the tumor size,the metastasis and the TMN stages (P<0.05).CXCL13 expression showed a positive correlation with child-pugh score.The AUC(Area under the curve)for using CXCL13 combined AFP levels to diagnose PHC was 0.938(P<0.05),sensitivity and specificity were 82.8%,100%,respectively.Combined detection of CXCL13 and AFP was helpful for diagnosis of PHC.Nevertheless,IL-31 expression had no difference in PHC groups compared with Health controls.IL-31 expression was uncorrelated with clinicopathological indicators.Conclusion: CXCL13 is highly expressed in the serum of PHC patients.CXCL13 may be involved in the pathogenesis of PHC,which level has a closer relationship with tumor size,metastasis and TNM stage.CXCL13 can be an important indicator for the diagnosis and prognosis monitoring of PHC.

Primary hepatic carcinoma (PHC);CXCL13;IL-31;ROC curve

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.11.025

①本文為國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81272545)。

蘇惠婷(1988年-)，女，碩士，主要從事肝癌免疫治療方向研究，E-mail：374538416@qq.com。

及指導(dǎo)教師：張莉萍(1966年-)，女，博士，博士生導(dǎo)師，主任技師，主要從事肝癌及感染性疾病的早期分子診斷和治療方面的研究，E-mail：Liuzhangcq@yahoo.com。

R446.62

A

1000-484X(2016)11-1682-07