劉筱斐+陳柯

摘 要 以串珠鐮刀球菌、禾谷鐮刀菌兩種病原真菌為供試菌種，采用菌絲生長速率法研究了生姜提取液對兩種病原真菌的抑制作用。結(jié)果表明：生姜提取液對串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌有一定的抑制作用，隨著生姜提取液濃度的增加，抑菌率出現(xiàn)先升后降的趨勢，對串珠鐮刀菌的最適抑菌濃度為80%，對禾谷鐮刀菌的最適抑菌濃度為40%；生姜提取液對串珠鐮刀菌的抑制效果明顯高于禾谷鐮刀菌。

關(guān)鍵詞 生姜；鐮刀菌；抑菌率

中圖分類號(hào) R9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6708（2016）172-0188-02

串珠鐮刀菌（Fusarium moniliforme）和禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）是農(nóng)作物中常見的非專性、非宿主特異性病原真菌，無性時(shí)期屬半知菌亞門，有性時(shí)期屬子囊菌亞門。鐮刀菌可在土壤中越冬越夏，侵染多種植物，引起植物的根腐、莖腐、花腐和穗腐等多種病害，寄主多達(dá)100余種，侵染植物的維管束系統(tǒng)，破壞植物的維管束，并產(chǎn)生毒素，造成作物萎蔫甚至死亡，影響了作物的產(chǎn)量的品質(zhì)[ 1 ]。串珠鐮刀菌產(chǎn)生的一種水溶性代謝產(chǎn)物-伏馬菌素還可引起馬腦白質(zhì)軟化癥、豬肺水腫及大鼠肝癌等各種疾病[ 2 ]。

近年來，隨著人們生活質(zhì)量的提高和環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，化學(xué)藥物防治病蟲害得到限制，而開發(fā)穩(wěn)定、安全、污染少的天然植物源農(nóng)藥-生物農(nóng)藥成為研究熱點(diǎn)[3]。植物源農(nóng)藥的活性成分是植物的次生代謝物，主要有機(jī)化學(xué)成分為生物堿、酚類、萜類等物質(zhì)，這些成分具有生物活性，對病原菌有一定的抑制作用[4]。孟昭禮等從銀杏提取液中分離出對植物病原菌有較高抑制活性的天然化合物，并仿生合成了系列殺菌劑[ 5 ]；王帥等研究了藥用植物提取液對草莓灰霉病的抑菌活性，發(fā)現(xiàn)藥用植物五味子提取液抑菌效果較好[ 6 ]；程智慧等研究了大蒜秸稈水浸液的抑菌作用并對其抑菌成分進(jìn)行了初步的研究[ 7 ]；喻大昭等研究了植物源粗提取液對黃瓜灰霉病原菌的生物活性，得出油茶和辣蓼的粗提取物對灰霉病抑制效果較好[8]。

生姜是姜科多年生草本植物，可作為藥用和食用植物，在我國具有悠久的歷史和重要的使用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)以河南省商丘地區(qū)種植的植物生姜提取液為研究對象，采用菌絲生長速率法研究了不同濃度的生姜提取液對串珠鐮刀球菌、禾谷鐮刀菌兩種病原真菌的抑菌活性，以期為進(jìn)一步的抑菌活性物質(zhì)分析及生物農(nóng)藥的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

串珠鐮刀球菌、禾谷鐮刀菌由植物與微生物互作河南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供；生姜為河南省商丘地區(qū)廣泛種植的姜。

1.2 方法

1.2.1 提取液的制備

取生姜200g，洗去泥沙去皮，切成小塊，放入壓汁機(jī)里壓出汁液，紗布過濾，棄掉濾渣，收集濾液（100%）。將濾液（100%）用無菌水稀釋成濃度分別為20%、40%、60%、80%的稀釋液備用。

1.2.2 培養(yǎng)基的制備

配制PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉20g，補(bǔ)水至1000mL），高壓滅菌后，倒平板。培養(yǎng)基凝固后，采用平板加入法，分別取20%、40%、60%、80%和100%不同濃度的生姜提取液1mL于培養(yǎng)基中，涂抹均勻，備用；加等量的無菌水為對照組。

1.2.3 抑菌率的測定

分別接種串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌于PDA培養(yǎng)基中，培養(yǎng)7～8天。采用打孔器于串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌的菌落邊緣取直徑6mm的菌餅，置于平板中央，菌絲向下，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用十字交叉法測量培養(yǎng)第4天、5天、6天的菌落直徑，并計(jì)算抑菌率。每個(gè)處理重復(fù)3次。

菌絲生長抑制率（%）=[（對照菌落直徑—處理菌落直徑）∕（對照菌落直徑—菌餅直徑）]×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 生姜提取液對兩種植物病原菌生長的抑制作用

從表1可知，隨著生姜提取液濃度的增加，菌絲抑制率增加，80%的生姜提取液對串珠鐮刀菌的抑制率最高，為75%；而100%的生姜提取液對串珠鐮刀菌的抑制率則有所下降，為67%；隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，第5天、第6天測得的抑制率均比第4天的抑制率降低，可能是隨著時(shí)間的增加生姜提取液成分的生物活性有所下降。

從表2可知，隨著生姜提取液濃度的增加，菌絲抑制率出現(xiàn)先增加后下降的趨勢，40%的生姜提取液對串珠鐮刀菌的抑制率最高，為60%，80%、100%的生姜提取液對串珠鐮刀菌的抑制率分別降低為33%、25%；隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，第5天、第6天測得的抑制率均比第4天的抑制率降低，

2.2 不同濃度生姜提取液對兩種鐮刀菌生長抑制率的分析

對不同濃度下生姜提取液對培養(yǎng)第四天兩種鐮刀菌的的菌絲生長抑制情況見圖1；對兩種鐮刀菌菌絲生長抑制率比較分析見圖2。由圖2可知，生姜提取液對兩種鐮刀菌的菌絲抑制率隨著濃度的增加均表現(xiàn)出先升后降的趨勢，且生姜提取液對串珠鐮刀菌的抑制效果明顯高于禾谷鐮刀菌。

3 結(jié)論

已有研究表明生姜提取液對革蘭氏陰性菌大腸桿菌、革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)的抑制作用，其抑菌活性隨著體積分?jǐn)?shù)升高而增強(qiáng)，并且生姜提取液具有較好的熱穩(wěn)定性[ 9 ]。高良生姜提取物對常見的病原菌、水產(chǎn)腐敗菌等8種細(xì)菌的具有一定的抑菌活性，抑菌效果強(qiáng)于山梨酸鉀、苯甲酸鈉，有望成為新一代綠色防腐劑[10]。而有關(guān)生姜提取液對于植物病原真菌的抑制作用研究較少。本研究表明，生姜提取液對串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌具有一定的抑制作用，隨著生姜提取液濃度的增加，抑菌率出現(xiàn)先升后降的趨勢，對串珠鐮刀菌的最適抑菌生姜濃度為80%，對禾谷鐮刀菌的最適抑菌生姜濃度為40%；生姜提取液對兩種鐮刀菌的抑制效果比較而言，對串珠鐮刀菌的抑制效果明顯高于禾谷鐮刀菌。

生姜提取液對室內(nèi)培養(yǎng)的串珠鐮刀菌和禾谷鐮刀菌表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，而生姜提取液的大田試驗(yàn)效果及生物活性物質(zhì)檢測與分析還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

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