安蕓，王臣臣，陸世海，劉象銀

(＊菏澤醫(yī)學(xué)專科學(xué)校,山東 菏澤 274000;山東丹紅制藥有限公司）

芪術(shù)鼻炎清顆粒含量測(cè)定

安蕓＊，王臣臣，陸世海，劉象銀

(＊菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校,山東 菏澤 274000;山東丹紅制藥有限公司）

目的探討芪術(shù)鼻炎清顆粒的含量測(cè)定方法。方法采用高效液相色譜法測(cè)定厚樸酚與和厚樸酚含量，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測(cè)器法測(cè)定黃芪甲苷含量。結(jié)果厚樸酚、和厚樸酚、黃芪甲苷的線性范圍分別為0.32～4.00μg（r=0.9997)、0.2～2.5μg（r=0.9998)、0.5024～7.452μg（r=1.0000）；平均加樣回收率分別為101.35%（RSD=1.54%）、97.76%（RSD=1.28%）、96.47%（RSD= 1.96%）。結(jié)論該測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可作為芪術(shù)鼻炎清顆粒的控制方法。

芪術(shù)鼻炎清顆粒;含量測(cè)定

芪術(shù)鼻炎清顆粒由黃芪、厚樸、白術(shù)、陳皮、茯苓五味中藥組成，為臨床經(jīng)驗(yàn)方經(jīng)優(yōu)選工藝制成的中成藥制劑，主要用于治療過敏性鼻炎引起的鼻塞、頭疼等癥；方中黃芪為君藥，厚樸為臣藥，因此在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中，需對(duì)黃芪中的黃芪甲苷、厚樸中厚樸酚與和厚樸酚進(jìn)行含量測(cè)定。本文借鑒《中國(guó)藥典》及文獻(xiàn)方法[1-4]，建立了HPLC法分別測(cè)定芪術(shù)鼻炎清顆粒中黃芪甲苷、厚樸酚與和厚樸酚的含量方法。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 高效液相色譜儀（日本島津,LC-2010A）;萬分之一天平（瑞士梅特勒-托利多,AL-204）;十萬分之一天平（瑞士梅特勒-托利多,AB135-S）黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）;厚樸酚對(duì)照品(上海原葉生物公司）;和厚樸酚對(duì)照品(上海原葉生物公司）;芪術(shù)鼻炎清顆粒(自制);甲醇,異丙醇,乙腈均為色譜純

1.2 方法 厚樸酚、和厚樸酚含量測(cè)定方法學(xué)考察：（1）色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：AgilentExtend-C18（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇-異丙醇-水(36∶21∶36)，檢測(cè)波長(zhǎng)294 nm，流速1.0m l/ min，柱溫35℃。（2）溶液的制備 供試品溶液制備：精密稱定本品2 g,放入磨口錐形瓶中，加入20m l甲醇溶液，振搖1 h，密封保存24 h；濾過；取續(xù)濾液加入25m l容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻[5-6]。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備 取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品，精密稱重，加甲醇分別制成每1m l含厚樸酚40μg、和厚樸酚24μg的溶液。進(jìn)樣量：供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制定：分別取厚樸酚對(duì)照品4.0mg、和厚樸酚對(duì)照品2.5mg，分別加甲醇溶解定容至25ml容量瓶中，分別向高效液相色譜中注入2μl、5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，結(jié)果如下表2、表3。

表1 厚樸酚線性考察結(jié)果

表2 和厚樸酚線性考察結(jié)果

2.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μl/次,連續(xù)進(jìn)樣6次，厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為1.27%、1.53%。按標(biāo)準(zhǔn)曲線制定方法制備供試品溶液一份（樣品批號(hào)：2014001），精密吸取該溶液10 μl/次,連續(xù)進(jìn)樣6次，厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為1.86%、1.56%。說明儀器精密度良好。

2.3 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品（2014001）6份，分別按標(biāo)準(zhǔn)曲線制定方法制備供試品溶液，測(cè)定厚樸酚、和厚樸酚含量，結(jié)果厚樸酚的平均含量為0.855mg/g，RSD值為1.28%，和厚樸酚的平均含量為0.287mg/g，RSD值為1.37%；結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性較好。

2.4 重復(fù)性檢查 取中試樣品7批，按照2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，高效液相進(jìn)樣10μL，計(jì)算不同批次中厚樸酚與和厚樸酚的含量，結(jié)果見表3。

表3 不同批次厚樸酚與和厚樸酚含量

通過不同批次檢查得出，不同日期生產(chǎn)的顆粒中厚樸酚與和厚樸酚含量變化不大，均符合標(biāo)準(zhǔn)，穩(wěn)定性較好。

2.5 加樣回收率試驗(yàn) 分別取本品顆粒約1 g（批號(hào)2014007）6份（已知厚樸酚為0.8618mg/g，和厚樸酚為0.2872mg/g），精密稱定，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制定方法制備供試品溶液，分別精密加入不同濃度的對(duì)照品溶液各1.0ml，混勻，測(cè)定，按公式1計(jì)算回收率，結(jié)果如表4、表5。

表4 和厚樸酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表5 厚樸酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)加樣試驗(yàn)結(jié)果，厚樸酚平均加樣回收率為101.35%，RSD為1.54%，和厚樸酚平均加樣回收率為97.76%，RSD為1.28%，說明本方法可行。

圖3 制劑中厚樸酚、和厚樸酚加樣回收測(cè)定HPLC圖

2.6 黃芪甲苷含量測(cè)定方法學(xué)考察

2.6.1 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：KromasoilODS-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈：水（30:70）；蒸發(fā)光檢測(cè)器；漂移管溫度：105℃，載氣流速為2.7ml/min，柱溫：30℃，以黃芪甲苷計(jì)理論塔板數(shù)不得少于4000[7]。

2.6.2 溶液的制備 供試品溶液制備：精密稱定本品5 g，裝入磨口具塞錐形瓶中；加入25ml加入甲醇；稱重，超聲波超聲30min，精密稱重補(bǔ)足重量；濾過，蒸干濾液，殘?jiān)?0m l水溶解，先用水飽和正丁醇進(jìn)行萃取3次，每次20m l，合并正丁醇液；再用氨試液萃取正丁醇液2次，每次30m l，正丁醇液蒸干，加甲醇溶液轉(zhuǎn)移到10m l容量瓶至刻度，搖勻。對(duì)照品溶液的配制：取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。進(jìn)樣量：供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μl。

2.6.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制定 稱取黃芪甲苷對(duì)照品5份，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含50μg、100μg、250μg、500μg、750μg的溶液，作為對(duì)照品溶液，進(jìn)高效液相色譜儀測(cè)定，分別進(jìn)樣10μl，測(cè)得峰面積，以進(jìn)樣量對(duì)數(shù)（lgx）為橫坐標(biāo)，以峰面積對(duì)數(shù)(lgy)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4。

圖4 黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

回歸方程：lgy=1.3239lgx+7.0720，r=1.0000，表明線性良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.5024～7.452μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖5 芪甲苷HPLC圖

2.6.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μl,連續(xù)進(jìn)樣6次，黃芪甲苷峰面積的RSD為0.95%，證明儀器精密度符合測(cè)定要求。按溶液制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液一份（樣品批號(hào)：2014001），精密吸取該溶液10μl/次,連續(xù)進(jìn)樣6次，黃芪甲苷峰面積的RSD為1.57%。說明儀器精密度良好。

2.6.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品（2014001）6份，分別按溶液制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定黃芪甲苷含量，結(jié)果黃芪甲苷的平均含量為0.141mg/g，RSD值為1.09%；結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性較好。

2.6.6 含量重復(fù)性檢查：取中試樣品7批，按照溶液制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液，高效液相進(jìn)樣10μl，計(jì)算不同批次中黃芪甲苷的含量，結(jié)果見表6。

表6 不同批次厚樸酚與和厚樸酚含量

通過不同批次檢查得出，不同日期生產(chǎn)的顆粒中黃芪甲苷含量變化不大，均符合標(biāo)準(zhǔn)，穩(wěn)定性較好。

2.6.7 加樣回收率試驗(yàn) 取本品顆粒（批號(hào)2014007），精密稱取6份，6.0 g/份，按溶液制備項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密加入不同濃度的對(duì)照品溶液各1.0ml，混勻，測(cè)定，按公式1計(jì)算回收率，結(jié)果見表7。

表7 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果表

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪甲苷的平均加樣回收率為96.47%，RSD為1.95%，方法可行。

圖6 制劑中黃芪甲苷加樣回收測(cè)定HPLC圖

3 討論

芪術(shù)鼻炎清顆粒是在臨床經(jīng)驗(yàn)方基礎(chǔ)上研究開發(fā)的中成藥制劑，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究經(jīng)過了多次的篩選試驗(yàn)，其中厚樸酚、厚樸酚含量測(cè)定中考察了甲醇-水（36∶74），甲醇-異丙醇-水（50∶30∶20），甲醇-異丙醇-水(36∶21∶36)等流動(dòng)相，經(jīng)比較，甲醇-異丙醇-水(36∶21∶36)作為流動(dòng)相時(shí)各峰分離效果好，基線平穩(wěn)；黃芪甲苷紫外吸收很弱，故采用了蒸發(fā)光檢測(cè)器（ELSD），可有效排除流動(dòng)相、成分結(jié)構(gòu)等的影響，對(duì)檢測(cè)用氣流量、漂移管溫度等參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定流動(dòng)相乙腈：水（30∶70），漂移管溫度：105℃，載氣流速為2.7m l/min，柱溫：30℃。

本文在工藝研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合中國(guó)藥典及部分文獻(xiàn)方法，對(duì)芪術(shù)鼻炎清顆粒中厚樸酚與(和）厚樸酚、黃芪甲苷含量測(cè)定方法進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明方法可行，精密度、專屬性、重現(xiàn)性、回收率均符合要求，可作為該顆粒中厚樸、黃芪的定量方法。同時(shí)考慮到大生產(chǎn)的工藝復(fù)雜性，確定顆粒中厚樸酚與（和）厚樸酚的含量為不少于0.60mg/g，黃芪甲苷含量為不少于0.10mg/g。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(Ⅰ部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010: 235、283.

[2]胡端龍,姜麗珍,奚靜芳,等.丹溪玉屏風(fēng)顆粒中黃芪甲苷的含量測(cè)定[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥,2011,13(6):41-42.

[3]孟超,吳豐,馬林.厚樸類中藥厚樸酚及后厚樸酚含量測(cè)定[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2007,19(6):1024-1026.

[4]初洪波,仇志凱,吳迪,等.HPLC測(cè)定參紅補(bǔ)血顆粒中紅景天苷的含量[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,30(5):815-817.

[5]馬大龍,萬鵬,代龍,等.HPLC同時(shí)測(cè)定四正顆粒中厚樸酚、和厚樸酚含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,16(2):54-56.

[6]鄭平,邢佩,王文忠.HPLC法測(cè)定平胃泡騰片中厚樸酚及和厚樸酚含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,10(11):165-166.

[7]王春怡,李衛(wèi)民.HPLC-ELSD法測(cè)定不同產(chǎn)地黃芪中黃芪甲苷的含量[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,10(10):144-145.

Study on The Content Determination Method of Qizhu Rhinitis Granules

An Yun＊,Wang Chenchen,Lu Shihai,Liu Xiangyin
(＊Heze Medical Co llege;*Shandong Danhong Pharmaceutical Co,Limited,Heze 274000,Shandong)

ObjectiveTo establish the content determination method of Qizhu rhinitis granules.MethodsDetermined the contents ofmagnolol and honokiol using HPLC and the contents of astragaloside using HPLC-ELSD.ResultsThe responses of magnolol,honokiol,astragaloside were linear in the ranges of 0.32～4.00μg(r=0.9997),0.2～2.5μg(r=0.9998),0.5024～7.452μg(r=1.0000)respectively.The average recoveries were 101.35%(RSD=1.54%), 97.76%(RSD=1.28%),96.47%(RSD=1.96%).ConclusionThe method was accurate,reliable and good repeatability.It can be used for quality control of Qizhu rhinitis granules.

Qizhu rhinitis granules;Content determination

R284.2

：A

：1008-4118（2016）02-0011-04

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.02.004

2015-12-10