■ 尹子煜 薛 敏，2* 鄭銀樺 王 鑫 吳秀峰

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所國(guó)家水產(chǎn)飼料安全評(píng)價(jià)基地，北京100081；2.農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，北京100081）

本試驗(yàn)以異育銀鯽為研究對(duì)象，異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）具有食性廣泛、易飼養(yǎng)、增重快、養(yǎng)殖周期短的特點(diǎn)。異育銀鯽的營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究需求、飼料配方與投喂技術(shù)已有了較為系統(tǒng)的研究[1-5]。隨著魚粉價(jià)格的持續(xù)走高，對(duì)魚粉蛋白的替代研究日益增多。王崇等[6]研究發(fā)現(xiàn)，隨著飼料中魚粉逐步被豆粕替代，攝食率顯著升高，然而，飼料轉(zhuǎn)化效率、特定生長(zhǎng)率、能量沉積率和蛋白沉積率顯著降低。針對(duì)低魚粉飼料，添加促進(jìn)攝食、必需營(yíng)養(yǎng)素利用及促進(jìn)消化吸收和利用的添加劑，如甜菜堿、檸檬酸等物質(zhì)，既可在生產(chǎn)中發(fā)揚(yáng)替代蛋白的優(yōu)勢(shì)，又可以避免營(yíng)養(yǎng)素缺乏對(duì)生長(zhǎng)產(chǎn)生的不利因素[7]。李紅霞等[8]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中分別添加0.1%的溶血卵磷脂、甜菜堿和0.21%氯化膽堿后，顯著提高了異育銀鯽的生長(zhǎng)性能，有效降低了魚體肝臟中脂肪的含量，同時(shí)增強(qiáng)了機(jī)體的抗氧化和抗應(yīng)激能力。L-氨基酸的混合物用于虹鱒、鰈類和鯉具有促攝食作用；肌苷、肌苷5-單磷酸、甜菜堿和硫代甜菜堿對(duì)大菱鲆和多佛舌鰨有誘食作用[9]。葫蘆巴堿、ATP和信息素（蟹和淡水青蝦腺的提取物）也被發(fā)現(xiàn)對(duì)魚類有誘食作用[10]。然而，不同的魚類品種對(duì)誘食劑的反應(yīng)也有很大不同，菱體兔牙鯛對(duì)甘氨酸敏感[11]，但虹鱒對(duì)甘氨酸沒有積極的反應(yīng)[12]；吉利慈鯛對(duì)酸性氨基酸和檸檬酸敏感，但對(duì)堿性和中性的氨基酸不敏感[13]。很多化合物對(duì)某一品種起誘食作用但對(duì)其他魚類攝食有抑制作用[14]。綜合試驗(yàn)結(jié)果，賴氨酸和甘氨酸對(duì)誘食無效但增加了飼料被魚類感知的范圍，非極性酸性氨基酸對(duì)探測(cè)和引誘都產(chǎn)生促進(jìn)作用[9]。

酵母提取物(Yeast Extract，YE)一般用于天然調(diào)味品，富含多肽、氨基酸、微量元素、B族維生素等，在食品、保健、飼料營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，以及微生物生產(chǎn)和其他生物培養(yǎng)系統(tǒng)中起到營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的作用。近年來，酵母制品被發(fā)現(xiàn)對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物具有誘食和促進(jìn)生長(zhǎng)的作用。劉曉琳等[15]研究發(fā)現(xiàn)0.3%復(fù)合酵母組的仔豬采食量高于不添加復(fù)合酵母組；趙朝陽等[16]發(fā)現(xiàn)BGB破壁酵母粉對(duì)中華絨螯蟹具有較好的誘食效果；陳昌福等[17]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)酵母水解物的添加量在1 000～2 000 mg/kg的范圍內(nèi),酵母水解物對(duì)中華鱉的誘食效果均顯著優(yōu)于未添加組；陳國(guó)鳳等[18]發(fā)現(xiàn)異育銀鯽在溫度變化和抓捕協(xié)迫下，攝食含酵母膏的試驗(yàn)組攝食量顯著高于對(duì)照組；長(zhǎng)期在日糧中添加0.1%～0.2%酵母培養(yǎng)物能促進(jìn)異育銀鯽的生長(zhǎng)[19]。

本試驗(yàn)以稀土元素氧化物標(biāo)記法研究在不同魚粉水平基礎(chǔ)飼料中添加酵母提取物對(duì)異育銀鯽攝食的影響，研究酵母提取物作為異育銀鯽飼料中誘食劑的應(yīng)用效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

分別在高魚粉（12%，HFM）和低魚粉（6%，LFM）飼料配方基礎(chǔ)上，添加不同水平面包酵母提取物（Yeast Extract，YE，法國(guó)Phileo公司）研究其對(duì)異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）攝食率和攝食選擇性的影響。每種基礎(chǔ)飼料中分別添加0.5%和1.0%YE（HYE-0.5、HYE-1.0、LYE-0.5、LYE-1.0），此外各設(shè)一組添加0.05%甜菜堿作為正對(duì)照（HB和LB），共8組飼料，每組4種飼料中分別添加Y2O3、Yb2O3、La2O3、Nd2O3作為惰性標(biāo)物，用于測(cè)定攝食選擇性[8]。使用雙螺桿擠壓膨化機(jī)（北京現(xiàn)代洋工TSE-65）擠壓制成粒徑為3.0 mm的膨化沉性飼料，自然風(fēng)干。各組飼料配方及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

1.2 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗(yàn)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所國(guó)家水產(chǎn)飼料安全評(píng)價(jià)基地室內(nèi)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)中進(jìn)行，養(yǎng)殖桶為平底圓錐形玻璃鋼桶（0.25 m3）。試驗(yàn)用異育銀鯽在23℃下馴養(yǎng)1周，使其適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境，并觀察健康狀況。1周后選取體質(zhì)健康、個(gè)體均勻的異育銀鯽分為2組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚，分別飼喂高含量魚粉（HFM）飼料和低含量魚粉（LFM）飼料，每天投喂兩次，時(shí)間為9∶00和15∶00，表觀飽食投喂持續(xù)40 min，記錄每日投喂的飼料量，收集殘餌，烘干，稱重，校正飼料在水中溶失率；第1周后逐桶稱重，計(jì)算攝食率和增重率。第2周，各組分別將4種飼料等量混合過量飼喂，統(tǒng)計(jì)攝食量，并收集最后3 d的糞便，75℃烘干，檢測(cè)飼料和糞便中4種稀土標(biāo)物的含量，用于計(jì)算異育銀鯽對(duì)各飼料的攝食選擇性。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

統(tǒng)計(jì)第1周飼喂不同飼料的兩個(gè)處理異育銀鯽的體重和飼料量、攝食率、增重率。根據(jù)第2周最后3 d收集糞便中Y2O3、Yb2O3、La2O3、Nd2O3的檢測(cè)含量，計(jì)算得出異育銀鯽對(duì)4種飼料的攝食選擇性i（Prefer?ence）[9]，飼料攝食選擇性（Preference）即該種稀土元素在糞便中所占的比例與在飼料中所占比例的比值。可以用公式表示為：i=(fi/ft)/(di/dt)。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)成分(風(fēng)干基礎(chǔ))(%)

式中：fi——糞便中一種標(biāo)記物的濃度；

ft——糞便中標(biāo)記物的總濃度；

di——飼料中一種標(biāo)記物的濃度；

dt——飼料中標(biāo)記物的總濃度。

第一周的兩個(gè)處理的采食量用t檢驗(yàn)分析，第二周的飼料偏好選擇性i用單因子變異數(shù)分析進(jìn)行Tukey多重比較，P＜0.05時(shí)差異顯著。

2 試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)過第1周飼喂后，HFM和LFM兩個(gè)處理異育銀鯽的生長(zhǎng)和攝食結(jié)果見表2。兩組異育銀鯽增重率差異不顯著（P＞0.05），但HFM組的攝食率顯著高于LFM組（P＜0.05）。

表2 第1周飼喂基礎(chǔ)飼料異育銀鯽的生長(zhǎng)狀況（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤，n=4）

由圖1可知，HFM組中，異育銀鯽對(duì)添加0.05%甜菜堿飼料的偏好選擇性均與基礎(chǔ)組差異不顯著（P＞0.05），HFM組中，異育銀鯽顯著偏好選擇添加酵母提取物的飼料，且隨添加量增加，選擇性顯著提高（P＜0.05）；LFM組中，異育銀鯽顯著傾向選擇LYE-1.0組飼料（P＜0.05），LB組與LYE-0.5組差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

圖1 HFM、LFM組4種飼料攝食選擇性影響

現(xiàn)今電生理技術(shù)已廣泛運(yùn)用于評(píng)價(jià)魚類對(duì)化學(xué)物質(zhì)的味覺和嗅覺感應(yīng)回饋的研究中。常用的研究方法主要有攝食生長(zhǎng)法、味覺面神經(jīng)記錄法、行為學(xué)撞球法和嗅上皮水下嗅電位（EOG）法等。趙紅月[20]綜合運(yùn)用電生理法、行為學(xué)法和攝食生長(zhǎng)法等，有效地篩選出對(duì)異育銀鯽有效的誘食物質(zhì)組合，短期內(nèi)對(duì)提高異育銀鯽的攝食率有顯著促進(jìn)作用,但是在長(zhǎng)期養(yǎng)殖過程中魚類會(huì)出現(xiàn)適應(yīng)反應(yīng)。電生理技術(shù)只能測(cè)定魚類是否能夠通過化學(xué)感受器探測(cè)到化合物，但不意味著該化合物會(huì)改變攝食行為或促進(jìn)攝食。根據(jù)飼料攝取量確定飼料的適口性是最準(zhǔn)確的，但通常攝食率記錄需要較長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)周期，意味著需要做大量的重復(fù)實(shí)驗(yàn)。稀土元素氧化物標(biāo)記法最早由Refstie等[21]報(bào)道，比較虹鱒對(duì)魚粉和豆粕兩種飼料的攝食選擇性和適應(yīng)性，之后Xue等[9]對(duì)該發(fā)法進(jìn)行了修改，用于評(píng)價(jià)不同來源誘食劑對(duì)異育銀鯽攝食偏好性的影響，改進(jìn)后的方法可以在不改變飼喂條件的情況下在一組處理中測(cè)定多種不同的誘食劑的效果，這種方法可以在一組處理中測(cè)定多種不同的誘食劑效果，可以更好地控制飼喂條件和飼喂量，減少投喂工作量，使定時(shí)投喂方法更加準(zhǔn)確有效。

經(jīng)過第1周的飼喂，兩個(gè)處理的異育銀鯽在增重率指標(biāo)上差異不顯著，因?yàn)楫愑y鯽作為雜食性魚類，具有一定植物蛋白的消化能力，豆粕只替代6%的魚粉短期內(nèi)對(duì)其生長(zhǎng)性能影響不大，但兩個(gè)處理的攝食率差異顯著，HFM組顯著高于LFM組，長(zhǎng)期飼喂，可能會(huì)顯著影響異育銀鯽生長(zhǎng)性能。張偉等[22]發(fā)現(xiàn)，用30%的豆粕部分代替魚粉，異育銀鯽試驗(yàn)組與對(duì)照組增重率差異顯著（P＜0.05），替代組的增重率顯著低于67.9%的魚粉組。王崇等[6]分別用20%、80%、100%的豆粕替代魚粉，隨著飼料中豆粕含量的增加，異育銀鯽的攝食率顯著升高（P＜0.05），并認(rèn)為豆粕飼料的適口性不是影響異育銀鯽利用豆粕的原因，該試驗(yàn)周期長(zhǎng)達(dá)16周，異育銀鯽可能經(jīng)過一段時(shí)間適應(yīng)期，即通過增加攝食量來滿足生長(zhǎng)所需要的能量需求，而本試驗(yàn)只經(jīng)過2周的飼喂，異育銀鯽還未適應(yīng)豆粕代替飼料，導(dǎo)致其攝食率的顯著降低。

Xue等[9]發(fā)現(xiàn)在異育銀鯽含26%魚粉的飼料中添加誘食物質(zhì)（甜菜堿、烏賊提取物、多種單體氨基酸等）對(duì)其攝食選擇性沒有顯著影響，在肉骨粉替代（僅保留5%魚粉）后，各種物質(zhì)的促攝食作用才有所體現(xiàn)。本研究中同時(shí)發(fā)現(xiàn)酵母提取物的誘食作用與飼料中的魚粉水平有直接關(guān)系。飼料中添加12%魚粉時(shí)，0.5%～1.0%的酵母提取物對(duì)異育銀鯽飼料的適口性均有顯著促進(jìn)作用，而當(dāng)飼料魚粉降低到6%時(shí)，需要相應(yīng)提高酵母提取物的添加水平至少到1.0%才會(huì)對(duì)飼料有攝食改善作用。李星星等[23]用二道生理記錄儀法記錄異育銀鯽對(duì)摻有不同誘食劑的食團(tuán)的咬食次數(shù)，統(tǒng)計(jì)不同誘食劑的誘食效果，發(fā)現(xiàn)在4%魚粉、8%豆粕的飼料中甜菜堿添加量為0.1%時(shí)，對(duì)異育銀鯽的誘食作用不顯著，當(dāng)甜菜堿添加量達(dá)到0.2%時(shí)，誘食效果顯著，這說明甜菜堿添加量不足可能是本試驗(yàn)甜菜堿對(duì)照組誘食作用不顯著的原因，但在LFM飼料中，誘食作用與0.5%酵母提取物差異不顯著。所以誘食劑在魚類飼料中的使用量應(yīng)該隨著基礎(chǔ)配方的改變而靈活應(yīng)用，當(dāng)魚粉降低時(shí)，需要相應(yīng)增加促攝食類物質(zhì)的添加水平才能保證飼料的適口性。