沈彥會　許建新　周桂英等

摘要：以扁桃斑鳩菊的帶芽莖段為外植體，初步研究了其組織培養(yǎng)及再生體系建立相關(guān)技術(shù)。帶芽莖段經(jīng)過1g/L的升汞消毒后，分別接種到含有不同激素的啟動培養(yǎng)基上進行誘導(dǎo)，并對其繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基進行篩選優(yōu)化。結(jié)果表明：帶芽莖段的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L，誘導(dǎo)率達(dá)到86%且誘導(dǎo)芽生長健壯；較好的繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1mg/L+NAA 0.01mg/L，繼代芽葉色濃綠，繼代系數(shù)平均達(dá)到5.6；較好的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 01mg/L，生根率大于90%，生根系數(shù)達(dá)到8。

關(guān)鍵詞：扁桃斑鳩菊，帶芽莖段，組織培養(yǎng)

扁桃斑鳩菊（Vernorda.amygdalina Del.）為菊科斑鳩菊屬植物，又稱桃葉斑鳩菊、杏葉斑鳩菊、神奇葉和尖尾鳳等，樹皮光滑呈灰色或褐色；莖上有短柔毛，具葉柄；樹葉呈橢圓形、披針形或橢圓形，基部楔形或圓形；頭狀花序，花冠大多數(shù)為白色。扁桃斑鳩菊原產(chǎn)于熱帶非洲，它的葉子被稱為南非葉，在尼日利亞等地常常被當(dāng)做蔬菜食用，為多年生喬木或灌木，適宜多種土壤類型，一般用扦插繁殖，可用作灌木、綠籬和盆栽。另外，扁桃斑鳩菊作為藥材在醫(yī)藥領(lǐng)域有巨大的潛力，具有很大的開發(fā)價值。

扁桃斑鳩菊的葉子即南非葉，常作為藥材使用，在東南亞及中國臺灣等民間應(yīng)用較多，而中國內(nèi)陸應(yīng)用很少。目前，對扁桃斑鳩菊的研究主要集中在藥理方面，國外在抗癌、抗突變、抗菌及抗腫瘤等方面都有相關(guān)報道，國內(nèi)相關(guān)研究較少。在臨床方面，有研究表明南非葉水煎劑可用于治療發(fā)熱、瘧疾、腹瀉、痢疾、肝炎、疥瘡、咳嗽、頭痛和胃痛等病癥，具有抗氧化、保肝、促胃酸分泌、降血脂、抗瘧原蟲和抗癌作用。但是扁桃斑鳩菊并不是傳統(tǒng)的中草藥，在應(yīng)用時最好經(jīng)過進一步辯證。在繁殖方面，張梅坤通過正交試驗研究了不同插穗木質(zhì)化程度、不同生根促進劑種類和不同生根促進劑濃度等因素對扁桃斑鳩菊扦插生根的影響，取得了一定成果。

目前，國內(nèi)關(guān)于扁桃斑鳩菊繁殖方面的研究報道比較少，組織培養(yǎng)技術(shù)相關(guān)的研究還未見報道，本試驗以帶芽莖段為外植體材料對其組織培養(yǎng)技術(shù)不同階段的培養(yǎng)基進行了初步的優(yōu)化篩選，以得到較好的培養(yǎng)基組合及培養(yǎng)程序。組織培養(yǎng)技術(shù)不僅可以對植株進行脫毒，減少病害的發(fā)生，也為其的深入研究奠定了一定的基礎(chǔ)，同時為扁桃斑鳩菊苗木規(guī)模化生產(chǎn)和周年生產(chǎn)提供一定的參考依據(jù)。

1外植體的選擇

在生長健壯，無病蟲害的優(yōu)良植株上剪取帶芽莖段作為外植體，處理前應(yīng)先去掉部分葉片。

2外植體的消毒

莖段先用洗潔精的稀釋溶液浸泡，再用毛筆刷輕輕清洗外植體表面，然后放入廣口瓶中，用紗布封口，流水沖洗1h左右。在超凈工作臺上先用75%的酒精浸泡20～30s，無菌水沖洗2遍，再用1g/L的升汞溶液消毒8～10min，無菌水沖洗4遍后，接種于啟動培養(yǎng)基上。

3培養(yǎng)基選擇和培養(yǎng)條件

啟動培養(yǎng)基為①MS+6-BA 1.5mg/L（單位下同）+NAA 0.1；②MS+6-BA1+NAA 0.1；③MS+6-BA0.5+NAA 0.05。繼代培養(yǎng)基為④MS+6-BA 1.0+NAA0.1；⑤MS+6-BA 0.5+NAA 0.05；⑥MS+6-BA 0.1+NAA0.01。生根培養(yǎng)基為⑦1/2MS+IBA 0.2+活性炭0.5g/L；⑧1/2MS+IBA 0.1+活性炭0.5g/L；⑨1/2MS+IBA 0.05+活性炭0.5g/L。以上培養(yǎng)基中均附加30g/L蔗糖和7g/L瓊脂，pH調(diào)為5.8～6.0。培養(yǎng)溫度（25±2）℃，光照強度1500～2000lx，光照時間13h/d。

4外植體的誘導(dǎo)

將外植體消毒后接種到①～③培養(yǎng)基中，1周左右腋芽開始生長，培養(yǎng)基①～③都可誘導(dǎo)出芽，誘導(dǎo)過程中都會產(chǎn)生一定量的愈傷組織。培養(yǎng)基①中產(chǎn)生的愈傷組織量最多，誘導(dǎo)率為54%，且誘導(dǎo)芽相對瘦小，葉片淺綠，誘導(dǎo)芽生長慢，長勢差異大；培養(yǎng)基②中誘導(dǎo)率為69%，誘導(dǎo)過程產(chǎn)生的愈傷組織較少，誘導(dǎo)芽生長比較健壯，葉片深綠，誘導(dǎo)芽生長較快，長勢較①均勻，但有一定的差異；培養(yǎng)基③中誘導(dǎo)率為86%，誘導(dǎo)過程產(chǎn)生的愈傷組織最少，誘導(dǎo)芽生長健壯，葉片深綠，生長速度快，長勢相對均勻。綜合考慮3個處理的誘導(dǎo)率和芽生長情況，培養(yǎng)基③為較理想的啟動培養(yǎng)基（圖1）。

5繼代培養(yǎng)

當(dāng)初代培養(yǎng)的腋芽長至2～4cm左右時，接種到④—⑥增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)叢生芽。接種2周左右陸續(xù)分化出不定芽，26d開始出現(xiàn)黃葉，因此扁桃斑鳩菊的最佳繼代周期應(yīng)控制在24d左右.培養(yǎng)基④中的繼代芽叢芽分化數(shù)量少，生長慢，形成很多疏松的愈傷組織；培養(yǎng)基⑤中的繼代芽分化數(shù)量居中，長勢相對較好，形成的愈傷組織相對④中少，繼代系數(shù)平均為3.8；培養(yǎng)基⑥中繼代芽分化數(shù)量多，葉色濃綠，形成少量愈傷組織，繼代系數(shù)平均達(dá)到5.6（圖2）；因此，扁桃斑鳩菊繼代可選擇培養(yǎng)基⑥配方。

6生根培養(yǎng)

選擇健壯的組培無根苗接種到⑦～⑨培養(yǎng)基中，2周左右無根苗開始生根，3周左右生根率達(dá)到90%以上，但培養(yǎng)基⑦和⑨中的生根數(shù)量相對較少，較細(xì)長；培養(yǎng)基⑧中的生根數(shù)量相對多，粗壯，生根系數(shù)達(dá)到8，因此生根培養(yǎng)可選擇培養(yǎng)基⑧。

7煉苗和移栽

當(dāng)試管苗長至高6cm左右，根長4～6cm時進行煉苗移栽。首先將生根苗拿到溫室中煉苗3～5d，然后將生根苗的瓶蓋打開煉苗2天，用鑷子小心將苗從培養(yǎng)瓶中取出，用清水洗凈黏附于組培苗根系上的培養(yǎng)基，然后栽植到用高錳酸鉀滅好菌的泥炭土：河沙：珍珠巖=5：3：1（體積比）基質(zhì)中。將移栽好的苗放到陰涼處2周，注意保濕，待生長穩(wěn)定后放到陽光下讓其生長，移栽成活率達(dá)90%左右（圖4）。

8總結(jié)

本試驗初步優(yōu)化了扁桃斑鳩菊組織培養(yǎng)各階段的細(xì)胞生長素與細(xì)胞分裂素的配比，得到了較為理想的結(jié)果。結(jié)果表明：培養(yǎng)基③為較理想的啟動培養(yǎng)基，誘導(dǎo)率達(dá)到86%；較好的繼代培養(yǎng)基為養(yǎng)基⑥，繼代系數(shù)平均達(dá)到5.6且生長健壯；較好的生根培養(yǎng)適宜的培養(yǎng)基配方為⑧，生根率大于90%，生根系數(shù)達(dá)到8。但是由于受到材料和實驗條件等的影響，試驗還需要完善，可以在此基礎(chǔ)上進一步研究蔗糖、光照和培養(yǎng)基等因素的影響，進而建立更加高效的無菌繁殖體系。