李 鑫

（天津醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院，天津 300221）

實(shí)時(shí)熒光定位PCR由于測(cè)定速度快、測(cè)定結(jié)果精準(zhǔn)，實(shí)時(shí)熒光定位PCR的敏感性強(qiáng)，因此適用于醫(yī)學(xué)檢測(cè)。實(shí)時(shí)熒光定位PCR是指在原有的PCR反應(yīng)體系當(dāng)中加入熒光基團(tuán)，通過(guò)熒光基團(tuán)實(shí)時(shí)的檢測(cè)和控制整個(gè)檢測(cè)過(guò)程。由于加入熒光集團(tuán)的操作步驟簡(jiǎn)單，能很大程度上的減少污染實(shí)驗(yàn)的幾率，同時(shí)熒光標(biāo)記更為精準(zhǔn)，因此檢測(cè)速度更快、檢測(cè)效率更高，實(shí)時(shí)熒光定位PCR有點(diǎn)眾多，除了在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)上應(yīng)用外，還被應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)還處于完善階段，具有非常好的發(fā)展前景。

1 實(shí)時(shí)熒光定位PCR的基本概念

實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比，很多方面都有顯著的提升。實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)是在傳統(tǒng)的PCR檢測(cè)的基礎(chǔ)上加入熒光基團(tuán)，熒光基團(tuán)的加入能夠有效的解決假陽(yáng)性與不能定位的問(wèn)題，解決這一問(wèn)題能夠大大的提高檢測(cè)的準(zhǔn)確率。熒光定位PCR以特定探針和引物作為重要組成部分，PCR反應(yīng)完成后，通過(guò)熒光曲線對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比較熒光定位PCR技術(shù)敏感度較差，準(zhǔn)確度較差，結(jié)果準(zhǔn)確率低，因此熒光定位PCR技術(shù)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢測(cè)當(dāng)中，能夠提供更加精準(zhǔn)的檢測(cè)結(jié)果。

2 實(shí)時(shí)熒光定位PCR的檢驗(yàn)原理

實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)的檢驗(yàn)原理包括兩個(gè)方面，一個(gè)是數(shù)學(xué)原理，一個(gè)是化工原理。數(shù)學(xué)原理是通過(guò)函數(shù)圖像和函數(shù)公式來(lái)計(jì)算，我們下面來(lái)簡(jiǎn)單介紹一下化工原理，實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)，是在PCR技術(shù)上，又運(yùn)用了探針和熒光染料，來(lái)達(dá)到理想的定位追蹤。首先，是對(duì)引物的設(shè)計(jì)和對(duì)探針的設(shè)計(jì)，這是十分重要的，這個(gè)步驟直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確程度。其次就是把引物和探針進(jìn)行組合，對(duì)此進(jìn)行熒光標(biāo)記，先利用探針來(lái)把靶序列特異雜交的探針來(lái)對(duì)產(chǎn)物的量進(jìn)行控制，再利用熒光染料對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行指示或標(biāo)記，PCR在擴(kuò)增的過(guò)程中應(yīng)加入引物和一個(gè)熒光性探針，在檢測(cè)物兩端分別標(biāo)記報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)。報(bào)告熒光基團(tuán)對(duì)淬滅熒光基團(tuán)發(fā)出信號(hào)，外切酶對(duì)探針進(jìn)行降解，能夠達(dá)到對(duì)檢測(cè)物質(zhì)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)，實(shí)時(shí)熒光標(biāo)記能夠與DNA鏈達(dá)到實(shí)時(shí)的同步，并且能夠有效的避免交叉感染，有良好的實(shí)驗(yàn)效果。

3 實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢測(cè)方面的應(yīng)用

熒光定位PCR技術(shù)是目前為止對(duì)DNA和RNA檢驗(yàn)較為高效、精準(zhǔn)率較高的方法，包括絕對(duì)定量分析和相對(duì)定量分析，這兩種分析方法，可以有效的檢測(cè)基因的拷貝數(shù)和濃度，同時(shí)對(duì)基因表達(dá)水平進(jìn)行比較。在PCR檢測(cè)的過(guò)程中，DNA拷貝數(shù)量與反應(yīng)時(shí)間成正相關(guān)，直到RNA反應(yīng)不以質(zhì)數(shù)方式生成，檢測(cè)結(jié)束。

4 熒光定位PCR技術(shù)當(dāng)前的研究情況

我國(guó)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中使用了實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，實(shí)時(shí)定位PCR技術(shù)在檢測(cè)癌基因方面表現(xiàn)突出，通過(guò)熒光定位技術(shù)能夠通過(guò)熒光標(biāo)記精準(zhǔn)的檢測(cè)出癌基因，在腫瘤早期早期進(jìn)行診斷，對(duì)病情進(jìn)行分析。除此之外，實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)在藥物研究方面表現(xiàn)也是非常突出的，在新藥物的研究過(guò)程中，和藥物后期的觀測(cè)中，實(shí)時(shí)熒光定位能夠快速的、高效的完成任務(wù)，使研發(fā)和實(shí)驗(yàn)都能夠順利完成，并且準(zhǔn)確率較高，同時(shí)避免交叉污染。實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)為我國(guó)的醫(yī)學(xué)方面做出了極大地貢獻(xiàn)，也是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中對(duì)實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)大量使用的原因。實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)是近年來(lái)較為熱門(mén)的技術(shù)之一，實(shí)時(shí)熒光定位技術(shù)是當(dāng)前我們所能夠掌握的技術(shù)當(dāng)中，檢測(cè)度最精準(zhǔn)、最快速、最高效的方法之一。

5 總 結(jié)

當(dāng)前實(shí)時(shí)定位PCR技術(shù)是非常熱門(mén)的檢驗(yàn)技術(shù)，熒光定位PCR技術(shù)比傳統(tǒng)的PCR技術(shù)有較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，是臨床醫(yī)學(xué)和新藥物的研究的實(shí)用性極高的工具，與此同時(shí)，實(shí)時(shí)熒光定位PCR技術(shù)精確度高、準(zhǔn)確性高的一個(gè)較為熱門(mén)的DNA、RNA檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)引物探針能夠得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，通過(guò)熒光曲線達(dá)到理想的實(shí)驗(yàn)效果，能夠精準(zhǔn)的得出實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用到現(xiàn)代的醫(yī)療檢測(cè)當(dāng)中。

[1]左麗麗,劉永軍.熒光定量PCR技術(shù)在環(huán)境微生物檢測(cè)中的應(yīng)用[J].西安航空技術(shù)高等專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào),2008,(01).

[2]袁亞男,劉文忠.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的類(lèi)型、特定與應(yīng)用[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2008,(03).

[3]趙煥英,包金鳳.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的原理及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志.2007,(04).

[4]陳紅兵,周志紅,賀潤(rùn)年,等。熒光定量PCR技術(shù)在結(jié)核桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2008,24(27):3765-3767.