王宏陽(yáng) 葉曉明

(浙江大學(xué)研究生院，浙江 杭州 310000)

血漿miR-222的表達(dá)水平與肺癌的相關(guān)性

王宏陽(yáng) 葉曉明1

(浙江大學(xué)研究生院，浙江 杭州 310000)

目的探討血漿微小RNA(miR)-222與肺癌的相關(guān)性。方法選取肺癌患者273例及正常對(duì)照201例，抽取晨間空腹抗凝血，并提取血漿總RNA。采用TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)各組血漿中miR-222的表達(dá)強(qiáng)度。結(jié)果肺癌患者血漿miR-222表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)。在肺癌患者血漿中，Ⅳ期患者miR-222水平高于Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期患者(P<0.05)。結(jié)論miR-222在肺癌患者血漿中表達(dá)升高，很可能作為一種新的肺癌標(biāo)志物用于臨床。

微小RNA(miR)222；肺癌；血漿；標(biāo)志物

肺癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，不易被發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致患者就診時(shí)往往多已發(fā)生轉(zhuǎn)移，失去手術(shù)切除機(jī)會(huì)。然而，由于目前肺癌的早期分子標(biāo)志物對(duì)肺癌的篩查效果并不理想。因此，發(fā)現(xiàn)并探索新的血漿肺癌標(biāo)志物，并在人群中進(jìn)行篩查，對(duì)于提高肺癌早期的檢出率和診斷率有重要意義。微小RNA(miR)是細(xì)胞內(nèi)的小分子非編碼RNA，它可以通過(guò)與其靶基因的3′UTR結(jié)合并抑制其表達(dá)。miR分子量小，在疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，并在一定時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定存在，因此循環(huán)血miR很可能是一種新的腫瘤早期標(biāo)志物應(yīng)用于臨床。miR-222在體內(nèi)多種組織中廣泛存在。目前認(rèn)為，該miR在包括肺癌在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)〔1～4〕。因此提示，該miR與腫瘤高度相關(guān)，并可能在肺癌的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中起到關(guān)鍵性的調(diào)控作用。本研究探討miR-222與肺癌的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 2012年4月至2015年2月于臨海市第一人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院、經(jīng)病理組織學(xué)確診為肺癌的患者273例為肺癌組，男181例，女92例，平均(59.4±7.5)歲。按照國(guó)際肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)〔5〕，Ⅰ期41例，Ⅱ期53例，Ⅲ期112例，Ⅳ期67例。經(jīng)病理學(xué)分型鱗癌138例，腺癌75例，小細(xì)胞癌41例，大細(xì)胞癌5例，低分化癌14例。正常對(duì)照組201例，隨機(jī)取自本院體檢中心，經(jīng)體檢排除內(nèi)外科疾病的健康人，男121例，女80例，平均年齡(51.8±5.4)歲。

1.2樣品采集與保存 患者在收入院后，在未進(jìn)行任何治療前抽取清晨空腹外周靜脈血4 ml，并收集于乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝管中之后，立即以1 000 r/min離心10 min。轉(zhuǎn)移上層血漿，并分裝于1.5 ml環(huán)氧樹(shù)脂(EP)管中，立即存于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3血漿miR提取及保存 將血漿從冰箱取出，在冰上自然解凍。采用mirVana血漿miR提取試劑盒(Life technologies公司)，按照制造商使用說(shuō)明加入線(xiàn)蟲(chóng)Cel-miR-39內(nèi)參，并提取血漿總RNA。用分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度及提取質(zhì)量，合格后的標(biāo)本立即儲(chǔ)存于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4血漿miR-222檢測(cè) 將各RNA樣品取出，并用焦碳酸二乙酸(DEPC)水稀釋至等濃度，采用ABI公司miR逆轉(zhuǎn)錄試劑盒按使用說(shuō)明分別逆轉(zhuǎn)錄各樣品中miR-222和內(nèi)參Cel-miR-39。采用TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)各樣品中miR-222及Cel-miR-39的Ct值，每個(gè)樣品設(shè)置2個(gè)平行孔，并以miR-222與Cel-miR-39的相對(duì)Ct值表示miR-222在各樣品中的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度。將正常對(duì)照組miR-222的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度設(shè)定為1.00，各組相對(duì)于正常對(duì)照組血漿miR-222的表達(dá)變化。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

正常對(duì)照組血清miR-222表達(dá)強(qiáng)度為1.00(0.44,1.56)，而肺癌組血漿miR-222表達(dá)強(qiáng)度〔2.49(1.27,3.76)〕明顯增高(P<0.01)。Ⅳ期肺癌患者血漿miR-222表達(dá)水平〔3.16(2.14，4.80)〕較Ⅰ期〔1.38(0.91，2.97)、Ⅱ期1.84(0.80，2.73)及Ⅲ期〔2.70(1.44，4.05)〕患者明顯增高(P<0.01)。

3 討 論

迄今為止，已在人類(lèi)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)數(shù)百種miR參與調(diào)控體內(nèi)生理及病理過(guò)程。miR分子小，性質(zhì)較為穩(wěn)定，較多數(shù)胞內(nèi)蛋白更容易釋放入血，因此血漿miR水平的改變很可能是某些疾病早期的重要變化。然而，由于檢測(cè)技術(shù)及理論尚不成熟，目前尚無(wú)作為疾病標(biāo)志物的miR在臨床上應(yīng)用。本研究顯示肺癌組血漿miR-222水平較正常對(duì)照組表達(dá)強(qiáng)度升高，由此提示miR-222很可能是一種新的肺癌標(biāo)志物。

miR-222高表達(dá)于肺癌細(xì)胞內(nèi)，且與患者預(yù)后呈正相關(guān)〔4〕。在肺癌中，miR-222的高表達(dá)與高速泳動(dòng)族蛋白A1有關(guān)〔6〕。因此，過(guò)表達(dá)的miR-222很可能從快速增殖的肺癌細(xì)胞中釋放入血。本研究中血漿miR-222的表達(dá)水平在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者中并無(wú)明顯變化。因此表明，血漿miR-222表達(dá)水平與臨床分期并不平行，尚不能認(rèn)為血漿miR-222可作為肺癌臨床分期的輔助性依據(jù)。但是Ⅳ期患者血漿miR-222表達(dá)水平顯著高于Ⅰ期及Ⅱ期患者，可能與晚期患者腫瘤組織發(fā)生壞死，細(xì)胞內(nèi)容物大量釋放有關(guān)。

miR-222同時(shí)又是一種癌基因，可靶向抑制多種腫瘤抑制蛋白，如p27、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)、金屬蛋白酶抑制因子(TIMP)3等〔7～9〕。miR-222可通過(guò)抑制上述腫瘤抑制蛋白促進(jìn)腫瘤增殖、遷移及侵襲等，加速腫瘤的惡化。因此，在治療的同時(shí)采用相應(yīng)技術(shù)干擾miR-222的表達(dá)，即可延緩甚至阻斷腫瘤的增殖、遷移及侵襲，從而達(dá)到延長(zhǎng)患者壽命、提高生存質(zhì)量的目的。因此，miR-222除可作為肺癌的標(biāo)志物外，還可能是肺癌個(gè)體化治療的潛在靶點(diǎn)。

1Galardi S,Mercatelli N,Giorda E,etal.miR-221 and miR-222 expression affects the proliferation potential of human prostate carcinoma cell lines by targeting p27Kip1〔J〕.J Biol Chem,2007;282(32):23716-24.

2Chen WX,Hu Q,Qiu MT,etal.miR-221/222:promising biomarkers for breast cancer〔J〕.Tumour Biol,2013;34(3):1361-70.

3Wong QW,Ching AK,Chan AW,etal.MiR-222 overexpression confers cell migratory advantages in hepatocellular carcinoma through enhancing AKT signaling〔J〕.Clin Cancer Res,2010;16(3):867-75.

4Mao KP,Zhang WN,Liang XM,etal.MicroRNA-222 expression and its prognostic potential in non-small cell lung cancer〔J〕.Sci World J,2014;2014：908326.

5葉 波，楊龍海，劉向陽(yáng).最新國(guó)際肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)(第7版)修訂稿解讀〔J〕.中國(guó)醫(yī)刊，2008;43(1):21-3.

6Zhang Y,Ma T,Yang S,etal.High-mobility group A1 proteins enhance the expression of the oncogenic miR-222 in lung cancer cells〔J〕.Mole Cell Biochem,2011;357(1-2):363-71.

7Yang YF,Wang F,Xiao JJ,etal.MiR-222 overexpression promotes proliferation of human hepatocellular carcinoma HepG2 cells by downregulating p27〔J〕.Int J Clin Exp Med,2014;7(4):893-902.

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9Lu Y,Roy S,Nuovo G,etal.Anti-microRNA-222(anti-miR-222)and-181B suppress growth of tamoxifen-resistant xenografts in mouse by targeting TIMP3 protein and modulating mitogenic signal〔J〕.J Biol Chem,2011;286(49):42292-302.

〔2016-06-08修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

王宏陽(yáng)(1984-)，男，在職碩士，主治醫(yī)師，主要從事呼吸系統(tǒng)疾病研究。

R734.2

A

1005-9202(2017)17-4312-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.068

1 臨海市第一人民醫(yī)院呼吸科