程東美，方小穩(wěn)，曾莉莎，徐 翀，闞大運(yùn)，張志祥

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幾種殺菌劑對蓮腐敗病菌的室內(nèi)毒力測定

程東美1，方小穩(wěn)1，曾莉莎2，徐 翀1，闞大運(yùn)1，張志祥3*

(1. 仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院植保系，廣東廣州 510225； 2. 東莞市香蕉蔬菜研究所，廣東東莞 5230612；華南農(nóng)業(yè)大學(xué)天然農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510642)

為有效地控制荷花腐敗病的危害，本研究采用含毒介質(zhì)培養(yǎng)法測試了11種殺菌劑的室內(nèi)抑菌作用，并對其中的9種殺菌劑進(jìn)行了毒力測定。抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明：在設(shè)定的濃度范圍內(nèi)，除生石灰+硫磺（60+3）無明顯的抑菌作用外，另10種殺菌劑對病原菌菌絲的生長有一定的抑菌作用，且抑制效果隨藥劑濃度的增加而增加；室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，咯菌腈、氟硅唑、咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑?qū)ι徃瘮〔【玖^強(qiáng)，抑制中濃度50分別為0.03、0.02、0.80和1.44 μg/mL；百菌清、嘧菌酯和乙蒜素次之，50分別為6.14、7.86和8.97 μg/mL；代森錳鋅和惡霉靈的抑制效果一般，抑制中濃度50分別為20.47和25.61 μg/mL。

蓮枯萎病菌；殺菌劑；毒力測定

東莞市蓮湖公園的“荷花節(jié)”是橋頭鎮(zhèn)的名片，也是東莞市特色品牌之一，共舉辦了十三屆橋頭荷花節(jié)，并在2013年成功承辦了全國荷花展，成為首個承辦全國荷花展的鎮(zhèn)級單位，橋頭的知名度和美譽(yù)度得到較大提高。但近年來，蓮腐敗病在蓮湖發(fā)生嚴(yán)重，造成藕鞭、藕節(jié)、藕根腐爛，同時地上部分的葉、花也會萎蔫黃枯，發(fā)病嚴(yán)重的整株枯死，直接影響了蓮的種植和觀賞，增加了種植人工和成本，該病的防治也成為當(dāng)?shù)厣彿N植者和政府急需解決的問題。筆者選擇了生產(chǎn)上常用的殺菌劑及一些新型殺菌劑，進(jìn)行了蓮腐敗病菌的室內(nèi)活性抑制及毒力比較，以期篩選出具有較好抑菌效果的藥劑，為蓮腐敗病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌

蓮腐敗病菌()：病菌分離自東莞市橋頭鎮(zhèn)蓮湖公園發(fā)病蓮地下莖，由仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院植物病理系實(shí)驗(yàn)室鑒定。

1.2 供試藥劑

代森錳鋅(80%可濕性粉劑)，美國陶氏益農(nóng)公司；百菌清（75%可濕性粉劑），山東大成農(nóng)藥股份有限公司；多菌靈（50%可濕性粉劑），上海升聯(lián)化工有限公司；咪鮮胺（250 g/L乳油），美國富美實(shí)公司；惡霉靈（99%原粉），江蘇禾業(yè)農(nóng)化有限公司；咯菌腈（50%卉友懸浮劑）、嘧菌酯（50%繪綠水分散粒劑）、苯醚甲環(huán)唑（10%世高水分散粒劑），瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司；氟硅唑（400 g/L乳油），天津久日化學(xué)工業(yè)有限公司；乙蒜素（80%乳油），河南省大地農(nóng)化有限公司；生石灰+硫磺，分析純，市售。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 菌株的活化 將試管內(nèi)分離純化的病原菌用挑菌環(huán)挑取并放置在培養(yǎng)基中，然后放入28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，4~5 d取出，用打孔器切取菌餅，放入新的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，供后期實(shí)驗(yàn)使用。

1.3.2 室內(nèi)抑菌作用測定 預(yù)備試驗(yàn)中將藥劑稀釋為3個濃度，分別為藥劑的推薦濃度、推薦濃度低10倍和100倍，然后再根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果選擇合適濃度。用無菌水將藥劑稀釋到供試濃度，用可調(diào)移液槍分別吸取1 mL藥液加入裝有冷卻至50°左右的50 mL PDA培養(yǎng)基的三角瓶中，然后加入1~2滴15%的乳酸，迅速搖勻，然后倒入3個消毒培養(yǎng)皿（=90 mm）中，等培養(yǎng)基凝固后，接入菌絲塊（=6 mm）放于平板中央。對照以無菌水處理。處理后的培養(yǎng)皿置于28°恒溫箱中培養(yǎng)，等對照菌落即將長滿培養(yǎng)皿時用十字交叉法測量菌落直徑, 然后用Microsoft Office（2007）Excel計算抑菌率。

1.3.3 毒力測定 選擇抑菌效果較好的藥劑和常用藥劑進(jìn)行毒力測定。根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)，將供試藥劑設(shè)置為以下5個系列濃度，將供試藥劑按其有效成分的含量配制為比使用高50倍的母液，抑菌操作方法參照1.3.2。以等量無菌水處理為對照，每個處理重復(fù)3次。待對照菌落即將長滿培養(yǎng)皿時測量菌落直徑，計算抑菌率，參照張志祥等[1]方法計算毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)和抑菌中濃度50。

2 結(jié)果與分析

2.1 幾種殺菌劑對蓮腐敗病菌的抑制作用

11種供試殺菌劑對蓮腐敗病菌菌絲生長的抑制結(jié)果見表1。試驗(yàn)結(jié)果表明，11種殺菌劑在設(shè)定的濃度范圍內(nèi)，對病原菌菌絲的生長有一定的抑菌作用；生石灰+硫磺（60+3）無明顯的抑菌作用。在供試范圍內(nèi)，有抑菌作用的10種藥劑的抑制效果隨藥劑濃度的增加而增加，但各藥劑對菌絲的抑制效果存在著明顯差異。

表1 幾種殺菌劑對蓮腐敗病菌的平板抑菌效果

2.2 幾種殺菌劑對蓮腐敗病菌的室內(nèi)毒力比較

根據(jù)表1的結(jié)果，選擇9種殺菌劑進(jìn)行了室內(nèi)毒力測定，結(jié)果見表2。由表可見，咯菌腈、氟硅唑、咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑?qū)ι徃瘮〔【玖^強(qiáng)，抑制中濃度50分別為0.03、0.02、0.80和1.44 μg/mL；百菌清、嘧菌酯和乙蒜素次之，50分別為6.14、7.86和8.97 μg/mL；代森錳鋅和惡霉靈的抑制效果一般，50分別為20.47和25.61 g/mL。

表2 9種殺菌劑對蓮腐敗病菌的毒力

3 結(jié) 論

通過采用含毒介質(zhì)培養(yǎng)法，測定了生產(chǎn)中防治蓮腐敗的常用藥劑及幾種新型殺菌劑對蓮腐敗病菌病原菌的抑制作用和室內(nèi)毒力。結(jié)果表明，除生石灰+硫磺（60+3）外，其他藥劑在供試濃度下均有一定的抑菌作用；咯菌腈、氟硅唑、咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑的抑菌毒力較強(qiáng)，其次為百菌清、嘧菌酯和乙蒜素，代森錳鋅和惡霉靈的抑制效果一般。

蓮腐敗病屬土傳病害，初侵染源主要是帶菌的種藕和種植土，植株發(fā)病初期主要是地下莖和根部，且初期發(fā)病的地下莖在外表與健康藕節(jié)無明顯差異，且莖根生長在水中地下，不易被發(fā)現(xiàn)和識別，生產(chǎn)中防治難度大，效果不理想。此外，荷葉蠟質(zhì)層厚，藥劑不易附著也是可能因素之一。目前生產(chǎn)上主要使用的藥劑包括傳統(tǒng)的保護(hù)性殺菌劑如百菌清、代森錳鋅、福美雙[2]等，此類藥劑沒有內(nèi)吸性，葉面處理不能有效輸導(dǎo)到根、莖部，效果差；水體或土壤處理時，常被土壤和水體稀釋，也難以接觸病部；多菌靈、甲基硫菌靈等早期的內(nèi)吸性殺菌劑也是常用品種，此類藥劑在植物體內(nèi)通過質(zhì)外體輸導(dǎo)，即從下而上單向輸導(dǎo)[3]，葉叢噴霧對地下根莖部發(fā)生的蓮腐敗病效果不明顯[4]；廣泛應(yīng)用的甾醇類殺菌劑如丙環(huán)唑等藥劑也只有向上輸導(dǎo)的作用[5]，對蓮腐敗病的效果也較低[6]；惡霉靈對多種土傳病害均有較好的效果，廣泛用于防治鐮刀菌引起蓮腐敗等病害[2]，被植物根吸收后，能在根系內(nèi)移動[6]，但長期大量使用，導(dǎo)致對蓮腐敗病的防效明顯下降。在對東莞橋頭蓮湖公園蓮腐敗病的防治中，還比較了惡霉靈、咪鮮胺等藥劑的田間藥效，但防效均小于40%（另文發(fā)表）。毒力測定是比較藥劑在離體條件下的活性，這個測試結(jié)果摒棄了所有環(huán)境因素的影響，故結(jié)果不能直接用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。對于蓮腐敗病的藥劑防治，還需要做更多的研究。

[1] 張志祥, 徐漢虹, 程東美. EXCEL在毒力回歸計算中的應(yīng)用[J]. 昆蟲知識, 2002, 39(1): 67-70.

[2] 魏林, 梁志懷, 成燕清, 等. 蓮腐敗病的識別與綜合防治[J].長江蔬菜, 2014, 13(19): 46-47, +42.

[3] 徐漢虹主編, 植物化學(xué)保護(hù)學(xué)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社，2007.

[4] 梁志懷, 魏林, 成燕清, 等. 不同殺菌劑對蓮藕腐敗病菌的室內(nèi)毒力測定及田間防治效果[J]. 長江蔬菜, 2011, 10(16): 60-63.

[5] 劉長令主編. 世界農(nóng)藥大全-殺菌劑卷[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2008.

[6] 陳傳聰, 羅銀華, 阮承蓮, 等. 防治蓮腐敗病藥劑篩選試驗(yàn)[J]. 江西植保, 2008, 31(1):35-36.

Indoor Toxicity Tests of Several Fungicides Againstfrom

Cheng Dong-mei1, FANG Xiao-wen1, Zeng Li-sa2, Xu Chong1, Kan Da-yun1, Zhang Zhi-xiang3*

(1. Plant Protection Department, Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guangzhou 510225, China; 2. Dongguan Banana and Vegetable Institute, Dongguan, Guangdong 523061, China; 3. Ministry-level Key Laboratory of Natural Pesticides and Chemical Biology, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

In order to screen effective fungicides againstfromthe inhibitory activity of 11 fungicides and the toxicity of 9 fungicides againstwere tested by measuring the mycelial growth rate. Results showed that 10 fungicides had significant effects on mycelia growth in the test concentration range, but quicklime+sulphur (60+3) had no obvious effect. Results also showed that fludioxonil, flusilazole, prochloraz and difenoconazole had strong inhibitory effects on the pathogen，and the value of50were 0.03, 0.02, 0.80 and 1.44 μg/mL, respectively; chlorothalonil, azoxystrobin and ethylicinhad relatively had secondly strong inhibitory effects, and the values of50were 6.14, 7.86 and 8.97 μg/mL, respectively; while mancozeb and hymexazol had low inhibitory effects, and the values of50were 20.47 and 25.61 μg/mL, respectively.

; fungicides; toxicity testing

S436.45

A

2095-3704（2016）04-0233-04

2016-10-22

花卉產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)病蟲害防控崗位專家建設(shè)項(xiàng)目(2016LM1131)和東莞市社會科技發(fā)展項(xiàng)目（201450720100168）

程東美，博士，副教授，主要從事植物源農(nóng)藥，zkcdm@163.com；

張志祥，zdsys@scau.edu.cn。