吳 磊,陸 超

(南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院 藥學部，江蘇 南京 210029)

止癢酊質量標準研究

吳 磊,陸 超*

(南京中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院 藥學部，江蘇 南京 210029)

目的:建立止癢酊質量標準。方法:首先采用薄層色譜法(TLC)，對止癢酊組方中蛇床子和薄荷腦進行定性鑒別，然后采用高效液相色譜法測止癢酊組方中蛇床子素的含量，采用Hedera ODS-3色譜柱(250×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水(70 ∶30)，流速為1.0 mL/min，檢測波長為322 nm。結果: 蛇床子素的檢測濃度在4.33 μg/mL～138.76 μg/mL范圍內，與峰面積積分值呈良好的線性關系y=86684x+55517(r2=1.0000)，平均加樣回收率為99.00%，RSD=0.56%(n=6)。結論: 所建立的方法準確，專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于止癢酊的質量控制。

止癢酊；薄層色譜；高效液相色譜；質量標準

止癢酊來自江蘇省中醫(yī)院的院內制劑，處方中包含了蛇床子、百部、薄荷腦等成分。組方中蛇床子燥濕殺蟲止癢，與辛涼的薄荷腦合用后，用于各種瘙癢性皮膚病，蟲蚊叮咬。本文采用薄層色譜法[1]和高效液相色譜法[2]對止癢酊進行了定性和定量分析，以提高了止癢酊制劑質量的可控性。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蛇床子與薄荷腦對照藥材均購自江蘇省藥材公司；蛇床子素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110822-200305)。止癢酊(江蘇省中醫(yī)院，批號160611、141125、150601)。高效液相色譜所用試劑為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。硅膠G(青島海洋化工)；939全自動薄層制板器(重慶市南岸貝爾德儀器技術廠)；Waters 2695 高效液相色譜儀(由Waters 515泵，2487 紫外檢測器，20 μL定量進樣環(huán)構成)。1/10萬電子分析天平(BP-211D型，德國Sartorius)；KQ-1000E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；101-1A型電熱鼓風干燥箱(南通滬通制藥機械設備廠)；HH-4數(shù)顯型恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 蛇床子的薄層鑒別方法 取蛇床子對照藥材2 g，加60% 乙醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇2 mL溶解，作為對照藥材溶液。另取止癢酊40 mL，水浴蒸干，殘渣加無水乙醇2 mL溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性供試品溶液。照薄層色譜法(中華人民共和國藥典2015年版一部附錄VI B)試驗，分別吸取上述3種溶液10 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3 ∶1 ∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。

1.2.2 薄荷腦的薄層鑒別方法 取薄荷腦對照藥材，加無水乙醇制成5 mg/mL的溶液，作為對照藥材溶液。另取止癢酊40 mL，水浴蒸干，殘渣加水30 mL溶解，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯2 mL溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性供試品溶液。照薄層色譜法(中華人民共和國藥典2015年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)—乙酸乙酯—氯仿(11 ∶1 ∶3) 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5 %香草醛濃硫酸溶液，105 ℃加熱至顯色清晰。

1.2.3 蛇床子的定量鑒別方法 色譜條件 色譜柱：Hedera ODS-3柱(250×4.6 mm，5 μm) ；流動相：甲醇-水(70 ∶1 ∶30)；檢測波長：322 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min。精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥24 h的蛇床子素對照品適量，置25 mL量瓶中，加乙醇溶解制成426.4 g/ml的對照品溶液。精密吸取止癢酊樣品溶液(160611)2 mL，置25 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。以去掉蛇床子的止癢酊處方，按其生產(chǎn)工藝制備陰性藥液，再按“1.2.1”項下方法制備陰性對照溶液。按上述色譜條件，取蛇床子素對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀中進行干擾試驗[3-6]。

2 結果與分析

2.1 定性分析與結果

2.1.1 蛇床子的薄層鑒別 照薄層色譜法(中華人民共和國藥典2015年版一部附錄VI B)試驗，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性供試品無干擾。具體結果詳見圖1。

圖1 蛇床子薄層鑒別圖

2.1.2 薄荷腦的薄層鑒別 照薄層色譜法(中華人民共和國藥典2015年版一部附錄VI B)試驗，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性供試品無干擾。詳見圖2。

圖2 薄荷腦薄層鑒別圖

2.2 定量分析和結果

2.2.1 蛇床子定量鑒別 供試品色譜圖中，在與對照品色譜圖相應的位置上，有一相同的色譜峰，而陰性對照溶液色譜圖在此處無干擾(見圖3)。

圖3(A) 蛇床子素對照品溶液

圖3(B) 止癢酊樣品溶液

圖3(C) 陰性對照溶液

2.2.2 線性關系考察 取上述對照品溶液，用乙醇依次稀釋至69.38、34.69、17.34、8.67、4.33 μg/mL濃度的對照品溶液，分別精密吸取各不同濃度的對照品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀中測定。經(jīng)線性回歸，得蛇床子素回歸方程y=86684x+55517(r2=1.0000)，蛇床子素在4.33～138.76 μg/mL范圍內，與峰面積的積分值呈良好的線性關系。

2.2.3 精密度試驗 取同一供試品溶液，重復進樣6次，以峰面積的積分值計算，RSD%為0.80%。

2.2.4 重復性試驗 取同一批號的止癢酊溶液各2 mL，按“2.2.2”項下方法分別制備6份樣品溶液，按上述色譜條件進行測定，以峰面積的積分值計算，RSD為1.95%。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別在制備后的0、2、4、6、8、12 h進樣，測定峰面積，計算，RSD%為0.64%，說明該供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

2.2.6 加樣回收試驗 精密吸取已知含量[7]的止癢酊樣品1 mL，置25 mL量瓶中，共6份，并分別加入蛇床子素對照品溶液，依法制備供試品溶液，精密吸取20 μL，注入高效液相色譜儀，測定，計算，平均回收率為99.00%，RSD為0.56%。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果表

3 結論與討論

用HPLC法測定蛇床子素的含量，文獻報道有多種流動相，比較了多種比例的甲醇-水分離效果，以甲醇-水(70 ∶30)分離效果為優(yōu)[8]，分離度、保留時間適中。

用紫外分光光度計對文中試驗條件下蛇床子素對照品溶液作了波長掃描，發(fā)現(xiàn)其最大吸收波長在321.5 nm，在參考文獻[9-10]后，選用322 nm作為檢測波長。

結果:蛇床子素的檢測濃度在4.33 μg/mL～138.76 μg/mL范圍內，與峰面積積分值呈良好的線性關系y=86684x+55517(r2=1.0000)，平均加樣回收率為99.00%，RSD=0.56%(n=6); 結論:所建立的方法準確，專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于止癢酊的質量控制。

[1]鄭立卿，張丹參，薛貴平，等.薄層掃描法測定蛇床子提取液中蛇床子素的含量[J]．河北北方學院學報：醫(yī)學版，2008，25(2)：8-10．

[2]吳承云．郭力.董曉萍.HPLC測定寄生追風液中獨活的有效成分蛇床子素[J]．華西藥學雜質，2000，15(2)：l29-l30．

[3]李爽，賈媛，范玲，等．芪葵顆粒定性定量方法研究[J]．藥物分析雜志，2012，32(9)：1564-1577．

[4]姜勇，金芳，鮑忠，等．不同來源黃芪藥材中黃芪甲苷的定量分析[J]．中國中藥雜志，2006，31(11)：930-933．

[5]吳怡，鄒桂欣，王光函，等．化胃舒顆粒供試品制備方法對其黃芪甲苷含量的影響[J]．中國藥師，2014，17(1)：29-32．

[6]劉和平，彭招華，張潤容，等．黃芪藥材中黃芪甲苷UPLC-ELSD含量測定方法的優(yōu)化[J]．中國實驗方劑學雜志，2015，21(5)：37-40．

[7]馬靈珍．HPLC法同時測定化痔膠囊中柚皮苷、新橙皮苷的含量[J]．安徽科技學院學報，2015，29(5)：20-23．

[8]康?。胁菟帉嵝噪u蛋鵪鶉生產(chǎn)性能及部分血液生化指標的影響[J]．安徽科技學院學報，2014，28(6)：1-4．

[9]劉燦群．黃香連.HPLC法測定青柏潔身洗液中蛇床子素的含量[J]．中藥材，2004，27(5)：380．

[10]黃美蘭．王希.黃榮林.高效液相色譜法測定癬濕藥水中蛇床子素的含量[J]．廣東藥學，2003，13(3)：4．

(責任編輯：馬世堂)

Research on Quality Standard of Zhiyang Tincture

WU Lei, LU Chao*

(Department of Pharmacy，Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029, China)

Objective: To establish the quality standard for Zhiyang Tincture. Methods: TLC was first used to identify Fruetus Cnidii and Menthol to establish the HPLC method for determining the osthole in Zhiyang Tincture. It was determined on Hedera ODS-3column(250×4.6 mm，5μm)，Mobile phase：methanol-water(70 ∶30). The flowr ate was at 1.0 mL/min, and the detive wavelength was at 322 nm. Results: The calibratine curve was linear with a range of 4.33～ 138.76 μg for osthole, y=86684x+55517(r2=1.0000), the average recovery was 99.00% with RSD%0.56%(n=6). Conclusion: The methods are accurate with a good reproductivity and can be used as a quantitative analysis for preparation of the osthole in the Zhiyang Tincture.

Zhiyang Tincture; TLC ; HPLC; Quality standard

2016-06-23

江蘇省中醫(yī)藥管理局項目(JD201512)。

吳磊 (1983-)，男，江蘇省南京市人，碩士，主要從事中藥臨床藥代動力學研究；*通訊作者：陸超，主管中藥師，E-mail:sinkly228@126.com。

R917

A

1673-8772(2016)06-0054-04