劉立恒 ， 姚美蘭 ， 王 萍 ， 李 麟 ， 吳家斌

(1.江西農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院 ， 江西 南昌 330045 ； 2.江西省吉安市新干縣大洋鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合站 ， 江西 新干 331317)

鼠鐮形艾美耳球蟲致病性試驗

劉立恒1， 姚美蘭2， 王 萍1， 李 麟1， 吳家斌1

(1.江西農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院 ， 江西 南昌 330045 ； 2.江西省吉安市新干縣大洋鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合站 ， 江西 新干 331317)

小鼠作為實驗動物，在多種醫(yī)學科學實驗中被廣泛應用。其需求量日益增多，并且對質量的要求越來越高[1]。實驗動物感染寄生蟲可使實驗研究受到干擾，甚至影響結論的正確性，從而降低科研的科學性、準確性及穩(wěn)定性[2]。多發(fā)易發(fā)的鼠球蟲病是由艾美耳球蟲寄生于鼠的腸道而引起小鼠消化不良和腹瀉甚至死亡癥狀的寄生蟲病，危害較為嚴重。據(jù)報道，寄生于小鼠的艾美耳球蟲有12種，其生活史清楚且具有一定致病性的鐮形艾美耳球蟲(E.falciformis)及蠕形艾美耳球蟲(E.vermiformis)兩種[3]，為了解小鼠感染E.falciformis蟲株后出現(xiàn)的臨床癥狀及寄生部位組織病理變化，筆者進行鼠鐮形艾美耳球蟲致病性試驗，旨為共同提高對小鼠鐮形艾美耳球蟲病的認識,防制小鼠球蟲病的發(fā)生，保障實驗小鼠質量提供臨床理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 卵囊 鐮形球蟲卵囊由本實驗室提供。

1.2 動物 球蟲病陰性小鼠40只(南昌某實驗動物室提供)。

1.3 藥品 飽和食鹽水和5%重鉻酸鉀液(實驗室提供)，無水乙醇，二甲苯，福爾馬林，H.E.染液。

1.4 器械 離心機，顯微鏡，電冰箱，生化培養(yǎng)箱，電熱恒溫干燥箱，KD-1508A 輪轉式切片機，生物組織標準攤烤片機，ZT-12J 生物組織自動脫水機，電子天平等全套寄生蟲實驗常規(guī)器皿。

1.5 小鼠分組 蟲株復壯、增殖、感染、對照4組各為10只小鼠。

1.6 小鼠飼養(yǎng) 小鼠飼養(yǎng)在專用塑料盒內，標注組別，飼喂新鮮鼠料和潔凈清水，常換墊料保持衛(wèi)生。

1.7 蟲株復壯、增殖 清水離心洗凈卵囊，經(jīng)口感染小鼠，第8天收集新鮮糞，用飽和鹽水漂浮、離心分離收集卵囊，保存于2.5%重鉻酸鉀液青霉素瓶內，置28 ℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24～30 h備用。先復壯收集卵囊再增殖，收集大量的卵囊，以保障足夠的卵囊數(shù)。

1.8 感染致病 以4×104個孢子化卵囊/只，經(jīng)口感染小鼠，感染后每天觀察小鼠臨床癥狀并于第6～10天每天剖檢2只小鼠，觀察腸道病變、拍照；取小鼠病變腸段H.E.染色制片，顯微鏡下觀察，記錄。

1.9 染色片的制作 手術剪橫截長約3 mm的盲(結)腸組織3段，用紗布包好放入燒杯中，自來水沖洗12～24 h取出，經(jīng)脫水機上梯度乙醇自動脫水后經(jīng)二甲苯透明，用鑷子將組織快速夾于30 ℃恒溫箱已制好的小紙盒里溶解的石蠟中。取出蠟盒里凝固的蠟塊裝在KD-1508A輪轉式切片機上，調整8 μm切片厚度，勻速緩慢搖柄切片，切片置生物組織標準攤烤片機45 ℃恒溫水槽中，用潔凈的載玻片撈取蠟帶，再用生物組織標準攤烤片機烤片至干燥。蘇木精和H.E.染色[4]，封片。

2 結果

2.1 寄生部位 鐮形艾美耳球蟲主要寄生于小鼠大腸段的盲腸及結腸。

2.2 感染組小鼠臨床表現(xiàn) 感染第5～8天小鼠飲食、活動量逐減，精神沉郁，被毛逆亂，采食量減少，消化不良，稀糞并有大量鐮形艾美耳球蟲卵囊排出，消瘦，甚至死亡(見中插彩版圖1)。

2.3 病變 肉眼觀察結腸逐漸萎縮變短，內含大量黏液并有少量干酪樣物質；盲腸開始腫脹后盲端萎縮變硬，質地變脆，盲腸黏膜上有粟粒大的灰白色的壞死灶，無出血。

2.4 病理組織 顯微鏡下觀察腸絨毛、腸腺、固有膜及黏膜下層等結構具有相當程度的損傷和破壞； 腸上皮細胞凋亡，絨毛脫落。細胞內可見大量裂殖體、裂殖子的和大小不等的合子，但黏膜下未見出血(見中插彩版圖2)。

3 分析與討論

3.1 鐮形艾美耳球蟲蟲株的一般生物性 卵囊形態(tài)類圓形，無色，平均大小22.5×18.2 μm，卵囊壁光滑、兩層，無微孔，形狀指數(shù)1.24，有內外殘體，孢子化時間為20～24 h，潛隱期為7 d，寄生部位在盲腸或結腸，有一定的毒性。目前在我國小鼠體內發(fā)現(xiàn)的多是鐮形艾美耳球蟲(E.falciformis)[5],此試驗提出鐮形艾美耳球蟲的致病性，防制小鼠球蟲病的發(fā)生，對控制小鼠的微生物學質量具有指導意義,

3.2 小鼠感染寄生蟲的原因及預防 實驗小鼠飼養(yǎng)在窄小的籠具中，排泄物和污濁的空氣易造成呼吸道、消化道疾病的傳播；物質條件的低劣、食物供應不穩(wěn)定，使實驗鼠體質下降，抵抗力降低。小鼠身體素質下降及實驗小鼠管理不當?shù)奶攸c，是小鼠感染寄生蟲的主要原因。建議加強飼養(yǎng)管理，合理安排換窩時間，加強墊料消毒管理，減少感染。有條件的可通過生物凈化手段引進清潔級以上小鼠并在屏障系統(tǒng)內進行飼養(yǎng)和繁殖；定期對飲水、飼料、墊料及紫外燈、消毒鍋等的消毒效果進行檢測，對室內落下菌及菌群進行分析，確保實驗動物的質量。

[1] 楊曉野，劉珍蓮,郭媛華，等. 實驗小鼠寄生蠕蟲及外寄生蟲種類分析[J]. 內蒙古畜牧科學，1994,03:38-40.

[2] 李超，鄭安潔,張強，等. 實驗小鼠體內寄生蟲感染情況調查[J].中國寄生蟲病防治雜志，2005，02:163-164.

[3] 徐彩云,張大維,邴國強，等. 實驗小動物艾美球蟲概述[J]. 中國比較醫(yī)學雜志,2004,05:318-320.

[4] 劉世新，實用生物組織學技術[ M ]，北京：科學出版社，2004：74-75．

[5] 張西臣，楊舉，尹繼剛，等.費氏艾美爾球蟲(E.ferrisi)某些生物學特性的研究[J]. 上海實驗動物科學,1997.17(2):64-66.

S852.72+3

B

0529-6005(2017)08-0035-01

2016-09-29

江西省自然科學基金項目(20151BA204017)

劉立恒(1974-)，男，講師，博士，從事動物寄生蟲學研究，E-mail:lihengliu0714@163.com

吳家斌，E-mail:okwjb123@163.com