蘇 喆 ， 葉曉敏 ， 謝富強(qiáng)

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193； 2.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南鄭州450046)

超聲介導(dǎo)下對正常犬行肝臟活組織檢查

蘇 喆1， 葉曉敏2， 謝富強(qiáng)1

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193； 2.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南鄭州450046)

超聲介導(dǎo)活組織檢查分為細(xì)針抽吸活組織檢查(FNA)及組織芯活組織檢查(TCB)。國外獸醫(yī)已經(jīng)將其作為臨床常規(guī)診斷方法。近年來，國內(nèi)獸醫(yī)應(yīng)用超聲介導(dǎo)FNA越發(fā)普及[1]，但TCB應(yīng)用較少，且國內(nèi)關(guān)于兩種活組織檢查方法安全性、術(shù)后恢復(fù)情況評估的研究依然不足。本文通過對正常犬肝臟組織及局部壞死灶模型進(jìn)行超聲介導(dǎo)活組織檢查，分別評價(jià)此操作的安全性、準(zhǔn)確性以及TCB術(shù)后恢復(fù)情況。

1 試驗(yàn)方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組 本試驗(yàn)選用12只小型成年雜種試驗(yàn)犬，隨機(jī)選取6只試驗(yàn)犬作為造模組，用于準(zhǔn)確性研究；6只試驗(yàn)犬作為非造模組，用于安全性研究。

1.2 肝臟局部壞死灶模型制作 全身麻醉后超聲介導(dǎo)下向造模組試驗(yàn)犬左肝外葉腹側(cè)、背側(cè)及右肝外葉腹側(cè)、背側(cè)局部注射70%乙酸-氯化鈉溶液(0.05 mL/次)，制作肝臟局部壞死灶模型。

1.3 FNA 超聲介導(dǎo)下對造模組試驗(yàn)犬肝臟局部壞死灶模型及非造模組試驗(yàn)犬肝臟相同部位進(jìn)行FNA。術(shù)后即刻進(jìn)行超聲檢查；術(shù)后5 h進(jìn)行超聲、血液常規(guī)檢查；術(shù)后24、48、72 h進(jìn)行超聲、血液常規(guī)、血液生化檢驗(yàn)。將活檢所得樣本進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。

1.4 TCB 兩組試驗(yàn)犬于FNA術(shù)后1周進(jìn)行肝臟TCB。全身麻醉后超聲介導(dǎo)下對造模組試驗(yàn)犬肝臟局部壞死灶模型及非造模組試驗(yàn)犬肝臟相同部位進(jìn)行TCB。術(shù)后定期對試驗(yàn)犬進(jìn)行影像學(xué)、血液學(xué)檢驗(yàn)。將活檢所得樣本進(jìn)行組織學(xué)檢查。

1.5 剖檢 于術(shù)后第2、4、6周隨機(jī)選擇兩組試驗(yàn)犬各1只實(shí)施安樂死并進(jìn)行剖檢，于術(shù)后第8周將剩余兩組試驗(yàn)犬各3只實(shí)施安樂死并進(jìn)行剖檢。取肝臟活檢部位及正常肝臟組織樣本進(jìn)行組織學(xué)檢查。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 肝臟局部壞死灶模型 于注射后即刻對相應(yīng)部位進(jìn)行超聲檢查，可見注射部位回聲顯著增強(qiáng)、局部伴不潔聲影、與周圍正常組織界限清晰可辨。24 h后再次進(jìn)行超聲檢查，可見局部壞死灶呈橢圓形至不規(guī)則邊界清晰的強(qiáng)回聲區(qū)，大小較為固定(直徑0.51±0.03 cm)。

2.2 FNA

2.2.1 FNA準(zhǔn)確性 本研究中造模組試驗(yàn)犬共6只，肝臟局部壞死灶模型共24個(gè)。FNA活檢共27次，其中穿刺失敗3次(1次穿刺失準(zhǔn)，2次樣本不合格)。本研究中肝臟FNA準(zhǔn)確率為24/27(88%)。

造模組細(xì)胞學(xué)涂片可見大量紅染的滲出或細(xì)胞壞死崩解后產(chǎn)物。細(xì)胞成分包括正常的肝細(xì)胞及壞死細(xì)胞(見中插彩版圖1)。非造模組細(xì)胞學(xué)涂片均為正常肝細(xì)胞。

2.2.2 FNA安全性 穿刺過程中及穿刺完畢出針后即刻對穿刺部位進(jìn)行超聲檢查以監(jiān)測積液、出血等活組織檢查并發(fā)癥。術(shù)后即刻、5、24、48、72 h進(jìn)行超聲檢查，其中部分犬肝臟周圍出現(xiàn)微量積液及穿刺路徑少量氣體殘留，基本于穿刺后72 h之內(nèi)逐漸減小直至消失。對比術(shù)前術(shù)后測量數(shù)據(jù)差異不顯著，肝臟形態(tài)無明顯改變。術(shù)后5 h檢查試驗(yàn)犬紅細(xì)胞壓積(HCT)與術(shù)前檢查所得數(shù)據(jù)進(jìn)行對比，部分犬術(shù)后HCT較術(shù)前有所下降，但仍處于正常范圍內(nèi)；下降幅度均未達(dá)到術(shù)前檢查數(shù)據(jù)的10%，結(jié)合超聲檢查結(jié)果得出未見嚴(yán)重出血的結(jié)論，無需進(jìn)行手術(shù)或藥物干預(yù)。

2.3 TCB

2.3.1 TCB準(zhǔn)確性 本試驗(yàn)中造模組試驗(yàn)犬共6只，肝臟局部壞死灶模型共24個(gè)。TCB活檢共31次，其中穿刺失敗7次(3次穿刺失準(zhǔn)，4次樣本不合格)。本試驗(yàn)中肝臟TCB準(zhǔn)確率為24/31(77%)。

造模組組織學(xué)切片可見出血及壞死肝組織(見中插彩版圖2)。非造模組組織學(xué)切片為正常肝組織。

2.3.2 TCB安全性 穿刺過程中及出針后即刻對穿刺部位進(jìn)行超聲掃查以監(jiān)測積液、出血等活組織檢查并發(fā)癥。與FNA結(jié)果相似，部分試驗(yàn)犬穿刺部位于術(shù)后出現(xiàn)無回聲暗區(qū)，且無回聲暗區(qū)基本于術(shù)后72 h之內(nèi)逐漸減小直至消失。結(jié)合血液學(xué)檢查及超聲檢查得出未見嚴(yán)重出血的結(jié)論，無需進(jìn)行手術(shù)或藥物干預(yù)。

2.4 活檢術(shù)后恢復(fù)情況 造模組犬肝臟受壞死灶影響，難以評價(jià)TCB活檢部位恢復(fù)情況。故于TCB術(shù)后2、4、6、8周對非造模組犬實(shí)施安樂死并進(jìn)行尸體剖檢。眼觀活檢部位未見結(jié)締組織粘連，針孔處隨時(shí)間變化逐漸平滑，顏色逐漸與周圍肝組織一致。

取活檢部位肝臟組織進(jìn)行組織學(xué)檢查(見中插彩版圖3)?？傮w結(jié)果恢復(fù)時(shí)間越長，針道直徑越小、修復(fù)情況越好。遺憾的是，于第8周剖檢所得樣本中結(jié)締組織均未完全充滿整個(gè)針道、紅細(xì)胞溶解的情況依舊持續(xù)存在。根據(jù)結(jié)締組織、新生血管、組織細(xì)胞及紅細(xì)胞溶解的程度可得出損傷未完全修復(fù)的結(jié)論。

3 分析與討論

3.1 超聲介導(dǎo)肝臟活檢準(zhǔn)確性 比較本試驗(yàn)肝臟FNA、TCB穿刺準(zhǔn)確率可知FNA穿刺準(zhǔn)確率高于TCB。FNA穿刺針(18～22G)直徑小，穿刺時(shí)無需用力即可輕易穿透皮膚、腹壁及靶器官包膜，且對固定靶器官要求較低[2]。TCB活檢針(14～18G)直徑大，即使預(yù)先做皮膚切口，在穿透腹壁、靶器官包膜時(shí)亦需要用力較大，否則靶器官容易移位。

3.2 超聲介導(dǎo)肝臟活檢安全性 Watson等人認(rèn)為，發(fā)生血小板減少癥(血小板計(jì)數(shù)小于120×109/L)或凝血障礙(活化部分凝血活酶時(shí)間APTT大于18 s，凝血酶原時(shí)間PT大于9.1 min)時(shí)為活檢禁忌癥，應(yīng)謹(jǐn)慎進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評估[3]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)犬均體況良好、術(shù)前檢查未見明顯異常，故試驗(yàn)中未出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，無需手術(shù)干預(yù)或用藥治療。Christensen等人指出也可在術(shù)前12 h使用維生素K進(jìn)行保護(hù)性用藥[4]。

超聲檢查表明，在試驗(yàn)條件下，活組織檢查并發(fā)癥少且程度輕微。實(shí)時(shí)超聲掃查中可見穿刺部位出現(xiàn)無回聲暗區(qū)。根據(jù)靶器官的性質(zhì)判斷應(yīng)為少量出血或積液。該超聲征象僅出現(xiàn)在活組織檢查完畢即刻及術(shù)后5 h，一般于術(shù)后24 h便無法探查。推斷其原因有兩點(diǎn)：一是出血或積液量很少，散布在腹膜腔中迅速吸收；二是出血后形成散在的血凝塊，其超聲征象不易與周圍軟組織區(qū)分。無論是FNA還是TCB，出針后應(yīng)立即用無菌紗布或止血明膠[5]壓迫穿刺部位，壓迫時(shí)間應(yīng)根據(jù)靶器官、進(jìn)針位點(diǎn)皮膚組織情況適當(dāng)調(diào)整。TCB術(shù)后壓迫時(shí)間可較長，待未見出血后再進(jìn)行超聲檢查。

術(shù)后血液學(xué)檢查結(jié)果表明，F(xiàn)NA、TCB對靶器官功能影響差異不顯著。

3.3 肝臟活檢術(shù)后組織恢復(fù)情況 術(shù)后第2天活檢部位超聲征象便與術(shù)前檢查無明顯差異，但剖檢與組織學(xué)切片顯示損傷尚未修復(fù)。本試驗(yàn)試驗(yàn)犬靶器官損傷于術(shù)后8周仍未恢復(fù)，故8周內(nèi)對同一部位進(jìn)行連續(xù)活檢無臨床診斷意義。

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2016-03-24

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFD0501010)

蘇喆(1989-)，男，碩士，從事小動(dòng)物臨床影像診斷工作，E-mail：sz1412@126.com

謝富強(qiáng)，E-mail: xiefuqiang@cau.edu.cn

4.4

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0529-6005(2017)03-0078-02