張晨捷 高權(quán)新 彭士明 施兆鴻 王建鋼

(中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部東海與遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200090)

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飼料中大豆油替代魚油對(duì)銀鯧運(yùn)輸前后應(yīng)激指標(biāo)及組織抗氧化能力的影響

張晨捷 高權(quán)新 彭士明*施兆鴻 王建鋼

(中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部東海與遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200090)

本試驗(yàn)通過檢測(cè)運(yùn)輸脅迫前后血清皮質(zhì)醇、葡萄糖和乳酸濃度以及組織抗氧化性能的變化，以研究飼料中大豆油替代魚油對(duì)銀鯧運(yùn)輸前后應(yīng)激指標(biāo)及組織抗氧化能力的影響。試驗(yàn)配制4種試驗(yàn)飼料，分別以100%魚油(FO組)、70%魚油+30%大豆油(FSO組)、30%魚油+70%大豆油(SFO組)、100%大豆油(SO組)為脂肪源，飼喂平均體重(17.2±6.7) g銀鯧60 d后進(jìn)行4 h運(yùn)輸脅迫。每種飼料飼喂3個(gè)水泥池(重復(fù))，每池投放50尾試驗(yàn)魚。結(jié)果顯示：4 h運(yùn)輸脅迫后，各組血清皮質(zhì)醇濃度均有所增加，其中SO組變化顯著(P<0.05)，升高1.89倍，SFO組變化程度最小；各組血清葡萄糖濃度均略有增加，其中SFO組增加最少，但變化均不顯著(P>0.05)；各組乳酸濃度則均出現(xiàn)顯著增加(P<0.05)，尤其是SO組；各組腦部乙酰膽堿酯酶(AChE)活力均出現(xiàn)顯著減弱(P<0.05)，而SFO組無論是在脅迫前還是在脅迫后在各組中均有最高活力；各組血清超氧化物歧化酶(SOD)活力均顯著增強(qiáng)(P<0.05)，其中SO組上升幅度最大；雖然各組血清過氧化氫酶(CAT)活力均有所增強(qiáng)，但只有SO組變化顯著(P<0.05)；肝臟和肌肉CAT活力僅SO組顯著增強(qiáng)(P<0.05)，其余各組變化不顯著(P>0.05)；SO組血清SOD和CAT活力顯著增強(qiáng)(P<0.05)。由此可見，SO組銀鯧在運(yùn)輸后機(jī)體健康情況較差，應(yīng)激反應(yīng)較為劇烈，說明投喂過量添加大豆油的飼料不利于銀鯧的機(jī)體健康和長途運(yùn)輸，而在保持魚油含量的前提下適當(dāng)添加大豆油的效果較好。

銀鯧；運(yùn)輸；脂肪酸；應(yīng)激；抗氧化能力

銀鯧(Pampusargenteus)隸屬鯧科(Stromateidae)鯧屬(Pampus)，在我國各海域均有分布[1]，以東海北部近海即呂四和舟山漁場(chǎng)的資源量最高，是沿海地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)魚類，具有較高的養(yǎng)殖開發(fā)潛力[2]。自21世紀(jì)初，國內(nèi)陸續(xù)開展了針對(duì)銀鯧人工繁育及養(yǎng)殖方面的研究，盡管在人工繁育及養(yǎng)殖方面取得了一定的科技成果[3-4]，但規(guī)模化養(yǎng)殖及技術(shù)推廣仍存在較大難度，其中運(yùn)輸問題是主要的限制因子之一，原因在于銀鯧對(duì)閃光、噪聲、人工操作、運(yùn)輸?shù)榷加忻黠@的應(yīng)激反應(yīng)，且反應(yīng)強(qiáng)烈，造成體表大量分泌黏液、粉鱗脫落、擦傷和撞傷，極易死亡。長鏈多不飽和脂肪酸(long-chain polyunsaturated fatty acids,LC-PUFA)分為n-3和n-6系列，是魚類維持正常生長發(fā)育和生理功能的重要營養(yǎng)物質(zhì)，且主要從外界獲取[5]。魚油中n-3 LC-PUFA含量較高，魚類飼料中常通過添加魚油補(bǔ)充LC-PUFA。由于目前魚油原料短缺且價(jià)格昂貴，而植物油資源較豐富且價(jià)格低廉，因此植物油在飼料工業(yè)上常被用作魚油替代品，但大部分植物油中n-6 PUFA含量較高，n-3 PUFA含量較少甚至沒有[6-7]。Villasante等[8]研究顯示：n-6 PUFA與n-3 PUFA攝入比例不均衡會(huì)影響脂類代謝，造成某些脂類大量積累，進(jìn)而增加魚體組織中發(fā)生脂質(zhì)過氧化的風(fēng)險(xiǎn)。另外，n-3 PUFA比n-6 PUFA更容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化作用[9]。因此，飼料中保持適當(dāng)?shù)膎-3/n-6 PUFA十分重要。組織中脂肪酸組成的改變會(huì)引起機(jī)體抗氧化水平的相應(yīng)變化，其產(chǎn)生的氧化壓力將削弱機(jī)體抗應(yīng)激和抗氧化的能力。

應(yīng)激反應(yīng)是一種對(duì)外界刺激的保護(hù)性措施，包括運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性、激素水平、能量代謝和電解質(zhì)平衡等的變化[10]。但持續(xù)處于應(yīng)激狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的需氧代謝紊亂，產(chǎn)生氧化自由基，并且免疫防御體系將會(huì)受到抑制，導(dǎo)致魚體對(duì)病原敏感性的增加[11-12]。血液中皮質(zhì)醇(COR)、葡萄糖(GLU)以及乳酸(LD)濃度隨應(yīng)激程度的不同呈規(guī)律性變化，可作為反映應(yīng)激程度的指標(biāo)[13]。另外，運(yùn)輸過程中的機(jī)械損傷也會(huì)引發(fā)細(xì)菌和真菌感染，導(dǎo)致運(yùn)輸后一段時(shí)間內(nèi)發(fā)生持續(xù)死亡現(xiàn)象[14]。乙酰膽堿酯酶(acetyl-cholinesterase，AChE)是神經(jīng)傳導(dǎo)中的關(guān)鍵酶，在突觸間降解乙酰膽堿，終止神經(jīng)遞質(zhì)對(duì)突觸后膜的興奮作用，保證神經(jīng)信號(hào)的正常傳遞。銀鯧應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈，運(yùn)輸存活率低，運(yùn)輸后存活個(gè)體也會(huì)出現(xiàn)行為和生理異常，例如：受刺激后通常會(huì)越出水面、撞擊池壁或網(wǎng)箱，過度興奮后又會(huì)原地打轉(zhuǎn)或打漂，并難以恢復(fù)正常。因此，本試驗(yàn)通過在飼料添加大豆油替代不同比例的魚油飼喂銀鯧，研究其在運(yùn)輸脅迫前后血清皮質(zhì)醇、葡萄糖、乳酸濃度以及AChE活力和組織抗氧化能力的變化情況，旨在為銀鯧運(yùn)輸前飼料組成配比和體質(zhì)強(qiáng)化提供參考。

1 材料與方法

1.1 飼料制備

分別以100%魚油(FO組)、70%魚油+30%大豆油(FSO組)、30%魚油+70%大豆油(SFO組)、100%大豆油(SO組)為脂肪源配制等氮等能等脂的4種試驗(yàn)飼料，其組成及營養(yǎng)水平見表1，脂肪酸組成見表2。4種試驗(yàn)飼料的蛋白質(zhì)水平均在50%左右，脂肪水平均在16%左右。所有飼料原料經(jīng)過充分混合后經(jīng)絞肉機(jī)制成粒徑為2 mm的顆粒料，于25 ℃烘箱中風(fēng)干后，放于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與取樣

挑選600尾體表無傷、體色正常的銀鯧幼魚(4月齡)為試驗(yàn)魚，初始規(guī)格：平均體重(17.2±6.7) g，平均叉長(8.5±0.9) cm。將600尾試驗(yàn)魚平均分配于12個(gè)16 m3的圓形水泥池中，并隨機(jī)分為4個(gè)飼料組，每組3個(gè)重復(fù)(水泥池)，每池50尾試驗(yàn)魚。預(yù)飼1周，飼養(yǎng)試驗(yàn)自2013年8月開始，于2013年9月結(jié)束，共計(jì)60 d。飼養(yǎng)期間，養(yǎng)殖水泥池24 h不間斷充氣，每天飽食投喂2次(08:00和16:00)，日換水量為40%。整個(gè)試驗(yàn)期間水溫變化范圍為24～29 ℃，鹽度為24～27。

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后從每個(gè)水泥池取3尾魚作為脅迫前樣本(n=9)。而后從每個(gè)水泥池取3尾魚進(jìn)行4 h運(yùn)輸脅迫，將3尾魚放入40 L塑料打包袋，加15 L新鮮海水并充滿氧氣，用橡皮筋扎住袋口密封，放入50 L容積泡沫箱，共12箱。用卡車運(yùn)輸4 h，以碎冰保持運(yùn)輸水溫為22～24 ℃，4 h運(yùn)輸脅迫后，出現(xiàn)少量死亡，故每袋取2尾作為脅迫后樣本(n=6)。樣品魚隨機(jī)選取，規(guī)格相近，平均體重為(34.8±5.8) g，平均叉長為(10.9±1.1) cm。

樣品魚撈取后立即經(jīng)100 mg/L MS-222麻醉，然后用1 mL無菌注射器尾靜脈采血，置于無菌離心管中，4 ℃靜止12 h，4 000 r/min離心15 min，取其上清液。采血后，在碎冰上解剖取兩側(cè)肌肉、肝臟、組織，從頭后部剖開取腦組織。用生理鹽水潤洗并用濾紙片吸干水分，血清、肌肉、肝臟和腦部組織置于-70 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 指標(biāo)檢測(cè)

血清皮質(zhì)醇濃度的測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法，試劑盒為美國R&D公司生產(chǎn)的海水魚皮質(zhì)醇ELISA試劑盒。血清葡萄糖和乳酸濃度采用分光光度法測(cè)定。

AChE活力采用膽堿巰基顯色劑法測(cè)定，酶活力單位(U/mg prot或U/mL)定義為：每毫克組織蛋白質(zhì)或每毫升血清在37 ℃保溫6 min，水解1 mol基質(zhì)為1個(gè)活力單位。超氧化物歧化酶(SOD)活力采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，酶活力單位(U/mg prot或U/mL)定義為：每毫克組織蛋白質(zhì)或每毫升血清在1 mL反應(yīng)液中超氧自由基抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為1個(gè)活力單位。過氧化氫酶(CAT)活力采用比色法測(cè)定，酶活力單位(U/mg prot或U/mL)定義為：每毫克組織蛋白質(zhì)或每毫升血清每秒鐘分解1 μmol H2O2的量為1個(gè)活力單位。上述酶活力采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，按說明書操作。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1)魚粉、豆粕和面粉的粗蛋白質(zhì)與粗脂肪含量(干物質(zhì)基礎(chǔ))分別為67%、10.0%，43%、1.9%，12%、1.6%。The contents of crude protein and crude fat (DM basis) in fish meal, soybean meal and wheat flour were 67% and 10.0%, 43% and 1.9%, 12% and 1.6%, respectively.

2)維生素預(yù)混料為每千克飼料提供Vitamin premix supplied the following per kg of diets：肌醇myo-inositol 400 mg，煙酸 nicotinic acid 150 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 44 mg，VB220 mg，VB612 mg，VK310 mg，VB110 mg，VA 7.3 mg，葉酸 folic acid 5 mg，生物素 biotin 1 mg，VD30.06 mg，VB120.02 mg，VC 400 mg，VE 500 mg。

3)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供Mineral premix supplied the following per kg of diets：KH2PO422 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 1.0 g，ZnSO4·7H2O 0.13 g，MnSO4·4H2O 52.8 mg，CuSO4·5H2O 12 mg，CoSO4·7H2O 2 mg，KI 2 mg。

4)依據(jù)飼料粗脂肪含量×總n-3長鏈多不飽和脂肪酸百分比計(jì)算。Calculated from dietary crude lipid content×Σn-3 LC-PUFA percentage.

表2 試驗(yàn)飼料脂肪酸組成(占總脂肪酸的百分比)

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用SPSS 19.0軟件對(duì)銀鯧各項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，運(yùn)用單因素方差分析和雙因素方差分析，先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，不滿足方差齊性時(shí)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行自然對(duì)數(shù)或平方根轉(zhuǎn)換，采用Duncan氏法對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較，P<0.05為存在顯著性差異。用t檢驗(yàn)檢測(cè)運(yùn)輸脅迫前后的變化，P<0.05為存在顯著性差異。用Excel 2007繪制圖表。

2 結(jié)果與分析

2.1 銀鯧血清皮質(zhì)醇濃度

4 h運(yùn)輸脅迫前后各組銀鯧血清皮質(zhì)醇濃度變化情況如圖1所示。運(yùn)輸脅迫前各組血清皮質(zhì)醇濃度差異不顯著(P>0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，各組血清皮質(zhì)醇濃度都有所升高，其中SO組上升顯著(P<0.05)，并且顯著高于SFO組(P<0.05)。血清皮質(zhì)醇濃度最高值出現(xiàn)在脅迫后SO組，為(20.45±3.31) ng/mL，最低值出現(xiàn)在脅迫前SO組，為(10.81±1.75) ng/mL。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)注不同大寫字母表示脅迫前各組間存在顯著差異(P<0.05)，不同小寫字母表示脅迫后各組間存在顯著差異(P<0.05)，*表示脅迫后與脅迫前存在顯著差異(P<0.05)。下圖同。

Date column with different capital letters indicated significant difference among groups before stress (P<0.05), with different small letters indicated significant difference among groups after stress (P<0.05), and with * indicated significant difference between before and after stress. The same as below.

圖1 運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧血清皮質(zhì)醇濃度的影響

Fig.1 Effects of transportation stress on serum COR concentration of silver pomfret (Pampusargenteus)

2.2 銀鯧血清葡萄糖濃度

4 h運(yùn)輸脅迫前后各組銀鯧血清葡萄糖濃度變化情況如圖2所示。運(yùn)輸脅迫前各組銀鯧血清葡萄糖濃度差異不顯著(P>0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后各組血清葡萄糖濃度都出現(xiàn)了上升，但脅迫前后差異不顯著(P>0.05)，各組間也不存在顯著差異(P>0.05)。血清葡萄糖濃度最高值出現(xiàn)在脅迫后SO組，為(3.37±0.44) mmol/L，最低值出現(xiàn)在脅迫前SFO組，為(2.53±0.42) mmol/L。

圖2 運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧血清葡萄糖濃度的影響

2.3 銀鯧血清乳酸濃度

4 h運(yùn)輸脅迫前后各組銀鯧血清乳酸濃度變化情況如圖3所示。運(yùn)輸脅迫前各組血清乳酸濃度差異不顯著(P>0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，各組乳酸濃度都出現(xiàn)顯著增加(P<0.05)，而各組間不存在顯著差異(P>0.05)。血清乳酸濃度最高值出現(xiàn)在脅迫后FO組，為(3.14±0.52) mmol/L，最低值出現(xiàn)在脅迫前SO組，為(1.18±0.54) mmol/L。

2.4 銀鯧血清、腦部AChE活力

4 h運(yùn)輸脅迫前后各組銀鯧血清AChE活力變化情況如圖4所示。脅迫前SFO組血清AChE活力顯著高于其他組(P<0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，F(xiàn)O、FSO和SFO組血清AChE活力出現(xiàn)了下降，其中FSO組下降顯著(P<0.05)；而SO組略有上升，但差異不顯著(P>0.05)；SFO和SO組顯著高于其他組(P<0.05)。血清AChE活力最高值出現(xiàn)在脅迫前SFO組，為(1.30±0.25) U/mL，最低值出現(xiàn)在脅迫后FSO組，為(0.66±0.10) U/mL。

4 h運(yùn)輸脅迫前后各組銀鯧腦部AChE活力變化情況如圖5所示。脅迫前FSO和SFO組腦部AChE活力顯著高于SO和FO組(P<0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，各組腦部AChE活力都出現(xiàn)了顯著下降(P<0.05)，下降后SFO組依然顯著高于FO組(P<0.05)。腦部AChE活力最高值出現(xiàn)在脅迫前SFO組，為(2.39±0.22) U/mg prot，最低值出現(xiàn)在脅迫后FO組，為(1.19±0.20) U/mg prot。

圖3 運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧血清乳酸濃度的影響

圖4 運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧血清AChE活力的影響

2.5 銀鯧血清、肝臟和肌肉SOD活力

4 h運(yùn)輸脅迫前后各組銀鯧血清SOD活力變化情況如圖6所示。脅迫前SO組血清SOD活力顯著低于其他組(P<0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，各組血清SOD活力都出現(xiàn)顯著增強(qiáng)(P<0.05)，F(xiàn)SO組顯著高于FO和SO組(P<0.05)。血清SOD活力最高值出現(xiàn)在脅迫后FSO組，為(78.1±5.7) U/mL，最低值出現(xiàn)在脅迫前SO組，為(29.8±6.6) U/mL。

圖5 運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧腦部AChE活力的影響

4 h運(yùn)輸脅迫前后各組銀鯧肝臟和肌肉SOD活力變化情況如圖7所示。脅迫前SFO組肌肉SOD活力顯著高于FO和SO組(P<0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，F(xiàn)O、FSO和SFO組肌肉SOD活力出現(xiàn)了下降，而SO組則有所上升，但變化均不顯著(P>0.05)；SFO和SO組顯著高于FO和FSO組(P<0.05)。肌肉SOD活力最高值出現(xiàn)在脅迫前SFO組，為(27.1±6.6) U/mg prot，最低值出現(xiàn)在脅迫前SO組，為(14.7±4.6) U/mg prot。脅迫前FO組肝臟SOD活力顯著高于其他組(P<0.05)，而FSO組顯著低于其他組(P<0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，除SFO組肝臟SOD活力有所上升外，其他組均顯著下降(P<0.05)；各組間差異不顯著(P>0.05)。肝臟SOD活力最高值出現(xiàn)在脅迫前FO組，為(166.1±24.2) U/mg prot，最低值出現(xiàn)在脅迫前SFO組，為(52.4±4.8) U/mg prot。

2.6 銀鯧血清、肝臟和肌肉CAT活力

4 h運(yùn)輸脅迫前后各組銀鯧血清CAT活力變化情況如圖8所示。脅迫前SFO組血清CAT活力顯著高于其他組(P<0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，各組CAT活力都有所增加，其中SO組變化顯著(P<0.05)；各組間差異不顯著(P>0.05)。血清CAT活力最高值出現(xiàn)在脅迫后SO組，為(1.93±0.19) U/mL，最低值出現(xiàn)在脅迫前FSO組，為(1.28±0.09) U/mL。

4 h運(yùn)輸脅迫前后各組銀鯧肝臟和肌肉CAT活力變化情況如圖9所示。脅迫前SFO組肌肉CAT活力顯著高于其他組(P<0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，除SFO組肌肉CAT活力略有下降外，其他組都出現(xiàn)了增強(qiáng)，其中SO組變化顯著(P<0.05)；SO組顯著高于FO和FSO組(P<0.05)。肌肉CAT活力最高值出現(xiàn)在脅迫后SO組，為(0.97±0.18) U/mg prot，最低值出現(xiàn)在脅迫前SO組，為(0.45±0.08) U/mg prot。脅迫前FO組肝臟CAT活力顯著高于其他組(P<0.05)。4 h運(yùn)輸脅迫后，F(xiàn)O和FSO組肝臟CAT活力出現(xiàn)下降，SFO和SO組則出現(xiàn)上升，其中SO組變化顯著(P<0.05)；FSO組顯著低于FO和SO組(P<0.05)。肝臟CAT活力最高值出現(xiàn)在脅迫后SO組，為(1.73±0.24) U/mg prot，最低值出現(xiàn)在脅迫后SO組，為(0.40±0.09) U/mg prot。

圖6 運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧血清SOD活力的影響

圖7 運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧肌肉和肝臟SOD活力的影響

圖8 運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧血清CAT活力的影響

2.7 油脂替代與運(yùn)輸脅迫的交互作用

油脂替代與運(yùn)輸脅迫對(duì)各指標(biāo)的交互作用如表3所示。油脂替代、運(yùn)輸脅迫以及兩者交互作用對(duì)肝臟SOD和肌肉、肝臟CAT活力有顯著影響(P<0.05)。油脂替代和運(yùn)輸脅迫對(duì)血清皮質(zhì)醇、乳酸濃度，SOD、CAT活力以及腦部AChE活力都有顯著影響(P<0.05)，但兩者交互作用對(duì)上述指標(biāo)的影響不顯著(P>0.05)。油脂替代對(duì)血清AChE、肌肉SOD活力的影響顯著(P<0.05)，運(yùn)輸脅迫對(duì)血清葡萄糖濃度的影響顯著(P<0.05)。

3 討 論

魚體體質(zhì)的差異會(huì)影響其在運(yùn)輸過程中的應(yīng)激程度以及運(yùn)輸后的成活率。運(yùn)輸期間的水質(zhì)變化如溶氧濃度降低、氨氮濃度增高、pH變化，會(huì)使魚體代謝需氧量和體表面黏液分泌量增加，也會(huì)對(duì)魚機(jī)體和器官造成氧化壓力，影響基因的表達(dá)和酶的活力[15-16]。另外，運(yùn)輸后銀鯧存活個(gè)體經(jīng)常出現(xiàn)頭部、鰓部、鰭條和眼睛炎癥，也常有打轉(zhuǎn)、打漂等運(yùn)動(dòng)失調(diào)的狀況存在。運(yùn)輸后恢復(fù)情況，不同銀鯧個(gè)體也存在較大差異，有些個(gè)體會(huì)留下終生創(chuàng)傷，如失明、鰭條缺損等。本試驗(yàn)中，4 h運(yùn)輸脅迫后FO組死亡2條，F(xiàn)SO組和SFO組死亡各1條，SO組死亡3條，各組運(yùn)輸死亡率差別不大。

圖9 運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧肌肉和肝臟CAT活力的影響

項(xiàng)目Items油脂替代OilsubstitutionF值F-valueP值P-value運(yùn)輸脅迫TransportationstressF值F-valueP值P-value交互作用InteractionF值F-valueP值P-value血清皮質(zhì)醇SerumCOR3.2660.049*12.0710.003*2.8120.073血清葡萄糖SerumGLU1.0260.4075.5970.031*0.3370.799血清乳酸SerumLD3.9900.027*63.852<0.001*0.5120.680血清乙酰膽堿酯酶SerumAChE20.072<0.001*0.7690.3942.9840.062腦部乙酰膽堿酯酶BrainAChE10.542<0.001*106.279<0.001*0.9160.455血清超氧化物歧化酶SerumSOD12.529<0.001*104.134<0.001*1.5290.245肌肉超氧化物歧化酶MuscleSOD5.8630.007*0.0440.8362.8720.069肝臟超氧化物歧化酶LiverSOD23.602<0.001*22.124<0.001*9.3160.001*血清過氧化氫酶SerumCAT3.9350.028*13.1050.002*1.9460.163肌肉過氧化氫酶MuscleCAT11.251<0.001*10.1630.006*5.7230.007*肝臟過氧化氫酶LiverCAT5.8660.007*5.5600.031*5.7100.007*

*表示影響顯著。

* indicated significant effect.

3.1 運(yùn)輸脅迫對(duì)各組銀鯧應(yīng)激指標(biāo)的影響

魚類受外界脅迫刺激后，其下丘腦-垂體-腎間組織軸(HPI)會(huì)迅速釋放促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)，以促進(jìn)頭腎細(xì)胞皮質(zhì)醇激素的合成與釋放[17]。杜浩等[18]研究得出，血清皮質(zhì)醇濃度的增加會(huì)誘發(fā)魚體代謝速率加快，各組織對(duì)葡萄糖的利用率降低，并導(dǎo)致抗病、抗氧化及耐低氧能力下降。

在運(yùn)輸脅迫后，魚類體內(nèi)皮質(zhì)醇濃度普遍會(huì)顯著上升，例如：虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[19]、大黃魚(Larimichthyscrocea)[20]、革胡子鯰(Clariasgariepinus)[21]、歐洲鰻鱺(Anguillaanguilla)[22]和維多利亞野鯪(Labeovictorianus)[23]都在運(yùn)輸不同時(shí)間后出現(xiàn)血清皮質(zhì)醇濃度顯著上升的情況。而有些魚類反應(yīng)較強(qiáng)烈，在2 h運(yùn)輸后，長江刀鱭(Coilianasus)血清皮質(zhì)醇濃度升高2.5倍[24]，而美洲鰣(Alosasapidissima)血清皮質(zhì)醇濃度升高達(dá)20倍[17]，翹嘴鲌(Culteralburnus)全魚皮質(zhì)醇濃度升高2倍[25]。

葡萄糖作為機(jī)體的主要功能物質(zhì)，魚類血清葡萄糖濃度會(huì)隨應(yīng)激程度的不同而發(fā)生改變。Iversen等[26]研究表明，應(yīng)激反應(yīng)可導(dǎo)致魚類血清葡萄糖濃度明顯升高，出現(xiàn)高血糖癥，但維持高血清葡萄糖濃度有助于保障魚體經(jīng)受應(yīng)激脅迫時(shí)提供能量供給。乳酸主要是肌肉在供氧不足的情況下通過糖酵解產(chǎn)生的，水體溶氧濃度低、血液循環(huán)緩慢以及劇烈的物理運(yùn)動(dòng)都可導(dǎo)致乳酸濃度升高。

運(yùn)輸脅迫后，美洲鰣[17]、虹鱒[19]血清葡萄糖濃度顯著升高，大黃魚全魚乳酸濃度顯著增加[20]，而刀鱭血清葡萄糖濃度在2 h運(yùn)輸后升高2倍[24]。維多利亞野鯪在淡水、低鹽度(0～0.5)、高鹽度(8～10)運(yùn)輸環(huán)境下血清葡萄糖濃度均顯著上升[23]。運(yùn)輸脅迫后，歐洲鰻鱺血清葡萄糖濃度略有上升，而乳酸濃度則顯著下降，據(jù)Boerrigter等[22]解釋，乳酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸可提供能量，并可在鰓、腎臟和肝臟中作為能量來源。

彭士明等[27]對(duì)銀鯧運(yùn)輸?shù)南嚓P(guān)研究(運(yùn)輸時(shí)間與密度以及飼料維生素C水平的關(guān)系)顯示：4 h運(yùn)輸脅迫后，銀鯧血清皮質(zhì)醇、葡萄糖和乳酸濃度升高最為顯著，且高密度組濃度最高，而飼料添加維生素C后，上述3各指標(biāo)的上升幅度顯著小于對(duì)照組[28]。本試驗(yàn)中，4 h運(yùn)輸脅迫后各組血清皮質(zhì)醇濃度都有所增加，與之前其他魚類運(yùn)輸脅迫的研究結(jié)果相似，其中SO組變化顯著，升高了1.89倍，說明SO組的應(yīng)激反應(yīng)比較劇烈，而SFO組變化程度最小，應(yīng)激反應(yīng)相對(duì)較弱；而各組血清葡萄糖濃度都略有增加，其中SFO組增加最少。從雙因素方差分析結(jié)果來看，運(yùn)輸脅迫對(duì)血清皮質(zhì)醇、葡萄糖和乳酸濃度都有顯著影響，而油脂替代僅對(duì)血清皮質(zhì)醇和乳酸濃度有顯著影響，可以推測(cè)血清葡萄糖濃度的升高是由于運(yùn)輸脅迫所造成的，而油脂替代會(huì)對(duì)魚體皮質(zhì)醇的調(diào)節(jié)以及乳酸代謝產(chǎn)生影響，從而造成應(yīng)激性能的差異。其中血清，乳酸濃度的升高在3個(gè)指標(biāo)中表現(xiàn)最為顯著，F(xiàn)O組升高2.06倍、FSO組升高1.79倍、SFO組升高1.76、SO組升高2.11倍，這可能是由于銀鯧在運(yùn)輸過程中出現(xiàn)了過度興奮和劇烈的物理運(yùn)動(dòng)，或是有氧代謝失調(diào)導(dǎo)致。

植物油替代魚油會(huì)對(duì)魚類的消化道產(chǎn)生不良影響，如腸壁變薄、黏膜褶皺變少，最終會(huì)影響脂肪酸的吸收，從而影響魚類抗應(yīng)激能力[29]。本試驗(yàn)飼料的高不飽和脂肪酸(HUFA)組成中，雖然豆油替代魚油后n-3/n-6 PUFA逐漸下降，但花生四烯酸(ARA)和二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)含量也是隨之逐漸下降，而亞麻酸和亞油酸含量則出現(xiàn)上升，這種組分的變化應(yīng)當(dāng)對(duì)海水魚類銀鯧的脂類消化吸收造成了影響。從血清葡萄糖和乳酸濃度的變化看，SFO和FSO組對(duì)運(yùn)輸?shù)膽?yīng)激程度較低，可能是幼魚飼料中魚粉含量較高，且魚油中的ARA、EPA和DHA基本能滿足其營養(yǎng)需求，提高亞麻酸和亞油酸含量反而有助于抗應(yīng)激。

AChE主要分布于神經(jīng)組織、紅細(xì)胞和肌肉中，作為神經(jīng)遞質(zhì)，AChE的活力變化會(huì)對(duì)魚類運(yùn)動(dòng)和協(xié)調(diào)能力產(chǎn)生較大影響，并進(jìn)一步作用于能量合成和代謝通路[30-31]。本試驗(yàn)中，各組銀鯧腦部AChE活力都出現(xiàn)顯著減弱，而SFO組在脅迫前后的各組中均有最高活力，說明銀鯧在運(yùn)輸時(shí)都處于興奮的狀態(tài)，SFO組的興奮程度在各組中相對(duì)較低，血清AChE活力則是FSO組下降程度最顯著，可推測(cè)FSO組興奮程度最高。雙因素方差分析顯示油脂替代對(duì)血清和腦部AChE活力都有顯著影響，說明脂肪酸的組成例如EPA、DHA含量對(duì)魚類腦部敏感性會(huì)產(chǎn)生一定影響。

3.2 運(yùn)輸脅迫對(duì)各組銀鯧抗氧化性能的影響

魚類抗氧化防御系統(tǒng)分為酶促與非酶促兩大部分[32]。SOD和CAT是2個(gè)重要的抗氧化酶，SOD與CAT能有效清除體內(nèi)的超氧陰離子自由基(O2-·)、游離氧(O)、羥自由基(·OH)和過氧化氫(H2O2)等活性氧物質(zhì)[33-34]。而LC-PUFA又是非酶促系統(tǒng)重要的抗氧化活性物質(zhì)。

抗氧化功能是魚類抗應(yīng)激能力的重要組成部分，研究顯示運(yùn)輸脅迫對(duì)魚類抗氧化功能有顯著影響。例如，運(yùn)輸脅迫后，日本黃姑魚(Nibeajaponica)肝臟SOD和CAT活力顯著升高[35]；刀鱭肝臟CAT活力顯著降低[36]；紅鰭扯旗魚(Hyphessobryconcallistus)肝臟SOD活力和總抗氧化能力增強(qiáng)[13]；銀鯰(Rhamdiaquelen)肝臟CAT活力顯著下降，而SOD活力變化不顯著[15]。

本試驗(yàn)中，4 h運(yùn)輸脅迫后，各組血清SOD活力均顯著增強(qiáng)，其中SO組上升幅度最大，上升1.91倍，雖然血清CAT活力各組都有所增強(qiáng)，但只有SO組變化顯著。肝臟和肌肉CAT活力僅SO組顯著增強(qiáng)。4 h運(yùn)輸脅迫后，SFO組肝臟SOD和CAT活力變化顯示其對(duì)應(yīng)激的反應(yīng)較迅速。SO組肝臟CAT和SOD活力變化極為顯著，說明SO組的抗氧化反應(yīng)十分劇烈。

肝臟是魚類對(duì)脂類和有害物質(zhì)吸收、代謝的主要器官，應(yīng)激會(huì)影響肝臟的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)功能[37]。從雙因素方差分析看，運(yùn)輸脅迫、油脂替代以及兩者交互作用對(duì)肝臟SOD和CAT活力都有顯著影響。飼料中n-3 LC-PUFA含量過高，導(dǎo)致在體內(nèi)大量聚集，必然會(huì)代謝更多脂類氧化副產(chǎn)物，需要肝臟提高抗氧功能予以消除，同時(shí)消耗更多能量與營養(yǎng)儲(chǔ)備以維持氧化平衡。作為海水魚類，銀鯧對(duì)n-3 LC-PUFA的需求量較高，其含量過低會(huì)抑制抗氧化酶的活力，從而影響機(jī)體功能。運(yùn)輸脅迫前FO組肝臟SOD和CAT活力均最高，說明其體內(nèi)氧化和抗氧化的平衡值較高，而4 h運(yùn)輸脅迫后FO組肝臟SOD活力與其他組差異不顯著，CAT活力與SO組類似，可能是原來運(yùn)用維持平衡的抗氧化酶被氧化應(yīng)激所消耗，說明飼料n-3 LC-PUFA含量偏高同樣不利于銀鯧機(jī)體健康。

本試驗(yàn)中，各組銀鯧終末體重如下：FO組，(37.8±3.8) g；FSO組，(39.9±4.0) g；SFO組，(34.6±3.7) g；SO組，(26.6±3.0) g。從上面數(shù)據(jù)可知SO組體重增長明顯低于其他組，可以看出豆油過多替代魚油會(huì)對(duì)銀鯧生長造成負(fù)面影響。

4 結(jié) 論

雖然4 h運(yùn)輸脅迫后各組死亡率差別不大，但結(jié)合應(yīng)激和抗氧化指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)SO組銀鯧在運(yùn)輸后機(jī)體健康情況較差，應(yīng)激反應(yīng)較為劇烈，說明投喂過量添加大豆油的飼料不利于銀鯧的機(jī)體健康和長途運(yùn)輸，而在保持魚油含量的前提下適當(dāng)添加大豆油的效果較好。

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*Corresponding author, associate professor, E-mail: shiming.peng@163.com

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Substitution of Dietary Fish Oil with Soybean Oil Influences Stress Indexes and Tissue Antioxidant Function of Silver Pomfret (Pampus argenteus) before and after Transportation

ZHANG Chenjie GAO Quanxin PENG Shiming*SHI Zhaohong WANG Jiangang

(EastChinaSeaFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisherySciences,Shanghai200090,China)

Through detecting the changes of serum cortisol, glucose, lactate concentrations and tissue antioxidant indexes, the influences of substitution of dietary fish oil with soybean oil on stress indexes and tissue antioxidant function of silver pomfret (Pampusargenteus) before and after Transportation were studied. Four experimental diets were designed, which used 100% fish oil (FO group), 70% fish oil+30% soybean oil (FSO group), 30% fish oil+70% soybean oil (SFO group) and 100% soybean oil (SO) as the fat source, respectively. The silver pomfret with the average body weight of (17.2±6.7) g had been fed with these experimental diets for 60 days, and then they were being transported for 4 h. Each diet fed 3 tanks (replicates) with 50 fish per tank. The results showed as follows: after 4 h transportation stress, serum cortisol concentration of each group was increased, and the change of SO group was significant that up-regulated to 1.89 folds (P<0.05), but the change of SFO group was lighter than other groups; serum glucose concentration of each group increased slightly, the change of each group was not significant (P>0.05), and the SFO group was the least one; then, serum lactate concentration of each group increased significantly (P<0.05), especially SO group. Brain acetyl-cholinesterase (AChE) activity of each group decreased significantly, and SFO was the highest group both before and after transportation; serum superoxide dismutase (SOD) activity of every group increased significantly (P<0.05), especially SO group; serum catalase (CAT) activity increased in all groups, but only SO group increased significantly (P<0.05); CAT activity in liver and muscle of SO group increased significantly (P<0.05), and the changes of other groups were not significant (P>0.05); serum SOD and CAT activities of SO group increased significantly (P<0.05). The results indicate that the health of silver pomfret in group SO is worse than other groups after transporting, and its stress response is more significant. It is suggested that the substitution of dietary fish oil with too much soybean oil is disadvantageous to transportation and health of silver pomfret. And it is important to keep the proper proportion of fish oil and soybean oil in the diet.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(1)：354-364]

silver pomfret; transportation; fatty acid; stress; antioxidant function

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.01.041

2016-07-15

上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(滬農(nóng)科攻字2013-2-1)；中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(東2014Z02)

張晨捷(1989—),男，上海人，研究實(shí)習(xí)員，碩士，從事海水魚類生理、繁殖研究。E-mail: zhangchenjie1989@sina.com

*通信作者：彭士明，副研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail: shiming.peng@163.com

S963

A

1006-267X(2017)01-0354-11