劉桂芳

HPV E6E7蛋白和宮頸癌的關(guān)系探討

劉桂芳

目的 探究人乳頭瘤病毒（HPV）E6E7蛋白與宮頸癌之間的關(guān)系。方法 選取本院2015年11月—2016年11月的70例宮頸癌患者作為研究對象，對其應(yīng)用PCR技術(shù)進(jìn)行檢測，患者的檢查結(jié)果中均含有E6E7基因，在此過程中應(yīng)用SP檢測法，得出HPV E6E7的表達(dá)情況。將患者分為癌癥組、CIN組以及炎癥組，并在這一過程中記錄其HPV E6E7情況。結(jié)果 HPV E6與是否轉(zhuǎn)移有關(guān)，HPV E7與是否轉(zhuǎn)移有關(guān)。結(jié)論 HPV E6E7基因與宮頸疾病癌變的關(guān)系十分密切。

HPV；E6E7蛋白；宮頸癌；關(guān)系

隨著當(dāng)前時(shí)代的不斷發(fā)展，分子生物學(xué)以及流行病學(xué)也進(jìn)一步有所發(fā)展[1-2]，研究顯示，人乳頭瘤病毒與宮頸疾病密切相關(guān)，尤其是與人乳頭瘤病毒（HPV）關(guān)系密切，其中原癌蛋白（E6E7）在腫瘤發(fā)生的過程中起到十分重要的控制作用[3]。本文結(jié)合本院2015年11月—2016年11月的70例宮頸癌患者作為研究對象，采用SP定量觀察法對其進(jìn)行了檢測，并進(jìn)行進(jìn)一步的探究，以得出HPV E6E7是否與宮頸癌密切相關(guān)的結(jié)論，探究過程如下。

1 資料與方法

1.1 資料

選取本院2015年11月—2016年11月的70例宮頸癌患者作為研究對象，患者年齡27～75歲，平均年齡為（55.23±3.41）歲，病程持續(xù)時(shí)間為3周～2年，平均病程為（1.02±0.34）年。分別對患者的病變部位進(jìn)行病理提取，從而根據(jù)結(jié)果對于患者的情況進(jìn)行分類。將其分組為炎癥組、CIN組以及癌癥組，炎癥組患者27例，CIN組患者23例，癌癥組患者20例。炎癥組年齡28～73歲，平均年齡為（53.43±3.53）歲，CIN組患者年齡27～71歲，平均年齡為（54.34±3.84）歲，癌癥組年齡29～75歲，平均年齡為（56.34±3.22）歲，三組患者的年齡等基本資料對比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05，具有可比性。

1.2 患者納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）通過檢查確定其患有宮頸癌；（2）患者其他器官未患有癌癥；（3）不存在腦部以及精神疾病；（4）要求患者在治療過程中均與醫(yī)生積極配合，謹(jǐn)遵醫(yī)囑；（5）家屬知情，并且簽署了相關(guān)的知情書。滿足以上條件就可以對于患者的檔案進(jìn)行建立，并交由相關(guān)的部門對于檔案進(jìn)行保管。

1.3 方法

采用的試劑包括高保真Taq DNA聚合酶（供應(yīng)商：invitrogen，貨號：C11304-011，029，102），核酸限制性內(nèi)切酶（廠家：福建華燦制藥有限公司，貨號：ER192）以及T4 DNA連接酶（廠家：百奧萊博，貨號：YT029）。儀器采用PCR擴(kuò)增儀以及核酸電泳儀，菌種以及質(zhì)粒采用的受體菌均由美國制造。首先對于PCR產(chǎn)物電泳以及序列進(jìn)行鑒定，PCR 30次循環(huán)后首先利用1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，可以發(fā)現(xiàn)清晰的擴(kuò)增帶，這一過程中E6以及E7的擴(kuò)增速度保持一致，大小以及標(biāo)準(zhǔn)均一致，說明E6、E7的基因序列相一致。

通過收集三組患者的HPV E6E7細(xì)胞，并通過切片染色技術(shù)，對三組患者的HPV E6E7進(jìn)行觀察，若細(xì)胞核周圍出現(xiàn)黃色顆粒則為陽性，在這一過程中選取切片的5個(gè)視野，陽性的細(xì)胞數(shù)少于5%，則說明呈陰性。從宮頸病變活檢組織中提出的DNA作為模板，也對于HPV E6E7的擴(kuò)增情況進(jìn)行觀察，并且將擴(kuò)增條件設(shè)為94℃以及7 min，重復(fù)多次循環(huán)，不斷對于擴(kuò)增數(shù)據(jù)進(jìn)行對比，從而進(jìn)一步得出準(zhǔn)確的測定結(jié)果以方便對比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 三組E6、E7的基因表達(dá)

炎癥組、CIN組以及癌癥組的HPV E7均為65%，75%以及70%，P＞0.05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對于HPV E6進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn)數(shù)值分別為5%，30%以及45%，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中E6單倍在癌癥組中陽性染色情況顯著，占80%以上。

2.2 三組病理特征

HPV E6蛋白與臨床分期以及腫瘤發(fā)展程度進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)也同樣滿足P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明存在相關(guān)性，但對于HPV E7進(jìn)行對比則發(fā)現(xiàn)E7蛋白直接影響到患者的臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，滿足P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與腫瘤分化程度密切相關(guān)。

3 討論

早期的宮頸癌假說提出宮頸病變基本是由HPV感染所致[4]。并且有相關(guān)的研究表明[5]，很多患者HPV E6E7總陽性率較高，高達(dá)60%以上，由此可見HPV與宮頸病變密切相關(guān)，并且對于E6、E7的不同進(jìn)行了探究。E7蛋白能夠與PRB相結(jié)合達(dá)到致癌的效果，E6則通過與P53蛋白進(jìn)行結(jié)合，而對于使得PRB的細(xì)胞調(diào)節(jié)作用喪失，造成細(xì)胞生存時(shí)間長，一些細(xì)胞在這一過程中就會轉(zhuǎn)為惡性，從而危害人體。并且以上70例患者中E6、E7蛋白與主細(xì)胞的DNA親和度很高，對DNA的轉(zhuǎn)錄以及表達(dá)產(chǎn)生較為嚴(yán)重的影響，且E6、E7蛋白能夠使得細(xì)胞由良性轉(zhuǎn)為惡性。

資料顯示[6-7]，將HPV E6E7用于小白鼠的皮基底細(xì)胞，使得E6、E7原蛋白得以表達(dá)，結(jié)果小白鼠均患有了皮膚腫瘤，且結(jié)果為惡性腫瘤居多[8]。在這一過程中若只對于E7進(jìn)行轉(zhuǎn)入，則腫瘤為良性居多，只對于E6進(jìn)行轉(zhuǎn)入，則惡性腫瘤居多，由此得出結(jié)論E7與早期腫瘤有關(guān)，E6則多與晚期以及惡性腫瘤相關(guān)。

本文探究了E6E7的基因表達(dá)，可知三組對比E7基因表達(dá)過程中，P＞0.05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；E6基因表達(dá)過程對比，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此可見，惡性腫瘤主要為E6蛋白進(jìn)行控制，而E7蛋白則只是在腫瘤發(fā)展前期對其起到作用。由此可見，HPV E6E7與宮頸癌有著十分密切的關(guān)系，在今后的過程中可以對于E6、E7蛋白情況進(jìn)行廣泛的應(yīng)用，從而幫助這一疾病的判斷以及治療，提升對于該疾病的綜合治療效果。

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[4] 紀(jì)嬋. 人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染與宮頸癌發(fā)病關(guān)系[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，37（26）：3306-3307.

[5] 張嬋，孫媛，吳茉莉. HPV病毒感染與宮頸炎癥及宮頸癌之間的關(guān)系及意義分析[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，2015，27（8）：968-970.

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Study on the Relationship Between HPV E6E7 Protein and Cervical Cancer

LIU Guifang Laboratory Department, Liaoyuan Maternal and Infant'sHospital, Liaoyuan Jilin 136200, China

Objective To investigate the relationship between human papillomavirus (HPV) E6E7 protein and cervical cancer. Methods 70 cases of cervical cancer from November 2015 to November 2016 in our hospital were selected as the subjects and detected by PCR technology, all contained E6 and E7 genes. In this process, SP detection method was applied, expression of HPV and E6E7 was obtained. Patients were divided into cancer group, CIN group and inf l ammatory group, and their HPV and E6E7 were recorded during the process. Results HPV E6 was related to metastasis or not, and HPV E7 was related to metastasis. Conclusion The HPV and E6E7 genes are closely related to the canceration of cervical diseases.

HPV; E6E7 protein; cervical cancer; relationship

R737

A

1674-9316（2017）19-0070-02

10.3969/j.issn.1674-9316.2017.19.035

遼源市婦嬰醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林 遼源136200