王 冉

華北制藥集團河北華民藥業(yè)有限責任公司 河北省石家莊市 052165

HPLC法測定頭孢噻肟鈉中2-巰基苯并噻唑（M）殘留量

王 冉

華北制藥集團河北華民藥業(yè)有限責任公司 河北省石家莊市 052165

目的：建立HPLC法測定頭孢噻肟鈉中2-巰基苯并噻唑（M）殘留量。方法：采用高效液相色譜法，樣品經(jīng)萃取處理后測定。色譜柱為依利特BDS C18(4.6mm×150mm，5.0μm);流動相為pH6.25磷酸鹽緩沖液-甲醇(60：40）;檢測波長為315nm，柱溫為25℃。萃取劑為三氯甲烷。結(jié)果：M的質(zhì)量濃度在0.5μg/ml-7.5μg/ml范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9998，n=7);平均回收率為107%（n=9)。結(jié)論：該方法快速、靈敏，結(jié)果準確可靠，可用于頭孢噻肟鈉中M的檢測。

HPLC；頭孢噻肟

頭孢噻肟為第三代頭孢菌素，抗菌譜廣，臨床上主要用于各種敏感菌的感染。我公司在生產(chǎn)頭孢噻肟鈉的過程中使用AE活性酯與7-ACA反應(yīng)，M為以氨噻肟酸和二硫化二苯并噻唑為起始原料生產(chǎn)AE活性酯的副產(chǎn)物，可能會在頭孢噻肟鈉里殘留。M為基因毒性雜質(zhì)，根據(jù)EMEA人用藥品委員會（CHMP）關(guān)于基因毒性雜質(zhì)的限度指南規(guī)定及頭孢噻肟鈉最大日劑量可以計算得出，M每日允許攝入量為5μg/ g。測定M的方法有高效液相色譜法。如果采取直接進樣法，需要配備靈敏度更高的質(zhì)譜檢測器才能對其進行定量檢測。本文通過對樣品中的M進行萃取法富集，然后采用HPLC（UV檢測器）進行定量測定，建立了頭孢噻肟鈉中的M殘留定量檢測方法。

圖1：M對照品

1 試劑

頭孢噻肟鈉，華北制藥河北華民藥業(yè)有限責任公司提供，批號為C2081510044、C2081510045、 C2081510046；M，分析純，阿拉丁，批號為F1206015，含量98.1%；甲醇，色譜純，上海星可生化，批號為021250801。

2 方法與結(jié)果

（1）色譜條件，色譜柱。依利特BDS C18(4.6mm×150mm，5.0μm)；柱溫25℃；檢測器波長315nm，

流速1.2ml/min。

（2） 對照品溶液制備。精密稱取M約25mg，置100ml容量瓶中，加三氯甲烷使溶解并定量稀釋至刻度。精密吸取1.0ml于50ml容量瓶中，用流動相定量稀釋成5μg/ml M對照品溶液。

（3） 樣品溶液制備。精密稱取頭孢噻肟鈉供試品約2.0g，精密加入10.0ml純化水使溶解，精密加入三氯甲烷2.0ml，劇烈振搖1分鐘，靜置，取下層溶液，以孔徑0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

（4）專屬性測試，經(jīng)測試，空白溶液對主峰測定無干擾。對照品溶液中，只有M峰，滿足M峰與相鄰雜質(zhì)峰間的分離度>1.5的要求。供試品溶液中，M峰與相鄰峰間的分離度為13.4，滿足M峰與相鄰雜質(zhì)峰間的分離度R>1.5的要求。

（5） 檢測限和定量限。當信噪比（S/ N）為3:1時，M的濃度為0.014μg/ml，即為檢測限；當信噪比（S/N）為10:1時，M的濃度為0.036μg/ml，即為定量限。

（6）重復性。按照2.3項下操作，平行制備6組樣品溶液，經(jīng)測試，M結(jié)果平均值為1.69334ppm，RSD為1.3%。

（7）中間精密度按照色譜條件，采用不同人員不同時間進行樣品測定，各組樣品溶液M含量測定值的平均值為1.55135ppm，RSD為8.2%。

（5）樣品中M的殘留量測定。分別稱取三批頭孢噻肟鈉樣品2.0g按照2.3項下操作，進樣分析。結(jié)果見表1。

表1：樣品檢測結(jié)果

3 討論

（1）本實驗建立了HPLC（紫外檢測器）檢測頭孢噻肟鈉中M殘留量的方法，以外標法進行計算，該方法具有檢測限低(ppm級)，準確度及精密度高，樣品檢測時間短（10min）的優(yōu)勢。

（2） 因三氯甲烷易揮發(fā)，樣品溶液需要臨用新制并密封保存，否則會導致檢測結(jié)果偏高。

（3） 供試品進行萃取時注意一定要振搖1min，否則萃取不完全，會使檢測結(jié)果偏低。

[1]毛樹祿,呂培其,張元金,李小婭,陳敬華.高效液相色譜法測定橡膠制品中2-巰基苯并噻唑[J].理化檢驗(化學分冊),2014(10):1242-1244.

王冉，女，現(xiàn)供職于華北制藥集團河北華民藥業(yè)有限責任公司，從事藥品檢測方面的研究。