那 金，王 瑤，郭尚旭，趙 丹

（1黑龍江大學生命科學學院微生物省高校重點實驗室，哈爾濱150080；2黑龍江大學農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)教育部工程研究中心，哈爾濱150500）

異源表達細菌β-甘露聚糖酶研究進展

那 金1,2，王 瑤1,2，郭尚旭1,2，趙 丹1,2

（1黑龍江大學生命科學學院微生物省高校重點實驗室，哈爾濱150080；2黑龍江大學農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)教育部工程研究中心，哈爾濱150500）

甘露聚糖酶是一類水解甘露聚糖的關(guān)鍵酶，廣泛存在于動植物和微生物中，細菌來源尤為廣泛。為了更好地滿足工業(yè)生產(chǎn)的需求，異源表達細菌來源的甘露聚糖酶基因，以獲得性質(zhì)優(yōu)良的甘露聚糖酶。對甘露聚糖酶的來源和酶學性質(zhì)進行了概述，歸納了細菌甘露聚糖酶的異源表達在提高酶活、擴大pH值作用范圍、改善安全性等方面的作用，包括對埃希氏大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及畢赤酵母進行異源表達等。利用微生物資源拓寬甘露聚糖酶的應用領(lǐng)域，使用微生物技術(shù)提高產(chǎn)酶量滿足工業(yè)需求，并為甘露聚糖酶定向進化和改造奠定基礎(chǔ)。

細菌；甘露聚糖酶；分子生物學；異源表達；應用

0 引言

甘露聚糖是一類自然界中儲量非常豐富的半纖維素多糖[1]，在造紙、紡織、化妝品等行業(yè)都有應用[2]。甘露聚糖粘度高、水解困難，難以被動物和人體直接利用[3]。β-甘露聚糖酶(EC3.2.1.78，β-mannanse，以下簡稱甘露聚糖酶)是能夠隨機水解任意β-1,4-糖苷鍵的內(nèi)切水解酶[4]，廣泛存在于植物、動物和微生物中[5]。許多已發(fā)芽的植物種子如蘆筍、魔芋以及番茄果實和種子中都含有甘露聚糖酶[6]。動物源的種類較少，且大多數(shù)屬于軟體動物，如皺紋盤鮑(Haliotis discus hannai)、濱螺(Littorina brevicula)、貽貝(Mytilus Edulis)等[7]。相比而言，微生物來源的甘露聚糖酶具有活性高、成本低、提取方便以及作用條件寬泛等特點，已在工業(yè)生產(chǎn)和理論研究中得到了廣泛應用，如飼料、食品、醫(yī)藥、石油開采以及尚未開發(fā)的生物能源等領(lǐng)域[8]。

微生物發(fā)酵產(chǎn)甘露聚糖酶往往受初始酶活低，菌株生物安全性無保障等限制，難以大規(guī)模工廠化生產(chǎn)。隨著基因和蛋白質(zhì)工程技術(shù)的廣泛運用，甘露聚糖酶的研究開始轉(zhuǎn)向產(chǎn)酶基因的克隆和異源表達等方面。國內(nèi)外對異源甘露聚糖酶表達的研究主要集中在從環(huán)境中對產(chǎn)酶菌株進行誘變選育[9]，并將不同微生物的甘露聚糖酶基因克隆在埃希氏大腸桿菌(Escherichia coli)[10-11]、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)[12]及畢赤酵母(Pichia pastoris)[13]等不同微生物中表達。本研究將對細菌甘露聚糖酶的來源、性質(zhì)、異源表達等方面的研究進行綜述。

1 甘露聚糖酶來源及酶學性質(zhì)

1.1 來源

甘露聚糖酶作為一類重要的半纖維素酶(Hemicellulase)，植物種子、動物以及各種微生物中都有存在[14-15]，其中甘露聚糖酶的微生物源種類最為豐富。初步統(tǒng)計已發(fā)現(xiàn)100余種產(chǎn)酶微生物，包括細菌、真菌和放線菌等[16-17]。其中真菌主要是酵母菌(Saccharomycetessp.)、青霉菌(Penicilliumsp.)、曲霉菌(Aspergillussp.)和木霉菌屬(Trichodermasp.)等，而放線菌以鏈霉菌(Streptomycetesp.)為主[14]。細菌中研究較多的是弧菌(Vibriosp.)、假單胞菌屬(Pseudomonassp.)等，研究最多的是Bacillussp.，如嗜堿芽胞桿菌(B.alkalophilic)，地衣芽胞桿菌(B.licheniformis)等[18]。大多數(shù)細菌來源的甘露聚糖酶都是胞外酶，酶活力高，更容易提取[19]，已然成為國內(nèi)外眾多研究者的主要研究對象。

1.2 最適反應pH值和溫度

不同微生物所產(chǎn)的甘露聚糖酶的分子質(zhì)量、最適反應pH值、最適反應溫度、酶動力學常數(shù)、底物專一性等都有一定的差異。甘露聚糖酶的分子質(zhì)量小的只有22 kDa，大的可以達到162 kDa，相差十分懸殊，但大部分集中在30～55 kDa之間[20]。不同微生物來源的甘露聚糖酶作用pH值和溫度也不盡相同，真菌來源的甘露聚糖酶的作用范圍偏酸，一般在pH 4.0～5.5之間，最適反應溫度一般在55℃～75℃。Katrolia等[21]對來自Chaetomiumsp.的甘露聚糖酶進行研究，結(jié)果表明，該酶的最適pH 5.0，最適反應溫度為65℃。

細菌甘露聚糖酶中研究最多的是Bacillussp.，除B.alkalophilic高至pH 9.0以上之外，最適反應大多在pH 5.5～7.0。最適反應溫度一般為45℃～70℃。李云程等[22]研究的Bacillussp.B555，最適反應pH 7.0，最適反應溫度為50℃～55℃。Sudip等[23]從傳統(tǒng)韓國食品泡菜分離和鑒定一株產(chǎn)甘露聚糖酶的Bacillussp.CSB39，最適反應pH 7.5，最適反應溫度為70℃。與真菌來源的甘露聚糖酶相比，細菌來源的甘露聚糖酶最適作用pH值可以由弱酸到堿性，作用溫度范圍更加寬泛，甘露聚糖酶的性質(zhì)更多元化，應用范疇更廣泛。

2 甘露聚糖酶基因的異源表達

2.1 異源表達的意義

大多數(shù)野生型菌株來源的甘露聚糖酶自身穩(wěn)定性和催化活性較差、底物親和力弱、Km值高，且產(chǎn)酶菌株生物安全性無保障，工業(yè)化應用具有一定的局限性[24]。異源表達的意義在于克服以上限制，從而獲得作用寬泛，生產(chǎn)成本低，安全性高的甘露聚糖酶[25]。

Gyeong等[26]的研究表明，異源甘露聚糖酶與野生型甘露聚糖酶性質(zhì)基本一致，包括最適pH值和溫度、熱穩(wěn)定性和動力學參數(shù)。異源表達還可以擴大甘露聚糖酶的pH值作用范圍。Zang等[27]研究的在E.coli中異源重組甘露聚糖酶的最佳約在pH 6.5，并且在pH 5～11的范圍穩(wěn)定。

馬鑫等[28]研究在E.coliBL21中表達的重組酶在25～95℃，在pH 3.0～9.6范圍內(nèi)均具有酶活性，在pH 3.0的酸性環(huán)境中依然具有1234 U/mg的比活力和寬泛的作用溫度區(qū)間，并且在酸性環(huán)境還擁有較高活力，可以應用于生產(chǎn)作用于動物胃中的飼料和藥品工業(yè)中。隨著甘露聚糖酶研究的推進，關(guān)于異源表達甘露聚糖酶的研究日新月異，重組甘露聚糖酶的作用條件的范圍也更加廣泛。

2.2 甘露聚糖酶異源表達系統(tǒng)

2.2.1 大腸桿菌表達系統(tǒng) 在過去十年中，E.coli已經(jīng)成功地用作安全菌株(generally regarded as safe，GRAS)[29]。陸續(xù)有一些細菌來源的甘露聚糖酶基因在E.coli系統(tǒng)中過表達，并獲得較高的酶活力。Kim等[30]克隆Cellulosimicrobiumsp.的甘露聚糖酶基因(1272 bp)并在E.coli中表達，在50℃和pH 6.0條件下對甘露聚糖表現(xiàn)出較高的催化活性。成莉鳳等[31]從歐文氏桿菌(Erwinia carotovora)中克隆甘露聚糖酶基因，轉(zhuǎn)化到E.coliBL21(DE3)中，重組甘露聚糖酶活性高達645.5 U/mL，是出發(fā)菌株的1.97倍。

Liu等[32]將B.subtilisYH12甘露聚糖酶基因在E.coliJM109中表達，在55℃和pH 6.5的條件下表現(xiàn)出很高的催化活性。唐嘉婕等[33]從短小芽孢桿菌(B.pumilus)Nsic-2中克隆得到甘露聚糖酶基因(manB)，在E.coliBL21(DE3)中成功地表達，得到甘露聚糖酶最高酶活為11021.3 U/mL。與原始菌株相比，重組甘露聚糖酶不僅酶活力高，并且在pH 6.0～9.0之間酶活相對穩(wěn)定，堿性條件下也表現(xiàn)出較高的穩(wěn)定性，因此其在工業(yè)應用中具備較高的潛在應用價值。Gaurav等[34]將來自Bacillussp.的manb-1601基因在E.coliBL21(DE3)細胞中進行表達，使得重組甘露聚糖酶(ManB-1601)的生產(chǎn)量提高2.73倍，大大提高了產(chǎn)量。與野生型菌株產(chǎn)酶相比，E.coli具有更好的表達、完善的遺傳構(gòu)成和快速生長的能力，而成為細菌異源表達甘露聚糖酶最常用的宿主。

2.2.2 枯草芽胞桿菌表達系統(tǒng)B.subtilis作為外源表達的宿主菌已經(jīng)廣泛地應用到基因的克隆及過量表達過程中。Xu等[29]將來自B.subtilisB10-02甘露聚糖酶gmuG基因在B.subtilis亞種中過表達，原始菌株在酸性條件下穩(wěn)定性不佳。重組酶不僅在pH 6.5～8.0的范圍內(nèi)穩(wěn)定，還使得純化的重組甘露聚糖酶在pH 7.0下具有3207.82 U/mL的較大活性。由此可見，異源表達不但增加了甘露聚糖酶的酸穩(wěn)定性，而且體現(xiàn)出較高的酶活力，改良和完善甘露聚糖酶在動物飼料工業(yè)中的適用性。

劉項羽等[35]從B.subtilisJNA3-10中克隆出含信號肽的manA2基因，在B.subtilis168中克隆表達。重組菌株的酶活力(235.94 U/mL)是原始菌株(17.96 U/mL)的13.1倍，在65℃和pH 6.5條件下具有較高的活性。B.subtilisJNA 3-10通過異源表達提高了甘露聚糖酶的分泌，使重組菌株有潛力作為飼用甘露聚糖酶出發(fā)菌株，為工業(yè)化酶的應用提供了新的資源與選擇。

2.2.3 其他表達系統(tǒng) 作為乳酸菌(Lactic Acid Bacteria，LAB)的一員，干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)是公認的安全菌株。通過食品級表達載體重組表達的酶無需純化，可用于飼料添加劑等食品級用途，對保持人體健康也有一定的有益作用[36]。Lin等[37]自B.pumilus中克隆manB基因在L.casei中表達。鄒業(yè)霞等[38]從B.pumilus中克隆manB基因的成熟肽編碼序列，將該基因克隆到L.casei中。重組甘露聚糖酶酶活可達23 U/mg，實現(xiàn)了Bacillussp.甘露聚糖酶基因在L.casei中的成功表達，對開拓LAB甘露聚糖酶的應用前景意義重大。

2.2.4 畢赤酵母表達系統(tǒng) 不僅細菌重組可以獲得好的效果，真菌也可以作為異源表達的工程菌株。已有Bacillussp.、Penicilliumsp.、Aspergillussp.等不同微生物來源的manB基因在P.pastoris中實現(xiàn)了表達。Junnan等[39]將B.subtilisMAFIC-S11的甘露聚糖酶基因(1029 bp)在P.pastoris中克隆和表達，重組酶表達水平提高了2倍，比活力較高為3706 U/mg。Li等[40]通過PCR克隆將來自B.subtilisBS5的甘露聚糖酶基因整合到P.pastorisGS115的基因組中。重組甘露聚糖酶的最適溫度和pH值分別為50℃和pH 6.0，獲得的純化酶的特異性活性很高為7978 U/mg。實現(xiàn)了重組甘露聚糖酶的高活性表達，在酶活性、穩(wěn)定性等方面表現(xiàn)出獨特的性質(zhì)，將進一步適應實際生產(chǎn)的需要。

3 展望

甘露聚糖的應用范圍非常廣泛，有很好的應用前景。目前，很多實驗室規(guī)模的生產(chǎn)甘露聚糖酶的過程中控制和優(yōu)化技術(shù)已經(jīng)取得了較好的成果，但放大到工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)上卻受到種種限制。為了使甘露聚糖酶更好地服務于人們的生產(chǎn)生活，在現(xiàn)有的基礎(chǔ)上，應該繼續(xù)推進甘露聚糖酶的研究：（1）利用微生物資源生產(chǎn)能廣泛用于不同領(lǐng)域的甘露聚糖酶，如將耐高溫甘露聚糖酶應用到石油工業(yè)中；在造紙工業(yè)中應用作用pH值范圍寬泛的甘露聚糖酶，以及將更加安全來源的酶應用到食品和醫(yī)療中。（2）通過提高菌種產(chǎn)酶水平、酶比活率、酶耐熱性，改善產(chǎn)酶發(fā)酵工藝，開發(fā)出具有活性高、耐高溫、滿足更多要求的甘露聚糖酶，將其更好地應用于工業(yè)及畜牧業(yè)的實際生產(chǎn)中。（3）此外，應用研究不能僅滿足于實驗室研究階段，充分利用分子生物學手段，不斷構(gòu)建外源高表達體系。加深對甘露聚糖酶基因結(jié)構(gòu)和功能的認識，為其定向進化和改造奠定理論基礎(chǔ)。因此，異源表達在工業(yè)化生產(chǎn)中的應用將是未來甘露聚糖酶工藝優(yōu)化的重要發(fā)展方向。相信隨著研究的不斷深入，異源表達的甘露聚糖酶在食品和飼料工業(yè)以及在紙和木漿漂白等工業(yè)領(lǐng)域的應用將越來越廣泛。

[1]黃榮勛,譚小丹,陳涵,等.β-甘露聚糖研究進展[J].福建輕紡,2015,9:42-48.

[2]Hai L L,Yong X,Jin L W,et al.Enzymatic hydrolysis of hemicelluloses fromMiscanthusto monosaccharides or xylooligosaccharides by recombinant hemicellulases[J].Industrial crops and products,2016,79:170-179.

[3]Yamabhai M,Sakubol S,Srila W,et al.Mannan biotechnology:from biofuels to health[J].Critical reviews in biotechnology,2016,36(1):32-42.

[4]Zyl W H V,Rose S H,Trollope K,et al.Fungalβ-mannanases:Mannan hydrolysis,heterologous production and biotechnological applications[J].Process biochemistry,2010,45(8):1203-1213.

[5]Kurakake M,Komaki T.Production ofβ-mannanase andβmannosidase fromAspergillus awamoriK4 and their properties[J].Current Microbiology,2001,42(6):377-380.

[6]王傲雪,張丙秀,李景富.β-1,4-甘露聚糖內(nèi)切酶在番茄發(fā)育中的作用[J].園藝學報,2006,33(5):1157-1161.

[7]毛紹名,章懷云.β-甘露聚糖酶分子生物學研究進展[J].生物技術(shù)通訊,2006,17(6):995-997.

[8]吳華偉,蔚鑫鑫,陳雪秋.產(chǎn)甘露聚糖酶細菌的分離鑒定、酶的部分純化及酶學性質(zhì)研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學,2014,53(15):3601-3605.

[9]尹夢雅,康立新.β-甘露聚糖酶異源表達及甘露寡糖制備研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學,2016,55(1):176-179.

[10]Tsukagoshi H,Nakamura A,Ishida T,et al.The GH26β-mannanase RsMan26H from a symbiotic protist of the termite Reticulitermes speratus is an endo-processive mannobiohydrolase:heterologous expression and characterization[J].Biochemical& biophysical research communications,2014,452(3):520-525.

[11]Bai X,Hu H,Chen H,et al.Expression of aβ-mannosidase fromPaenibacilluspolymyxaA- 8 inEscherichiacoliand characterization of the recombinant enzyme[J].Plos one,2014,9(9):e111622.

[12]Hatada Y,Takeda N,Hirasawa K,et al.Sequence of the gene for a high-alkaline mannanase from an alkaliphilicBacillussp.strain JAMB-750,its expression inBacillus subtilisand characterization of the recombinant enzyme[J].Extremophiles,2005,9(6):497-500.

[13]Zhu T,Sun H,Li P,et al.Constitutive expression of alkalineβmannanase in recombinantPichiapastoris[J]. Process biochemistry,2014,49(12):2025-2029.

[14]楊家興,王華明,路福平.葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表達及酶學性質(zhì)[J].微生物學報,2016,56(8):1242-1255.

[15]Srivastava P K,Ar A R G,Kapoor M.Metal-dependent thermal stability of recombinant endo-mannanase(ManB-1601)belonging to family GH 26 fromBacillussp.CFR1601[J].Enzymeµbial technology,2016,84:41-49.

[16]Tang C D,Shi H L,Tang Q H,et al.Genome mining and motif truncation of glycoside hydrolase family 5 endo-β-1,4-mannanase encoded byAspergillus oryzaeRIB40 for potential konjac flour hydrolysis or feed additive[J].Enzymeµbial technology,2016,93:99-104.

[17]Srivastava PK,Kapoor M.Production,properties,and applications of endo-β-mannanases[J].Biotechnology advances,2017,35(1):1-19.

[18]Pan X,Zhou J,Tian A,et al.High level expression of a truncatedβmannanase from alkaliphilicBacillussp.N16-5 inKluyveromyces cicerisporus[J].Biotechnology letters,2011,33(3):565-570.

[19]Kumagai Y,Kawakami K,Uraji M,et al.Effect of the binding of bivalent ion to the calcium-binding site responsible for the thermal stability of actinomycete mannanase:Potential use in production of functional mannooligosaccharides[J].Journal of molecular catalysis B:enzymatic,2013,94(10):63-68.

[20]許牡丹,楊偉東,許寶紅,等.微生物β-甘露聚糖酶的制備與應用研究進展[J].動物醫(yī)學進展,2006,9(27):31-34.

[21]Katrolia P,Zhou P,Zhang P,et al.High level expression of a novelβ-mannanase fromChaetomiumsp.exhibiting efficient mannan hydrolysis[J].Carbohydrate polymers,2012,87(1):480-490.

[22]李云程,林娟,梁燕輝,等.產(chǎn)甘露聚糖酶海洋微生物的篩選及酶學性質(zhì)研究[J].中國食品學報,2015,15(12):66-73.

[23]Regmi S,Pradeep G C,Yun H C,et al.A multi-tolerant low molecular weight mannanase fromBacillussp.CSB39 and its compatibility as an industrial biocatalyst[J].Enzymeµbial technology,2016,92:76-85.

[24]Li J,Wang C,Hu D,et al.Engineering a family 27 carbohydratebinding module into anAspergillus usamiiβ-mannanase to perfect its enzymatic properties[J].Journal of bioscience&bioengineering,2017,123(3):294-299.

[25]Chai S Y,Bakar F D A,Mahadi N M,et al.A thermotolerant Endo-1,4-β-mannanasefromTrichodermavirensUKM1:Cloning,recombinant expression and characterization[J]. Journal of molecular catalysis B:enzymatic,2016,125:49-57.

[26]Eom G T,Oh J Y,Ji H P,et al.Secretory production of enzymatically active endo-β-1,4-mannanase fromBacillus subtilisby ABC exporter inEscherichia coli[J].Process biochemistry,2016,51(8):999-1005.

[27]Zang H,Xie S,Wu H,et al.A novel thermostable GH5_7βmannanase fromBacillus pumilusGBSW19 and its application in manno-oligosaccharides (MOS) production[J]. Enzyme µbial technology,2015,78:1-9.

[28]馬鑫,趙仲麟,李亮,等.芽孢桿菌β-甘露聚糖酶基因的克隆及表達[J].生物技術(shù)通報,2009,2:77-81.

[29]Xu M,Zhang R,Liu X,et al.Improving the acidic stability of aβmannanase fromBacillus subtilisby site-directed mutagenesis[J].Process biochemistry,2013,48(8):1166-1173.

[30]Kim D Y,Ham S J,Lee H J,et al.Cloning and characterization of a modular GH5β-1,4-mannanase with high specific activity from the fibrolyticbacteriumCellulosimicrobiumsp.strain HY-13[J].Bioresource technology,2011,102(19):9185-9192.

[31]成莉鳳,馮湘沅,段盛文,等.來源于歐文氏桿菌CXJZ95-198的β-甘露聚糖酶基因高效表達體系構(gòu)建[J].中國農(nóng)學通報,2015,31(10):240-245.

[32]Liu H X,Gong J S,Li H,et al.Biochemical characterization and cloning of an endo-1,4-β-mannanase fromBacillus subtilisYH12 with unusually broad substrate profile[J].Process biochemistry,2015,50(5):712-721.

[33]唐嘉婕,郭蘇,王偉,等.短小芽孢桿菌耐堿性β-甘露聚糖酶基因的異源表達及其酶學特性[J].微生物學報,2015,55(11):1445-1457.

[34]Kaira G S,Panwar D and Kapoor M.Recombinant endomannanase(ManB-1601)production using agro-industrial residues:Developmentofeconomicalmedium and application in oil extraction from copra[J].Bioresource technology,2016,209:220-227.

[35]Liu X,Xu M,Yang T,et al.Cloning and expression ofβ-mannanase gene inBacillussubtilis[J]. Chinese journal of appplied environmental biology,2012,18(4):672. [36]Reale A,Renzo T D,Zotta T,et al.Effect of respirative cultures ofLactobacillus caseion model sourdough fermentation[J].LWT-food science and technology,2016,73:622-629.

[37]Lin J,Zou Y,Ma C,et al.Heterologous expression of mannanase and developing a new reporter gene system inLactobacillus caseiandEscherichia coli[J].Plos one,2015,10(11):e0142886.

[38]鄒業(yè)霞,林金鐘,卜雪梅,等.短小芽孢桿菌β-1,4-甘露聚糖酶的酶學性質(zhì)及其在干酪乳桿菌中的表達[J].微生物學報,2015,55(12):1576-1583.

[39]Lv J,Chen Y,Pei H,et al.Cloning,expression,and characterization ofβ-mannanase fromBacillus subtilisMAFIC-S11 inPichia pastoris[J].Applied biochemistry and biotechnology,2013,169(8):2326-2340.

[40]Li R K,Chen P,Ng T B,et al.Highly efficient expression and characterization of aβ-mannanase fromBacillus subtilisinPichia pastoris[J].Biotechnology&applied biochemistry,2015,62(1):64-70.

Heterologous Expression Bacterialβ-mannanase:Research Progress

Na Jin1,2,Wang Yao1,2,Guo Shangxu1,2,Zhao Dan1,2
(1Key Laboratory of Microbiology,Life Science College,Heilongjiang University,Harbin 150080,Heilongjiang,China;2Engineering Research Center of Agricultural Microbiology Technology,Ministry of Education,Heilongjiang University,Harbin 150500,Heilongjiang,China)

Mannanase is a key enzyme for hydrolyzing mannan,and is widely found in plants,animals and microorganisms,particularly in bacteria.In order to meet the needs of industrial production,heterologous expression of bacterial-derived mannanase gene is studied in order to obtain high-quality mannanase.In this paper,the origin and enzymatic properties of mannanase were reviewed,and the heterologous expression of bacterial mannanase was summarized concerning the aspects of improving the enzyme activity,expanding the pH range and improving the safety,including heterologous expression ofEscherichia coli,Bacillus subtilis and Pichia pastoris.The use of microbial resources can broaden the application of mannanase,and the use of microbial technology can improve the amount of enzyme production to meet industrial needs,these lay a foundation for the determinate evolution and transformation of mannanase.

Bacteria;β-mannanase;Molecular Biology;Heterologous Expression;Application

TS2，C39

A論文編號：cjas17040011

哈爾濱市科技局青年后備人才項目“功能性乳酸菌發(fā)酵酸菜生態(tài)學過程研究”(2014RFQXJ101)；黑龍江省政府博士后項目“疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)NF-05漆酶的產(chǎn)生、特性及應用研究”(LBH-Z15214)。

那金，女，1994年出生，黑龍江哈爾濱人，碩士，研究方向為微生物學。通信地址：150080黑龍江省哈爾濱市南崗區(qū)學府路74號黑龍江大學224信箱，Tel：0451-86609134，E-mail：najin8023@163.com。

趙丹，女，1980年出生，黑龍江齊齊哈爾人，副教授，博士，研究方向為微生物學。通信地址：150080黑龍江省哈爾濱市南崗區(qū)學府路74號黑龍江大學224信箱，Tel：0451-86609134，E-mail：zhaodan4u@163.com。

2017-04-11，

2017-06-08。