趙怡雯

(1.大連市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 大連 116037；2.大連市畜牧總站，遼寧 大連 116037)

動(dòng)物生產(chǎn)

肉雞副雞嗜血桿菌與敗血型霉形體的鑒別診斷

趙怡雯1，2

(1.大連市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 大連 116037；2.大連市畜牧總站，遼寧 大連 116037)

雞傳染性鼻炎是由副雞嗜血桿菌引起雞的一種急性呼吸道傳染病，任何年齡雞都易感，但幼雞一般不太嚴(yán)重，成年雞發(fā)病急、病程長(zhǎng)，引起育成雞生長(zhǎng)發(fā)育不良和產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋明顯下降。臨床表現(xiàn)為眶下竇腫脹、流鼻汁、流淚、排綠色或白色糞便。敗血型霉形體（MG）引起的腫頭腫臉和副雞嗜血桿引起的傳染性鼻炎臨床表現(xiàn)還是有一定的區(qū)別的，MG感染雞群先表現(xiàn)喘、氣管啰音，然后逐漸出現(xiàn)腫頭腫臉雞，遷延不愈，眶下竇分泌物呈干酪樣，量大時(shí)形成栓子阻塞呼吸道引起雞死亡。而傳染性鼻炎發(fā)病急，雞眶下竇迅速腫起，觸之有波動(dòng)感，分泌物呈漿液性，有黏度，注射器可以抽出，后期感染繼發(fā)菌分泌物呈干酪樣、膿樣，不易與MG區(qū)分，所以這兩種病要早期準(zhǔn)確診斷，有針對(duì)性地治療。

1 發(fā)病情況

某肉種雞場(chǎng)12周齡肉種雞出現(xiàn)了以腫臉、流鼻汁為主要特征的疾病，疾病蔓延迅速，病雞均表現(xiàn)面部雙側(cè)腫脹，鼻孔有黏液流出。放血宰殺病雞，在鼻孔處剪斷上喙，擠壓眶下竇，流出大量黏液，混有干酪樣分泌物。我們采集病雞眶下竇分泌物，分別進(jìn)行了副雞嗜血桿菌和敗血型霉形體的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

對(duì)疑似副雞嗜血桿菌的純化培養(yǎng)物及對(duì)應(yīng)的病料樣品按NY/T538-2002雞傳染性鼻炎診斷技術(shù)的方法預(yù)處理，然后按EzuP柱式細(xì)菌基因組DNA抽提試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法提取細(xì)菌基因組DNA，反應(yīng)體系：10×Buffer 2.5微升，dNTP各0.5毫摩爾，Taq聚合酶1.5U，副雞嗜血桿菌上下游引物各0.5微升（0.2微摩爾），細(xì)菌DNA模板2微升，加雙蒸水至25微升；反應(yīng)條件：98℃2.5分鐘預(yù)變性；94℃1分鐘、65℃1分鐘、72℃2分鐘，循環(huán)25次；94℃1分鐘、65℃1分鐘、72℃10分鐘，循環(huán)1次。PCR產(chǎn)物經(jīng)0.8%瓊脂糖凝膠電泳分析。

禽敗血型霉形體熒光PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京生科尚儀科技有限公司，批號(hào)20160701。樣本為眶下竇分泌物，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系PCR反應(yīng)液23微升，Taq酶0.25微升，提取的模版DNA 2微升，PCR反應(yīng)條件：94℃3分鐘；94℃5秒，60℃30秒（收集熒光），40個(gè)循環(huán)。熒光信號(hào)收集設(shè)定為Fam熒光素。Ct值小于等于35的樣本為陽(yáng)性。Ct值大于35的樣本重做，重做結(jié)果Ct值為none為陰性，否則為陽(yáng)性。

3 結(jié)果

病雞眶下竇分泌物經(jīng)副雞嗜血桿菌PCR檢測(cè)，均在500bp處出現(xiàn)了和陽(yáng)性對(duì)照大小相同的條帶，MG熒光PCR檢測(cè)結(jié)果為陰性。

4 討論

副雞嗜血桿菌分離過(guò)程比較復(fù)雜，培養(yǎng)基制作也很繁瑣。該菌的分離對(duì)病料的新鮮度要求高，不能冷凍，活禽采集后半小時(shí)內(nèi)接種才能有效獲得菌株，而且分離過(guò)程中要排除雜菌干擾。我們采用陳小玲等建立的PCR診斷方法（NY/T538-2002）快速診斷，以便區(qū)別敗血型霉形體、傳支、傳喉等呼吸道病，有針對(duì)地采取治療措施。

敗血型霉形體（MG）在肉雞養(yǎng)殖量較大的普蘭店市和瓦房店市檢出率較高，我們?cè)鴮?duì)兩市6個(gè)呼吸道病反復(fù)發(fā)作的肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行MG血清學(xué)監(jiān)測(cè)，結(jié)果MG血清抗體平均陽(yáng)性率達(dá)70%。分析主要原因是引進(jìn)的雞苗已感染MG，這一點(diǎn)在外引的麻羽肉雞上表現(xiàn)明顯；種雞帶菌垂直傳播；養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境衛(wèi)生差，飼養(yǎng)密度大，飼養(yǎng)環(huán)境調(diào)節(jié)能力低下，在冬、春氣溫驟變時(shí)易誘發(fā)MG。肉雞MG感染與大腸桿菌感染協(xié)同致病作用更為突出，使肉雞呼吸道病反復(fù)發(fā)作。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)雞群感染MG后，大腸桿菌感染率常陡然上升，造成雞群生長(zhǎng)緩慢或停滯，飼料轉(zhuǎn)化率低，出欄期延長(zhǎng)，淘汰率增加，一些散養(yǎng)的特種肉食雞對(duì)MG特別易感，傳播快，合并感染嚴(yán)重，使治療變得異常困難。最后形成大量干酪樣物堵塞呼吸道，引起很高的死亡率。

MG不僅可以水平傳播還可以經(jīng)種蛋垂直傳播，所以防制MG要從種雞凈化、疫苗接種、防止細(xì)菌繼發(fā)感染、創(chuàng)造良好的飼養(yǎng)環(huán)境等多方面入手。

PCR檢測(cè)方法是一種早期診斷的好方法，定期分離病原體檢測(cè)其耐藥性及分子遺傳變異性是科學(xué)防控這兩種疫病的基礎(chǔ)。