段永福，熊順軍

（1.河南省南陽市中心醫(yī)院小兒外科，河南南陽473000；2.武漢大學(xué)中南醫(yī)院兒科，湖北武漢430071）

臨床論著

HMGB1在急性腸套疊患兒血清中的表達(dá)及其臨床意義*

段永福1，熊順軍2

（1.河南省南陽市中心醫(yī)院小兒外科，河南南陽473000；2.武漢大學(xué)中南醫(yī)院兒科，湖北武漢430071）

目的探討高遷移率族蛋白1（HMGB1）在小兒急性腸套疊外周血中的表達(dá)及其臨床意義。方法選取2010年10月-2015年6月在該院接受治療的急性腸套疊患兒89例，取同期體檢的89例健康嬰幼兒作為對(duì)照組，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)受檢對(duì)象外周靜脈血中HMGB1的表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)兩組研究對(duì)象外周血中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素6（IL-6）的表達(dá)水平。結(jié)果與對(duì)照組比較，急性腸套疊患兒外周血中腫瘤壞死因子（TNF-α）、白介素6（IL-6）及HMGB1水平升高（P＜0.05），進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1的表達(dá)量與TNF-α、IL-6的表達(dá)水平相關(guān)；受試者工作特征曲線表明，以12.35 ng/ml為臨界值，HMGB1用于診斷急性腸套疊的敏感性為70.79％，特異性為79.78％。結(jié)論小兒急性腸套疊外周血中HMGB1的表達(dá)量升高，早期檢測(cè)其表達(dá)可能對(duì)急性腸套疊的診斷具有一定意義。

急性腸套疊；小兒；高遷移率族蛋白1

急性腸套疊是嬰幼兒期最常見的急腹癥，易復(fù)發(fā)[1]?；純撼霈F(xiàn)果醬樣血便、嘔吐及陣發(fā)性哭鬧現(xiàn)象，檢查腹部時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)臘腸樣包塊存在[2]，臨床上仍有10％～15％的急性腸套疊患者[3]，就診時(shí)缺乏急性腸套疊的典型表現(xiàn)而造成診斷和治療困難，因此尋找特異性的血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)以改善小兒急性腸套疊的治療效果。通過動(dòng)物模型研究得知，在小兒腸套疊的產(chǎn)生和發(fā)展過程中，炎癥反應(yīng)起至關(guān)重要的作用，高遷移率族蛋白1（high mobility group box-1 protein，HMGB1）在多種炎癥疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用；研究還發(fā)現(xiàn)檢測(cè)患者血清中HMGB1的表達(dá)水平對(duì)多種疾病的診斷具有一定的指導(dǎo)意義[4-8]。本文通過檢測(cè)HMGB1在急性腸套疊患兒血清中的表達(dá)和臨床意義，為今后急性腸套疊治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2010年10月-2015年6月在本院接受治療的急性腸套疊患兒89例為研究對(duì)象。其中男性45例，女性44例；年齡3～30個(gè)月，平均（9.8±2.3）個(gè)月。取同期體檢的89例健康嬰幼兒作為對(duì)照組。其中男性46例，女性43例；平均年齡（9.7±2.1）個(gè)月。入選標(biāo)準(zhǔn)：腸套疊患兒均為原發(fā)性急性腸套疊，具有腸套疊的典型臨床表現(xiàn)，經(jīng)超聲檢查確診，灌腸治療均獲得成功。腸套疊復(fù)發(fā)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9-10]：距前1次腸套疊間隔≥12 h的再次發(fā)作的腸套疊，間隔＜12h的則考慮為前1次套疊復(fù)位不完全。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除接受手術(shù)復(fù)位治療及出現(xiàn)腸壞死、復(fù)位失敗的患兒。兩組受試對(duì)象的性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究方案經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒監(jiān)護(hù)人知情和同意。

1.2 方法

1.2.1 提取標(biāo)本對(duì)照組抽取外周靜脈血4 ml于肝素抗凝管中，急性腸套疊組于復(fù)位前及復(fù)位后12 h抽取外周靜脈血4 ml。3 000 r/min離心10 min，分離血漿，置于-80℃冰箱冷凍保存，留待后續(xù)檢查。

1.2.2 外周血中HMGB1、TNF-α及IL-6蛋白的檢測(cè)HMGB1、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白介素6（interleukin-6，IL-6）酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)試劑盒由杭州聯(lián)科公司提供，具體方法按試劑盒說明書操作。測(cè)試之前，在室溫中保存試劑盒和樣本，按照1︰1稀釋待測(cè)樣本，在反應(yīng)孔中吸入50μl混合液，將50μl待測(cè)樣本及50μl標(biāo)準(zhǔn)品加入其中，迅速加入50μl經(jīng)過生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕微搖晃至均勻，保存在37℃的環(huán)境中，防止1 h，清除孔內(nèi)液體，將洗滌液加入各孔內(nèi)，振蕩，甩凈洗滌液，吸水紙將其吸干，上述洗滌過程重復(fù)3次。將50μl的底物A與50μl的底物B加入到各孔內(nèi)，輕微搖晃至均勻，避光保存于37℃環(huán)境中10 min。取出酶標(biāo)板，加入50μl終止液，置于450 nm波長處，測(cè)量光密度（optical density，OD）值，繪制曲線，計(jì)算血漿樣本相應(yīng)的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，用t檢驗(yàn)，兩變量值間做Pearson相關(guān)分析，計(jì)數(shù)資料的比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清中HMGB1、IL-6及TNF-α的表達(dá)

急性腸套疊組術(shù)前HMGB1、IL-6及TNF-α表達(dá)量與對(duì)照組比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 2.582、40.439和42.808，P=0.011、0.000和0.000），急性腸套疊組高于對(duì)照組。復(fù)位12 h后患兒血清中HMGB1、IL-6和TNF-α的表達(dá)量降低（t=2.215、30.961和26.273，P=0.029、0.000和0.000），但仍高于對(duì)照組。見表1。

表1 各組HMGB1、IL-6和TNF-α表達(dá)量比較（n=89，x±s）

2.2 HMGB1與IL-6、TNF-α的相關(guān)性分析

急性腸套疊患兒血清中HMGB1的表達(dá)量與TNF-α、IL-6水平呈正相關(guān)（r2=0.610和0.670，P= 0.000）。見圖1。

2.3 HMGB1用于急性腸套疊的診斷價(jià)值分析

受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic cure，ROC）曲線分析表明，HMGB1用于診斷急性腸套疊的線下面積為0.845，以HMGB1的表達(dá)量12.35 ng/ml為臨界值，其診斷急性腸套疊的敏感性為70.79％，特異性為79.78％。見圖2。

2.4 HMGB1血清表達(dá)量與患兒腸套疊復(fù)發(fā)的關(guān)系

本組研究對(duì)象共有14例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為15.7％；與未復(fù)發(fā)組比較，復(fù)發(fā)組患兒術(shù)前血清中HMGB1的表達(dá)量升高，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

圖2 ROC曲線分析

表2 復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組患兒血清中HMGB1的表達(dá)比較

3 討論

HMGB1是一種晚期炎癥介質(zhì)[11]，其在大部分炎癥性疾病患者血清中出現(xiàn)高表達(dá)，并且與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)，早期檢測(cè)HMGB1的表達(dá)水平對(duì)疾病的診斷及病情判斷具有一定意義[12-14]。HMGB1與細(xì)胞表面的特異性配體TLR4和RAGE結(jié)合后，通過激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB進(jìn)一步誘導(dǎo)下游TNF-α和IL-6等炎癥因子的表達(dá)。國內(nèi)吳義平[15]研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α和IL-6在小兒急性腸套疊患兒的血清中表達(dá)升高，并與腸套疊患兒的復(fù)發(fā)率相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，急性腸套疊患兒血清中HMGB1的表達(dá)量升高，此外，TNF-α和IL-6在患兒血清中的表達(dá)升高，與以往的研究一致。由于HMGB1可以誘導(dǎo)TNF-α和IL-6的產(chǎn)生，本研究進(jìn)一步探討HMGB1的表達(dá)量與兩者的相關(guān)性。研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1的表達(dá)量與患兒血清中TNF-α、IL-6的表達(dá)存在相關(guān)性，提示HMGB1可能在急性腸套疊患兒的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。

在證實(shí)HMGB1在急性腸套疊患兒血清中存在高表達(dá)后，本研究進(jìn)一步探討HMGB1的表達(dá)量用于診斷急性腸套疊患兒的意義，ROC曲線分析表明，以HMGB1的表達(dá)量為閾值，其用于診斷急性腸套疊患兒的敏感性為70.79％，特異性為79.78％，提示血清HMGB1有應(yīng)用于急性腸套疊的診斷價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討復(fù)發(fā)腸套疊患兒與非復(fù)發(fā)腸套疊患兒血清中HMGB1表達(dá)的差異性，結(jié)果表明，復(fù)發(fā)腸套疊患兒術(shù)前血清中HMGB1的表達(dá)量高于非復(fù)發(fā)患兒，提示HMGB1可能是影響腸套疊復(fù)發(fā)的重要因素。由于本研究只是一個(gè)臨床觀察性的研究，對(duì)于HMGB1在腸套疊中的作用，需要在動(dòng)物模型中進(jìn)一步探討。

綜上所述，HMGB1在急性腸套疊患兒血清中的表達(dá)升高，其可能在小兒急性腸套疊的發(fā)病機(jī)制中具有一定作用，早期檢測(cè)血清中HMGB1的表達(dá)水平對(duì)疾病的診斷及預(yù)后判斷可能具有一定意義。未來還需要大樣本、多中心的臨床研究，以期為HMGB1應(yīng)用于臨床上小兒腸套疊的診斷和治療打下堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

[1]KSIA A,MOSBAHI S,BRAHIM MB,et al.Recurrent intussus ception in children and infants[J].Afr J Paediatr Surg,2013,10(4): 299-301.

[2]JIANG W,TANG W,GENG Q,et al.Postoperative intussusception in infants and children:a report of seven cases[J].J Biomed Res,2012,26(1):66-68.

[3]TASKINLAR H,GUNDOGDU G,CELIK Y,et al.Challenging diagnosis between intussusception and necrotizing enterocolitis in premature infants[J].Pediatr Int,2014,56(3):e1-e3.

[4]POUWELS S D,NAWIJN MC,BAThOORN E,et al.Increased serum levels of LL37,HMGB1 and S100A9 during exacerbation in COPD patients[J].Eur Respir J,2015,45(5):1482-1485.

[5]WANG H,ZHAO L,LI J,et al.Analysis of the released nucle-ar cytokine HMGB1 in human serum[J].Methods Mol Biol,2014, 1172:13-25.

[6]WU Y,ZHANG K,ZHAO L,et al.Increased serum HMGB1 is related to oxidative stress in patients with atrial fibrillation[J].J Int Med Res,2013,41(6):1796-1802.

[7]KILLORAN K E,MILLER A D,URAY K S,et al.Role of innate immunity and altered intestinal motility in LPS-and Mn-Cl2-induced intestinal intussusception in mice[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2014,306(5):G445-G453.

[8]BADRIYYAH M,MAZEH H,BROCKE S,et al.Prevention of lipopolysaccharide-induced intussusception in mice by the COX2 inhibitor rofecoxib[J].Pediatr Surg Int,2008,24(3):333-336.

[9]KSIA A,MOSBAHI S,BRAHIM MB,et al.Recurrent intussus ception in children and infants[J].Afr J Paediatr Surg,2013,10(4): 299-301.

[10]HSU W L,LEE H C,YEUNG C Y,et al.Recurrent Intussusception:when Should Surgical Intervention be performed[J].Pediatr Neonatol,2012,53(5):300-303.

[11]SHEN X,LI W Q.High-mobility group box 1 protein and its role in severe acute pancreatitis[J].World J Gastroenterol,2015, 21(5):1424-1435.

[12]CHEN T,GUO ZP,LI L,et al.Increased HMGB1 serum levels and altered HMGB1 expression in patients with psoriasis vulgaris[J].Arch Dermatol Res,2013,305(3):263-267.

[13]ZHENG Y J,XU W P,DING G,et al.Expression of HMGB1 in septic serum induces vascular endothelial hyperpermeability[J]. Mol Med Rep,2016,13(1):513-521.

[14]WANG H,QU H,DENG H.Plasma HMGB-1 levels in subjects with obesity and type 2 diabetes:a cross-sectional study in china[J].PLoS One,2015,10(8):e0136564.

[15]吳義平.血清腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素-6在小兒急性腸套疊中測(cè)定的臨床意義探討[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2013,17(24): 75-77.

（童穎丹 編輯）

Expression of HMGB1 in infants with intussusception and clinical significance*

Yong-fu Duan1,Shun-jun Xiong2
(1.Department of Pediatric Surgery,Nanyang Central Hospital,Nanyang,Henan 473000, China;2.Department of Pediatrics,Zhongnan Hospital of Wuhan University, Wuhan,Hubei 430071,China)

ObjectiveTo evaluate the expression and clinical significance of serum high mobility group box-1 protein(HMGB1)in infants with intussusception.MethodsEighty-nine infants with intussusception admitted to our department between October 2010 and June 2015 were enrolled in this prospective study,and 89 health children having physical examination during the same period were selected into control group. Interleukin-6(IL-6),tumor necrosis factor α(TNF-α)and HMGB1 were estimated at the time of admission.ResultsChildren with intussusception had higher levels of HMGB1,IL-6 and TNF-α when compared with the control group(P＜0.05).HMGB1 was in positive correlations with IL-6 and TNF-α(P＜0.05)in children with intussusception.Using the ROC curve,the boundary value of HMGB1 was 12.35 ng/ml.The sensitivity and specificity of HMGB1 for the diagnosis of intussusception were 70.79％and 79.78％,respectively.ConclusionsSerum level of HMGB1 increases in the infants with intussusception.Early detection of serum HMGB1 may have certain significance for the diagnosis of intussusception in infants.

intussusception;infant;high mobility group box-1 protein

R91

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.01.009

1005-8982（2017）01-0046-04

2016-06-02

湖北省衛(wèi)生廳課題（No：JX3B24）