吳靜 沈翠珍
浙江中醫(yī)藥大學(xué)浙江杭州310053
實(shí)驗(yàn)研究
丹參素鈉對(duì)壓瘡缺血再灌注損傷大鼠預(yù)防作用的實(shí)驗(yàn)研究
吳靜 沈翠珍
浙江中醫(yī)藥大學(xué)浙江杭州310053
目的:構(gòu)建缺血再灌注損傷大鼠模型,觀察和評(píng)價(jià)預(yù)防性使用丹參素鈉(SDSS)作用于該模型的病理特點(diǎn)及對(duì)壓瘡的防治意義。方法:將50只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組和4個(gè)實(shí)驗(yàn)組,對(duì)4個(gè)實(shí)驗(yàn)組大鼠預(yù)防性使用SDSS,1周后利用自制壓力裝置建立缺血再灌注損傷模型,從皮膚、皮下、肌肉組織對(duì)大鼠受壓部位進(jìn)行觀察。結(jié)果:模型組肉眼觀察充血反應(yīng)和光鏡下觀察炎性反應(yīng)較SDSS低劑量組呈逐漸加重趨勢(shì);SDSS高、中、低劑量組均存在皮膚層次欠清晰,皮下結(jié)締組織和肌肉組織有炎性反應(yīng),病理變化嚴(yán)重程度隨劑量濃度的降低而加重。結(jié)論:SDSS對(duì)缺血再灌注損傷大鼠模型具有顯著的預(yù)防作用,以高劑量為優(yōu),可為SDSS防治壓瘡提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
丹參素鈉 缺血再灌注損傷 壓瘡 大鼠 實(shí)驗(yàn)研究
壓瘡(PS)又稱壓力性潰瘍(PU),是由于皮膚和皮下組織通過長(zhǎng)期受壓,血液循環(huán)不良,致使受壓部分組織缺血而腐敗乃至壞死。目前,關(guān)于壓瘡的發(fā)生機(jī)制存在多種假說,其中缺血再灌注損傷(I/RI)是壓瘡發(fā)生的重要機(jī)制之一,是當(dāng)前國(guó)外關(guān)于壓瘡發(fā)生機(jī)制的熱點(diǎn)。中藥丹參(SM),具有活血化瘀、涼血消腫的作用,臨床上已廣泛應(yīng)用,如丹紅注射液可用于治療短暫性腦缺血發(fā)作患者[1]。有研究表明,丹參提取物丹參素鈉(SDSS)對(duì)于大鼠、小鼠以及細(xì)胞的缺血再灌注模型具有潛在的抗氧化、抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)[2]等作用。本研究對(duì)大鼠預(yù)防性使用SDSS后模擬缺血再灌注損傷模型,對(duì)SDSS作用于壓瘡缺血再灌注損傷的病理學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行研究。
1.1 材料:①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SPF級(jí)健康雄性SD大鼠50只,月齡12~14周,平均體重220±20g,由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠在恒溫恒濕條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、SDSS低劑量組、SDSS中劑量組、SDSS高劑量組5組,每組10只。②施壓方法:利用自制壓力裝置,依據(jù)公式F= Mg,P=F/S[3]。③主要試劑:SDSS(每支20mg,批號(hào)JS90062-20mg)購于上海金穗生物科技有限公司。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法:分述如下。
1.2.1 模型構(gòu)建:空白對(duì)照組和模型組大鼠腹腔注射生理鹽水2ml/(kg·d);SDSS低劑量組給予15ml/(kg·d)SDSS注射液,SDSS中劑量組為30ml/(kg·d),SDSS高劑量組為60ml/(kg·d),均予腹腔注射,給藥7天后,應(yīng)用缺血再灌注循環(huán)來促進(jìn)壓力性潰瘍的形成。各組大鼠均于清潔級(jí)動(dòng)物手術(shù)室內(nèi)對(duì)一側(cè)后肢腹部及腿部皮膚進(jìn)行剃毛,腹腔注射10%水合氯醛300mg/kg,麻醉后選擇大鼠后肢有較大接觸面且皮下組織淺薄的股薄肌處施壓,造成局部組織缺血,每次施壓2h后將裝置取下,讓局部血流恢復(fù)30min,如此循環(huán)。每只大鼠進(jìn)行5個(gè)連續(xù)循環(huán),整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中按需補(bǔ)充麻醉藥,且每2.5h腹腔注射2~3ml葡萄糖鹽水(2.5%葡萄糖注射液加0.45%氯化鈉注射液)。12h后裝置移去,用頸椎脫臼法處死實(shí)驗(yàn)大鼠[4]。
1.2.2 標(biāo)本收集及檢測(cè)方法:切取各組大鼠股薄肌受壓中心部位皮膚及肌肉組織約5mm×5mm×5mm,4℃生理鹽水快速洗凈血液后,用10%中性多聚甲醛固定、乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等處理,蠟塊連續(xù)切片,厚5μm,進(jìn)行HE染色,用Nikon(TE2000-U)顯微鏡觀察,NISElements圖像采集軟件采集圖像。
1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析處理,行F檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
2.1 肉眼觀察:各組大鼠在預(yù)防性用藥期間耐受良好。模型組和SDSS干預(yù)組大鼠皮膚完整。SDSS高劑量組受壓局部未出現(xiàn)明顯可見的發(fā)紅現(xiàn)象;SDSS中、低劑量組受壓局部非持續(xù)性發(fā)紅,放松后可恢復(fù);模型組受壓局部出現(xiàn)持續(xù)發(fā)紅現(xiàn)象,即臨床Ⅰ期壓瘡早期表現(xiàn)。模型組與SDSS低劑量組、中劑量組在造模后,受壓部位輕度凹陷,周圍肌肉水腫明顯,周圍皮膚輕微水腫等表現(xiàn)。
2.2 病理切片觀察:分述如下。
2.2.1 模型組:皮膚復(fù)層鱗狀上皮組織變薄,結(jié)構(gòu)不清且細(xì)胞層次減少,上皮結(jié)構(gòu)斷裂,真皮膠原纖維變性、溶解,可見明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1)。肌肉組織萎縮、變性較嚴(yán)重,肌肉自溶現(xiàn)象明顯,在間質(zhì)區(qū)域細(xì)胞核聚集,肌細(xì)胞核固縮,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯(圖2)。
圖1 皮膚組織(×200)
圖2 肌肉組織(×100)
2.2.2 SDSS高劑量組:皮膚各層未出現(xiàn)明顯損傷,但上皮層次不夠清晰,皮膚毛囊有所減少,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯(圖3)。肌纖維萎縮,有斷裂跡象,輕度水腫,有少許臘樣變性,炎癥細(xì)胞輕度浸潤(rùn),橫紋模糊(圖4)。
圖3 皮膚組織(×200)
圖4 肌肉組織(×100)
2.2.3 SDSS中劑量組:皮膚組織相對(duì)于SDSS高劑量組皮層不夠清晰,真皮層內(nèi)毛囊與SDSS高劑量組相比有所減少,中性粒細(xì)胞輕度浸潤(rùn),可見明顯炎性反應(yīng)(圖5)。肌纖維斷裂明顯,臘樣變性明顯,在間質(zhì)區(qū)域細(xì)胞核聚集,肌細(xì)胞核固縮,可見血管周圍纖維增生明顯(圖6)。
圖5 皮膚組織(×200)
圖6 肌肉組織(×100)
2.2.4 SDSS低劑量組:相對(duì)于SDSS中劑量組上皮層次不夠清晰,皮膚毛囊比SDSS高、中劑量組減少,皮下組織炎性反應(yīng)較重,真皮層中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)明顯(圖7)。肌肉組織臘樣變性明顯,橫紋消失,見肌肉自溶現(xiàn)象,血管壁變厚、內(nèi)皮腫大,在間質(zhì)區(qū)域細(xì)胞核聚集增加,肌細(xì)胞核固縮,可見血管周圍纖維增生明顯(圖8)。
圖7 皮膚組織(×200)
圖8 肌肉組織(×100)
2.35 組大鼠組織病理學(xué)變化:按姜麗萍[5]方法,對(duì)壓瘡病理變化嚴(yán)重程度進(jìn)行判斷,見表1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,5組大鼠組織病理變化差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
表1 各組大鼠組織病理變化程度
目前,采用預(yù)防性用藥的方法應(yīng)用于臨床上壓瘡的治療尚處于萌芽期,本實(shí)驗(yàn)采用動(dòng)物模型的方式能有效地模擬臨床環(huán)境,人為地控制各種影響因素,從而更好地探討SDSS作用于機(jī)體的病理變化。本研究結(jié)果顯示,光鏡下觀察到SDSS干預(yù)組及模型組出現(xiàn)不同程度的上皮組織損傷,肌肉組織變性及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),可推知由于受壓組織反復(fù)經(jīng)歷缺血再灌注循環(huán)過程,局部組織呈現(xiàn)炎癥過程。本研究用SDSS對(duì)各組大鼠干預(yù)后,除空白對(duì)照組外,SDSS高、中、低劑量組到模型組皮膚及肌肉組織的損傷程度逐漸加重,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示SDSS有較強(qiáng)的抗炎和抗氧化功能,有利于保護(hù)皮膚和肌肉組織,SDSS高劑量組預(yù)防效果較好。
綜上所述,SDSS對(duì)皮膚、肌肉組織具有保護(hù)作用,預(yù)防性使用可減輕組織損傷,延緩壓瘡損傷的進(jìn)行性劇變。本研究可為臨床治療壓瘡提供新思路新方法,在今后的研究中可進(jìn)一步明確SDSS的最有效劑量,并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)用于臨床。
[1]曲娟,朱曉東,胡進(jìn).丹紅注射液對(duì)短暫性腦缺血發(fā)作患者CD62p、CD63的影響[J].浙江中醫(yī)雜志,2014,49(9):636-637.
[2]Jiang L,Dai Y,Cui F,et al.Expression of cytokines,growthfactorsandapoptosis-relatedsignal molecules in chronic pressure ulcer wounds healing [J].Spinal Cord,2014,52(2):145-151.
[3]蔡福滿,姜麗萍,楊曄,等.褥瘡不完全性缺血再灌注損傷簡(jiǎn)易模型的建立[J].中國(guó)病理生理雜志,2009,25(4):830-832.
[4]權(quán)偉,周丹,郭超,等.丹參素鈉通過抑制炎癥反應(yīng)對(duì)心肌缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中南藥學(xué),2012,10(12):885-888.
[5]姜麗萍,蔡福滿,楊曄琴,等.局部皮膚持續(xù)受壓致壓瘡的實(shí)驗(yàn)研究[J].解放軍護(hù)理雜志,2007,24(12A):4-8.
2016-06-11