張一名??+劉玲玲+謝韞澤??+孫艷香+馮雪??賈永紅

摘要：應(yīng)用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器法（HPLC-DAD）對(duì)棉花體內(nèi)多胺測(cè)定時(shí)的流動(dòng)相比例及流速、多胺全光譜信息等進(jìn)行分析，重點(diǎn)比較2種常用檢測(cè)波長(zhǎng)230、254 nm下的測(cè)定參數(shù)。最終確定檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm、流動(dòng)相體積比V甲醇 ∶[KG-3]V水=80 ∶[KG-3]20、流速為0.6 mL/min為最佳色譜條件。該方法有較好的準(zhǔn)確度、靈敏度，腐胺、亞精胺、精胺的回收率分別為98.58%、96.98%、99.62%，且非常穩(wěn)定。以此色譜條件為基礎(chǔ)測(cè)定棉花幼苗不同組織中多胺水平發(fā)現(xiàn)，葉片中3種多胺的含量明顯高于根、莖組織；此外，不同組織內(nèi)亞精胺含量最高。

關(guān)鍵詞：棉花；幼苗組織；多胺含量；高效液相色譜；二極管陣列檢測(cè)器

中圖分類號(hào)： S562.01文獻(xiàn)標(biāo)志碼：

文章編號(hào)：1002-1302（2016）08-0328-04

多胺（polyamines，PAs）是一類含有多個(gè)氨基的長(zhǎng)鏈脂肪族化合物，廣泛存在于生物體內(nèi)。在植物代謝途徑中，目前比較清楚的多胺形式主要有腐胺（putrescine，Put）、亞精胺（spermidine，Spd）、精胺（spermine，Spm）[1-2]。研究表明，多胺在植物體內(nèi)是一類重要的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子，參與植物的細(xì)胞分裂[3-4]、性別分化[5]、果實(shí)成熟與衰老[6]、逆境適應(yīng)[7-10]等重要生理過(guò)程。在分子水平的研究中還發(fā)現(xiàn)，多胺參與DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、膜穩(wěn)定、RNA和蛋白質(zhì)的翻譯[11]、DNA凝聚及激素的調(diào)控[12]等過(guò)程。另外，在人體中也存在大量多胺類物質(zhì)，并與人類健康息息相關(guān)[13]。由于植物性食物是人體內(nèi)多胺的重要來(lái)源之一[14]，因此，如何準(zhǔn)確而快速地檢測(cè)植物組織中的多胺技術(shù)越來(lái)越受到人們的重視。

多胺的測(cè)定以前主要用氨基酸分析儀、紙電泳等方法[15-16]，這2種檢測(cè)方法樣品回收率低，檢測(cè)靈敏度也不高。目前多用衍生化的方法，即將多胺的一、二級(jí)氨基接在鹵素原子上，另外還有接在熒光基團(tuán)或?qū)ψ贤庥形盏幕鶊F(tuán)上，再通過(guò)氣相（GC）或液相（HPLC）方法進(jìn)行分離檢測(cè)。其中，氣相色譜剛剛應(yīng)用在植物多胺的研究方向，雖然分析時(shí)間短，但是對(duì)試樣要求高，前處理過(guò)程比較復(fù)雜[17]，并且應(yīng)用質(zhì)譜檢測(cè)設(shè)備價(jià)格昂貴，且分離檢測(cè)效果沒(méi)有顯著提高。自從1979年Redmond等采用苯甲?；姆椒ㄒ詠?lái)，隨著不斷改進(jìn)，高效液相色譜法已經(jīng)成為較為成熟的檢測(cè)植物體內(nèi)多胺的方法[18-21]。目前主要應(yīng)用熒光檢測(cè)器（FLD）、紫外吸收檢測(cè)器（UV）。其中，F(xiàn)LD法檢測(cè)多胺的主要優(yōu)勢(shì)在于靈敏度高[22]，但要用到有毒流動(dòng)相乙腈。另外，由于瑞利散射、拉曼散射的干擾，使熒光檢測(cè)方法的條件構(gòu)建和優(yōu)化過(guò)程較為復(fù)雜，沒(méi)有一定的專業(yè)基礎(chǔ)較難完成。而紫外吸收法雖然靈敏度并不突出，但是可以用于植物體內(nèi)多胺含量的測(cè)定，加上流動(dòng)相中的甲醇毒性較低、儀器成本較低等優(yōu)點(diǎn)，使得紫外吸收法成為當(dāng)今國(guó)內(nèi)用于測(cè)定植物多胺最常用的一種方法。

目前對(duì)于紫外吸收法檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇主要是苯甲酰氨基特征峰230 nm處、苯基特征峰254 nm處[15-16，18，23]。以上2種選擇對(duì)于多胺的檢測(cè)雖然都有一定的根據(jù)，但是對(duì)于檢測(cè)效果尚缺乏科學(xué)的比較。本研究應(yīng)用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器（HPLC-DAD）廣譜記錄光譜信息，同時(shí)針對(duì)棉花幼苗組織樣本特點(diǎn)比較230、254 nm 2種檢測(cè)波長(zhǎng)的操作性、可靠性，最終優(yōu)化建立了可應(yīng)用于UV檢測(cè)器的棉花幼苗組織樣本中3種多胺的檢測(cè)方法，并依據(jù)該方法比較棉花幼苗根、莖、葉組織內(nèi)多胺含量的差異。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試棉花種子由廊坊師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院遺傳與育種研究所提供，為農(nóng)大棉7號(hào)。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1棉花幼苗組織中多胺的提取取1.0～2.0 g棉花3葉期幼苗的不同新鮮組織，液氮研磨后加入4 mL預(yù)冷的5%高氯酸溶液，冰浴浸提1 h后離心（12 000 r/min，30 min，4 ℃）；取上清液為樣液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2樣品的苯甲?；?00 μL樣液，加入10 mL離心管中，先后加入14 μL苯甲酰氯、1 mL 2 mol/L氫氧化鈉溶液，振蕩混勻后于37 ℃水浴反應(yīng)20 min；加入2 mL飽和氯化鈉溶液，混勻后用2 mL乙醚萃取，離心（1 500 r/min，5 ℃，5 min）后取1 mL乙醚相真空干燥，用100 μL甲醇溶解后，用0.22 μm孔徑有機(jī)相濾膜過(guò)濾，即可進(jìn)樣[21]。

1.2.3色譜條件的優(yōu)化色譜儀：Agilent 1260 Infinity；色譜柱：[JP3]Agilent ZORBAX SB-C18 Stable Bond Analytical 4.6 mm×150 mm。

流動(dòng)相與流速：綜合華永有等方法[22，24]，以甲醇、水混合物為流動(dòng)相，測(cè)試甲醇體積分?jǐn)?shù)為50%～90%時(shí)不同流動(dòng)相的色譜性能，每變化10%進(jìn)樣測(cè)定1次，確定最佳流動(dòng)相比例。通過(guò)比較流動(dòng)相流速為0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mL/min的檢測(cè)效果，確定最佳流速。

檢測(cè)波長(zhǎng)：以二極管陣列檢測(cè)器收集190～900 nm區(qū)間內(nèi)的吸光度數(shù)據(jù)，重點(diǎn)比較多胺在230、254 nm下標(biāo)準(zhǔn)曲線質(zhì)量、回收率、標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，%）、峰型，再結(jié)合3種多胺的光譜信息確定適合的檢測(cè)波長(zhǎng)。

柱溫：30 ℃[21]。

時(shí)間：不限制。根據(jù)分析中雜質(zhì)的具體洗脫情況，設(shè)定合理的分析時(shí)間。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精確配制0.2 μmol/mL多胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，苯甲?；苌螅瑢?biāo)準(zhǔn)液稀釋為0.3、0.6、1.2、2.5、5.0、7.5、10.0 nmol/mL，取10 μL進(jìn)樣；用安捷倫化學(xué)工作站（Agilent ChemStation）對(duì)230、254 nm信號(hào)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，分別建立校正曲線。

1.2.5棉花葉片多胺回收率的測(cè)定取棉花葉片，抽提得到測(cè)定樣液，苯甲酰化衍生后取10 μL進(jìn)樣測(cè)定，在230、254 nm 2個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線下各自得到樣品中3種多胺的含量數(shù)據(jù)。再分別將3種不同濃度苯甲?；蟮亩喟窐?biāo)準(zhǔn)樣品加入到已知濃度的樣品多胺提取液中，并測(cè)定回收值[23]。根據(jù)樣品含量、加標(biāo)量和所測(cè)得回收值分別計(jì)算回收率及其標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.2.6棉花幼苗不同組織中多胺含量測(cè)定按照“1.2.1”“1.2.2”節(jié)中的相應(yīng)方法得到棉花幼苗根、莖、葉組織樣液，并進(jìn)行衍生化。按照試驗(yàn)最終確定的檢測(cè)條件，對(duì)棉花幼苗不同組織內(nèi)的3種多胺含量進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)3次。

2結(jié)果與分析

2.1流動(dòng)相條件的優(yōu)化

通過(guò)比較不同比例的流動(dòng)相以及不同流速下多胺的檢測(cè)效果，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相體積比V甲醇 ∶[KG-3]V水=80 ∶[KG-3]20、流速為 0.6 mL/min 時(shí)，多胺的分離度、信號(hào)峰型較好，且棉花葉片樣品中目標(biāo)峰信號(hào)與其他雜峰無(wú)明顯疊加；在此條件下，Put、Spd、Spm的保留時(shí)間分別約為5.09、9.30、17.75 min；并且，檢測(cè)樣液中存在的殘留苯甲酰氯峰（7 min左右）對(duì)檢測(cè)整體無(wú)影響（圖1）。

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

2.2.12種檢測(cè)波長(zhǎng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立與比較標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作在流動(dòng)相體積比V甲醇 ∶[KG-3]V水=80 ∶[KG-3]20，流速為 0.6 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為230、254 nm的色譜條件下進(jìn)行。數(shù)據(jù)由安捷倫化學(xué)工作站（Agilent ChemStation）處理并分別建立校正表，回歸方程見(jiàn)表1。從試驗(yàn)結(jié)果可知，230、254 nm檢測(cè)波長(zhǎng)下多胺Put、Spd、Spm回歸方程的決定系數(shù)（r2）[CM（231]均大于[KG5]0.99，說(shuō)明2種波長(zhǎng)均能夠應(yīng)用于棉花幼苗組織[CM）]

內(nèi)多胺含量的測(cè)定；但是通過(guò)比較可以看出，波長(zhǎng)為 230 nm 時(shí)回歸方程的r2均高于波長(zhǎng)為254 nm下的r2。因此本研究表明，從標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)的角度考量，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm 要優(yōu)于254 nm。

2.2.22種檢測(cè)波長(zhǎng)下回收率標(biāo)準(zhǔn)偏差的測(cè)定由表2可以看出，在230 nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，Put、Spd、Spm的平均回收率均在95%以上，分別為98.58%、96.98%、99.62%，RSD分別為1.56%、0.78%、0.95%。當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm時(shí)，回收率均超過(guò)100.00%，且該檢測(cè)波長(zhǎng)下RSD較高，分別為540%、9.49%、2.93%。說(shuō)明當(dāng)檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm時(shí)，盡管有較高的回收率，但是檢測(cè)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性下降，檢測(cè)誤差增大。因此，從回收率RSD的角度評(píng)價(jià)可知：230 nm較254 nm更適合作為檢測(cè)波長(zhǎng)測(cè)定棉花樣品中的多胺含量。

2.2.32種檢測(cè)波長(zhǎng)下的峰型比較如圖2所示，比較230、254 nm下棉花幼葉等量程色譜圖可以發(fā)現(xiàn)：檢測(cè)波長(zhǎng)為 230 nm 時(shí)，3種多胺的響應(yīng)值較大，雖然同時(shí)也增大了部分雜質(zhì)及副反應(yīng)的響應(yīng)峰值，但是目標(biāo)峰仍然明顯；254 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，雖然雜質(zhì)響應(yīng)較小，但是3種多胺的信號(hào)響應(yīng)值同樣較低。

2.2.43種多胺的吸收光譜信息用二極管陣列檢測(cè)器（DAD）分別收集3種多胺信號(hào)峰在波長(zhǎng)190～900 nm的光譜信息。由圖3可見(jiàn)，3種多胺在200 nm處有最高吸收峰，230 nm 左右均有明顯的第2吸收峰。由于多種物質(zhì)在 200 nm 處均存在光譜吸收峰，可使基線漂移嚴(yán)重，而在 230 nm 的第2吸收峰附近雜質(zhì)相應(yīng)明顯減少（圖4）。因此根據(jù)3種多胺各自的光譜信息分析可知：選擇檢測(cè)波長(zhǎng)在230 nm左右的第2吸收峰要優(yōu)于其他波長(zhǎng)。

[CM（24]綜上所述，棉花幼苗組織內(nèi)3種多胺含量的色譜檢測(cè)應(yīng)[CM）]

2.3分析時(shí)間的確定

在棉花幼葉樣品的不限時(shí)檢測(cè)中，保留時(shí)間在30～32 min 仍有不規(guī)則雜峰（圖2、圖4），而32 min后信號(hào)基本回歸基線。因此，為洗脫雜質(zhì)的同時(shí)保留完整數(shù)據(jù)，設(shè)定單針樣品的分析時(shí)間為35 min，且無(wú)后運(yùn)行為宜。

2.4棉花幼苗不同組織的多胺含量比較

依據(jù)前期試驗(yàn)結(jié)果得出：流動(dòng)相體積比為V甲醇 ∶[KG-3]V水=80 ∶[KG-3]20、流速為0.6 mL/min、檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm為最適合的色譜條件。對(duì)棉花根、莖、葉組織進(jìn)行3種多胺含量的測(cè)定，結(jié)果表明，多胺在棉花幼苗組織中含量普遍偏少，響應(yīng)值較低，均在nmol/g水平。如表3所示，所測(cè)組織中Spd含量最高，在不同組織內(nèi)的含量均高于Put、Spm含量；另外，棉花幼苗葉片組織中的3種多胺總含量為（41.90±1.56） nmol/g，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于根的（18.18±2.61） nmol/g、莖的（12.97±2.52） nmol/g。

3結(jié)論與討論

3.1色譜條件的優(yōu)化

以往研究表明，多胺的次級(jí)胺基與柱子硅羥基的相互作用，可引起在不同的流動(dòng)相條件下，保留時(shí)間會(huì)產(chǎn)生較大變化[23]。本研究選擇流動(dòng)相體積比V甲醇 ∶[KG-3]V水=80 ∶[KG-3]20，可以減少洗脫時(shí)間、降低分析時(shí)間。采用流速為0.6 mL/min，即可將樣品中各個(gè)組分比較清晰地分離開來(lái)。以上結(jié)果優(yōu)化了之前報(bào)道的相關(guān)方法[15，22，24]，得出了專門針對(duì)棉花幼苗組織內(nèi)多胺含量檢測(cè)的可靠色譜條件。

有報(bào)道顯示，衍生化過(guò)程中的苯甲酰氯殘留會(huì)對(duì)多胺色譜分析產(chǎn)生一定影響[24]。本試驗(yàn)表明，Put、Spd、Spm的保留時(shí)間分別為5.09、9.61、17.75 min，苯甲酰氯的保留時(shí)間約為7.21 min，避免了苯甲酰氯、腐胺的峰重疊現(xiàn)象，并且3種多胺信號(hào)與組織樣品中其他雜峰信號(hào)互不干擾。

3.2檢測(cè)波長(zhǎng)的比較

對(duì)于目前檢測(cè)多胺含量常用的2種檢測(cè)波長(zhǎng)230、254 nm，筆者所在實(shí)驗(yàn)室以二極管陣列檢測(cè)器收集190～900 nm 區(qū)間內(nèi)吸光度數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)：3種多胺檢測(cè)波長(zhǎng)約為 230 nm 時(shí)，均為第2高吸收峰，且苯甲酰氨基的顯色受多胺脂肪鏈及其他副反應(yīng)雜質(zhì)的影響不大；而以254 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，雖然雜質(zhì)響應(yīng)較小，但3種主要多胺的信號(hào)響應(yīng)值同樣較小，使標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)性等降低。因此，在多胺本底水平比較低的棉花幼苗上不適用254 nm波長(zhǎng)，選擇 230 nm 波長(zhǎng)為宜。

3.3優(yōu)化的方法以及所得檢測(cè)結(jié)果分析

如前文所述，最終確定最佳色譜條件：檢測(cè)波長(zhǎng)為 230 nm，流動(dòng)相體積比為V甲醇 ∶[KG-3]V水=80 ∶[KG-3]20，流速為 0.6 mL/min。

按照以上方法，棉花幼苗組織多胺含量檢測(cè)結(jié)果顯示，幼苗期棉花組織內(nèi)Spd含量在3種多胺中最高。該結(jié)果可能表明，在植株的快速生長(zhǎng)期，Spd起一些重要的作用[25-26]。在棉花組培苗組織內(nèi)多胺的研究中，Spd在球形胚形成期含量顯著升高，明顯高于Put、Spm，報(bào)道中對(duì)這些現(xiàn)象的解釋是高水平Spd可能有助于細(xì)胞分化[27-28]，但是具體的代謝以及調(diào)控方式正在進(jìn)一步研究中。

參考文獻(xiàn)：

[1]沈佐君，楊樹德. 多胺的測(cè)定方法及其臨床應(yīng)用[J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，1994，15（5）：226-230.

[2]Gerner E W，Meyskens F L. Polyamines and cancer：Old molecules，new understanding[J]. Nature Reviews Cancer，2004，4（10）：781-792.

[3]趙福庚，劉友良. 高等植物體內(nèi)特殊形態(tài)多胺的代謝及調(diào)節(jié)[J]. 植物生理學(xué)通訊，2000，36（1）：1-6.

[4]黃作喜，謝寅峰，胥偉，等. 黃瓜去根苗離體培養(yǎng)條件下多胺對(duì)雌花形成的影響[J]. 南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，32（4）：147-150.

[5]Luo H，Zheng Z，Lin S，et al. Changes in endogenous hormones and polyamine during sexual differentiation of lychee flower[J]. Acta Horticulturae，2005；665：203-208.

[6]Xu C L，Jin Z Y，Yang S Q. Polyamines induced by heat treatment before cold-storage reduce mealiness and decay in peach fruit[J]. [JP3]Journal of Horticultural Science & Biotechnology，2005，80（5）：557-560.

[7]Liu H P，Dong B H，Zhang Y Y，et al. Relationship between osmotic stress and the levels of free，conjugated and bound polyamines in leaves of wheat seedlings[J]. Plant Science，2004，166（5）：1261-1267.

[8]Groppa M D，Ianuzzo M P，Tomaro M L，et al. Polyamine metabolism in sunflower plants under long-term cadmium or copper stress[J]. Amino Acids，2007，32（2）：265-275.

[9]袁祖麗，劉秀敏，李華鑫. 多胺與環(huán)境脅迫關(guān)系研究進(jìn)展[J]. 西北植物學(xué)報(bào)，2008，28（9）：1912-1919.[ZK）]

[10]Drolet G，Dumbroff E B，Legge R L，et al. Radical scavenging properties of polyamines[J]. Phytochemistry，1986；25（2）：367-371.

[11]Childs A C，Mehta D J，Gerner E W. Polyamine-dependent gene expression[J]. Cellular and Molecular Life Sciences，2003，60（7）：1394-1406.

[12]趙福庚，劉友良. 高等植物體內(nèi)特殊形態(tài)多胺的代謝及調(diào)節(jié)[J]. 植物生理學(xué)報(bào)，2000，36（1）：1-6.

[13]Tiburcio A F，Altabella T，F(xiàn)lores D，et al. Polyamines in health and nutrition[M]. Boston：Kluwer Academic Publishers，1999：161-176.

[14]吉曉佳，張大棟，劉友良，等. 植物源食品多胺的作用及其含量調(diào)節(jié)[J]. 植物學(xué)通報(bào)，2002，19（4）：504-509.

[15]程文翰，朱華國(guó)，李鵬飛，等. 棉花多胺HPLC的測(cè)定方法優(yōu)化及其在體細(xì)胞胚胎發(fā)生過(guò)程中的變化規(guī)律[J]. 棉花學(xué)報(bào)，2014，26（2）：138-144.

[16]Nikolaus S. Polyamines[M]. New York：Academic Press，1983：3-9.

[17]Chen G G，Turecki G，Mamer O A. A quantitative GC-MS method for three major polyamines in postmortem brain cortex[J]. Journal of Mass Spectrometry，2009，44（8）：1203-1210.

[18]Redmond J W，Tseng A. High-pressure liquid chromatographic determination of putrescine，cadaverine，spermidine and spermine[J]. Journal of Chromatography A，1979；170（2）：479-481.

[19]Flores H E，Galston A W. Analysis of polyamines in higher plants by high performance liquid chromatography 1[J]. Plant Physiol，1982；69（3）：701-706.

[20]吳少伯，郭楓. 水稻胚和胚乳中多胺高效液相色譜分離[J]. 色譜，1989，7（6）：389-391.

[21]杜軍英，孫秉庸，陳兆珍，等. OPA-巰基乙醇柱前衍生反相高效液相色譜法測(cè)定生物組織中多胺含量[J]. 解放軍醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，1997，25（1）：50-53.

[22]華永有，周芬霞，林宏琳，等. HPLC-FLD法檢測(cè)黃酒中9種生物胺[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014，24（6）：761-764.

[23]馬寶龍，屈旭斌. 高效液相色譜法測(cè)定枸杞葉中精胺和亞精胺[J]. 寧夏工程技術(shù)，2011，10（1）：48-50.

[24]劉俊，吉曉佳，劉友良. 檢測(cè)植物組織中多胺含量的高效液相色譜法[J]. 植物生理學(xué)通訊，2002，38（6）：596-598.

[25]魯瑩，束勝，朱為民，等. 多胺緩解硝酸鈣對(duì)小白菜幼苗生長(zhǎng)抑制的作用[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2015，31（2）：422-428.

[26]楊立飛，魏國(guó)平，朱月林. 外源亞精胺對(duì)NaC1脅迫下菜用大豆多胺合成及膜脂過(guò)氧化的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（1）：114-117.

[27]杜玉梁，陳葉，劉彩虹，等. 植物維管組織形態(tài)建成的分子調(diào)控機(jī)制[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36（3）：142-150.

[28]劉華英，蕭浪濤，魯旭東，等. 伏令夏橙愈傷組織體細(xì)胞胚發(fā)生中多胺水平的變化[J]. 植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào)，2005，31（3）：275-280.

[FK（H02642/3。54ZQ]

〖HTH〗更正：《江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)》2016年第44卷第6期338-340頁(yè)所刊論文《不同組合尼羅羅非魚和奧利亞羅非魚的繁育比較》，第一作者應(yīng)該為黃培鈴，特此更正。