劉春生+黃仲義+湯曉樞

摘 要 目的：優(yōu)化改進(jìn)甲狀腺片的生產(chǎn)工藝。方法：采用凍干脫水法制備甲狀腺原料、沸騰制粒法制備甲狀腺片。結(jié)果：改進(jìn)的凍干脫水法及沸騰制粒工藝，大大改善了甲狀腺片中主要成分碘塞羅寧（T3）、左甲狀腺素（T4）的含量均勻度，制得的甲狀腺片符合2015版中國藥典規(guī)定。結(jié)論：改進(jìn)的甲狀腺片工藝穩(wěn)定可靠，易于工業(yè)化生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞 甲狀腺片 碘塞羅寧 左甲狀腺素 含量均勻度

中圖分類號：R282.74； R944.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533（2017）01-0076-04

Study on the processes for the preparation of thyroid tablets

LIU Chunshen1， HUANG Zhongyi 2*， TANG Xiaoshu 1（1. Shanghai Greatwall Pharmaceutical CO. LTD.， Shanghai 201707， China； 2. Shanghai Jingan Central Hospital， Shanghai 200040， China）

ABSTRACT Objective： To improve and optimize the processes for the production of thyroid tablets. Methods： Thyroid raw material was prepared by freeze-drying and thyroid tablets were granulated by boiling granulation. Results： The uniformity of liothyronine （T3） and levothyroxine （T4） in the thyroid tablets was greatly improved by the improved processes and the prepared thyroid tablets were confirmed by the provisions of Chinese pharmacopoeia 2015. Conclusion： The improved processes for the production of thyroid tablet are stable and reliable and can be easily applied to the industrial production.

KEY WORDS thyroid tablets； liothyronine； levothyroxine； uniformity of dosage units

甲狀腺片（thyroid tablets）系取自豬、牛、羊等食用動物的甲狀腺體制成，其主要有效成分為左甲狀腺素（levothyroxine，T4）和碘塞羅寧（liothyronine，T3）兩種甲狀腺激素。甲狀腺片在國外使用已超過100年[1]，1892年，人類已經(jīng)使用動物甲狀腺提取物用于治療甲減，取得了非常良好的效果，制劑即為甲狀腺片，并被收載于美國藥典。國外的甲狀腺片一般簡稱為NDT（natural desiccated thyroid）或DTE（desiccated thyroid extract），具有促進(jìn)分解代謝（升熱作用）和合成代謝的作用，對人體正常代謝及生長發(fā)育有重要影響，主要用于各種原因引起的甲狀腺功能減退癥、黏液性水腫、甲狀腺癌及甲狀腺抑制癥的治療。

原有中國藥典標(biāo)準(zhǔn)以甲狀腺片中化合物碘的含量作為質(zhì)控指標(biāo)，含量限度范圍較大，生物效價不穩(wěn)定。多篇文獻(xiàn)報道了甲狀腺片在國內(nèi)臨床的使用情況，在肯定甲狀腺片的臨床療效的同時，也指出了甲狀腺片生物效價缺乏穩(wěn)定性而造成的療效差異大[2-6]。有文獻(xiàn)更是呼吁須提高甲狀腺片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以解決該問題[7]。1985年，美國藥典對于甲狀腺片標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了修改，改為以甲狀腺片的藥效成分T3、T4作為質(zhì)控指標(biāo)，這樣可保證甲狀腺片的穩(wěn)定性及臨床有效性。2015版中國藥典參照美國藥典又對甲狀腺片標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了較大幅度的修訂，除了須控制甲狀腺片的藥效成分T3、T4外，還增加了T3、T4的含量均勻度的檢查，相較于美國藥典對化合物碘的均勻度要求，該項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)更加嚴(yán)格，能更好地保證甲狀腺片的產(chǎn)品穩(wěn)定性及臨床有效性。

2015版中國藥典規(guī)定：每片甲狀腺片按甲狀腺粉的標(biāo)示量計算，每1 mg中T3與T4的含量須分別為0.13～0.15 μg和0.52～0.64 μg[8]，即在理論片重為78 mg的甲狀腺片中應(yīng)含T4 20.8～25.6 μg、T3 5.2～6.0 μg，主要藥效成分T3和T4各占制劑片重的0.007%和0.030%；同時還增加了含量均勻度檢查項(xiàng)，規(guī)定每片甲狀腺片中T3和T4的均勻度應(yīng)符合A+2.20S<20.0。這對于一個傳統(tǒng)的動物來源的生化藥來說，面臨著比微量化學(xué)藥品還要嚴(yán)格的挑戰(zhàn)。本研究通過優(yōu)化甲狀腺體脫水、脫脂工藝，解決了甲狀腺原料纖維性、粒度粗且流動性差的問題，采用沸騰制粒工藝，有效地提高了甲狀腺片的含量均勻度，篩選出適合工業(yè)化生產(chǎn)的處方工藝，生產(chǎn)出了符合新版藥典規(guī)定的甲狀腺片。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

LYO-50 m2凍干機(jī)（上海東富龍科技股份有限公司）；F-30B萬能粉碎機(jī)（江蘇瑰寶集團(tuán)有限公司）；FL-120沸騰制粒機(jī)（上海華發(fā)制藥機(jī)械成套發(fā)展公司）；ZP37旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)（北京國藥龍立科技有限公司）；BGB-150B高效包衣機(jī)（浙江小倫制藥機(jī)械有限公司）；Agilent 1100液相色譜儀，DAD檢測器、自動進(jìn)樣器（安捷倫科技中國有限公司）。Sartorius BP121S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）。

1.2 試藥與試劑

豬甲狀腺體（臨沂市順達(dá)肉聯(lián)廠），丙酮（上海天蓮化工科技有限公司），蔗糖和糊精（嘉興白浪淀粉制品有限公司），淀粉（山東聊城阿華制藥公司），硬脂酸鎂（湖州展望藥業(yè)有限公司），歐巴代包衣粉（上?？房蛋录夹g(shù)公司）。

碘塞羅寧、左甲狀腺素對照品（U.S. Pharmacopeia）、鏈霉蛋白酶P5147（Sigma-Aldrich）、三羥甲基氨基甲烷、他巴唑（百靈威科技有限公司）。乙腈為色譜純，水為超純水，鹽酸及其他試劑均為分析純。

1.3 處方與工藝

1.3.1 甲狀腺原料的制備

甲狀腺體經(jīng)整理除去結(jié)締組織與脂肪后，用絞肉機(jī)（網(wǎng)眼板φ 3～4 mm）將腺體絞成漿狀并重復(fù)一次。將甲狀腺體漿液裝入凍干盤，置于凍干機(jī)中凍干（真空度-0.01 Mpa），凍干流程見表1。

用萬能粉碎機(jī)將凍干脫水后的甲狀腺體打成甲狀腺粗粉，然后倒入夾層鍋內(nèi)，邊攪拌邊加入適量的丙酮，室溫冷浸攪拌提取8 h，沉淀物用尼龍布網(wǎng)眼筐過濾、瀝干，待粉末蓬松后送烘房進(jìn)行真空干燥（55±5 ℃，真空度-0.08 Mpa以上）。

1.3.2 處方

甲狀腺片的規(guī)格為40 mg/片，經(jīng)凍干脫水、丙酮脫脂的甲狀腺原料含量超過藥典規(guī)定的含量限度（每1 g中含T3、T4分別為0.13～0.15 mg、0.52～0.64 mg）。選用蔗糖粉進(jìn)行稀釋，調(diào)節(jié)甲狀腺原料的含量至藥典規(guī)定范圍后投料。其它輔料為糊精、淀粉、硬脂酸鎂、歐巴代包衣粉。

1.3.3 制備工藝

將處方各物料置于沸騰制粒機(jī)內(nèi)混合均勻，邊混合邊加熱，保持進(jìn)風(fēng)溫度60～70 ℃，噴入5%的淀粉漿液制成適宜顆粒，干燥，當(dāng)出風(fēng)溫度達(dá)到30～40 ℃時出料，整粒并加入硬脂酸鎂混合均勻。測定顆粒中T3和T4的含量，計算應(yīng)壓片重；沖模規(guī)格選用6 mm淺平?jīng)_，按應(yīng)壓片重壓片，將合格片芯倒入高效包衣鍋內(nèi)，噴制胃溶型衣膜，按理論增重3%包衣。

1.3.4 檢測方法

HPLC和含量均勻度測定、供試品和對照品溶液制備均按2015版藥典操作[8]。

2 結(jié)果

2.1 甲狀腺原料制備

按原有工藝生產(chǎn)的甲狀腺原料（批號：20141101），依照2015版藥典標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了T3、T4含量測定及含量均勻性檢查，甲狀腺原料含量符合新標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，但10個取樣點(diǎn)的相對偏差非常大，T3 和T4的含量RSD%分別超過10%和20%，這會直接影響甲狀腺片制劑的含量及含量均勻度（表2）。

采用新凍干工藝進(jìn)行甲狀腺體脫水后的甲狀腺體呈多孔海綿狀結(jié)構(gòu)。通過預(yù)凍處理，使得甲狀腺體內(nèi)部形成了規(guī)定的固體骨架，水分升華蒸發(fā)后，固體骨架基本保持不變，其收縮率大大低于其他脫水干燥的方式，而外形幾乎與凍干脫水前一樣，且凍干后多孔海綿狀的結(jié)構(gòu)非常有利于粉碎過篩，其1次粉碎后粉末粒度均小于60目，且均一。采用新原料制備工藝生產(chǎn)的甲狀腺原料（批號：20150102），依照2015版藥典標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了T3、T4含量測定，結(jié)果表明，甲狀腺粉原料含量符合新藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定， 10個取樣點(diǎn)的相對偏差較原工藝明顯改善，T3、T4的含量均勻性RSD%均小于2.0%（表2）。

2.2 制粒工藝及檢測結(jié)果

對按新工藝生產(chǎn)制備的甲狀腺片（批號：20150401）的含量及含量均勻度進(jìn)行測定，結(jié)果表明，工藝優(yōu)化后生產(chǎn)的甲狀腺片中主要藥效成分T3、T4含量均符合2015版藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，且T3、T4的A+2.20S均符合含量均勻度檢查的規(guī)定（表3、圖1）。

3 討論

3.1 甲狀腺原料工藝優(yōu)化的意義

甲狀腺體為類似于肌肉的組織，每1 kg甲狀腺體中含水率超過70%，含脂肪量約為5%～10%，其余為蛋白質(zhì)成分、無機(jī)鹽。按原有的甲狀腺原料工藝，在丙酮脫水時，甲狀腺體內(nèi)的大量水分被快速脫去，體積迅速縮小，且會導(dǎo)致表面蛋白質(zhì)迅速變性，無機(jī)鹽等物質(zhì)隨水分快速向表面遷移并析出，使甲狀腺體表面硬化，導(dǎo)致了較難完全粉碎。所以肌肉組織脫水后易粉碎為纖維狀組織，蓬松但粒度大，不易切斷為粒度較細(xì)的顆粒狀粉末。

甲狀腺原料的含量均一性直接決定了甲狀腺片的質(zhì)量及均勻度。我們對按原有工藝生產(chǎn)的甲狀腺粉原料進(jìn)行篩目分析，結(jié)果粒徑大于40目的粗粉比例約為10%～15%，40目與60目之間細(xì)粉比例為15%～20%，小于60目的細(xì)粉比例為65%～70%。而甲狀腺片中使用的輔料粒度均小于80目，較大的粒度差異是造成甲狀腺片T3、T4含量不均勻的主要原因。參考多篇文獻(xiàn)[9-11]采用凍干工藝脫水后，其粉碎后粒徑均小于60目，且粒度均一，甲狀腺原料中的T3、T4的含量均勻性大幅提高，保證了甲狀腺片中T3、T4的含量均勻性。

原有工藝采用丙酮熱回流脫水、乙醚熱回流脫脂的工藝，其熱回流的溫度均為60 ℃，且須2次脫水、2次脫脂，回流時間為32 h。甲狀腺體長期處于60 ℃的高溫條件，其主要成分T4含量不穩(wěn)定。工藝優(yōu)化為凍干法脫水后，凍干步驟的最高溫度為35 ℃，且不使用有機(jī)溶劑。采用冷浸攪拌脫脂工藝，有機(jī)溶劑用量由原有8倍量降低為5倍量，脫脂的時間由16 h降低為8 h。甲狀腺體脫水、脫脂步驟的溫度均≤35 ℃，保證了熱不穩(wěn)定性主要成分T4的含量穩(wěn)定性。

3.2 甲狀腺片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高的臨床意義

臨床文獻(xiàn)[2-6]報道了甲狀腺片用于治療甲減的臨床使用情況。甲狀腺片同時含有體內(nèi)必需的甲狀腺激素T3、T4，可以直接補(bǔ)充患者體內(nèi)缺乏的甲狀腺激素，尤其是T3，且甲狀腺片對于受損傷的甲狀腺組織可以起到抗原修復(fù)與組織保護(hù)作用。本次藥典標(biāo)準(zhǔn)的提高，采用有效成分T3、T4作為質(zhì)量控制的指標(biāo)，并增加了T3、T4的含量均勻度的檢查，甲狀腺片的質(zhì)量控制手段已與左甲狀腺素鈉片（LT4）基本一致，徹底解決了甲狀腺片因批間生物效價差異而造成的療效差異這一難題，也催生了甲狀腺片工藝研究、生產(chǎn)控制的全面創(chuàng)新。經(jīng)我們對甲狀腺片生產(chǎn)工藝的研究和改進(jìn)，達(dá)到了簡化生產(chǎn)工藝、易于工業(yè)化生產(chǎn)的目的，產(chǎn)品符合2015年版中國藥典關(guān)于甲狀腺片含量均勻度的規(guī)定，將有利于甲狀腺片臨床使用的有效及安全。

3.3 甲狀腺片中的其他成分

甲狀腺片的含量測定圖譜中除T3、T4外還有一些其他物質(zhì)的峰（圖1B），它們與原工藝生產(chǎn)的片劑色譜圖一致，可能為豬源蛋白、MIT、DIT、rT3及無機(jī)碘化合物的吸收峰。

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